用于酶促A1C检测和定量的样品制备系统和方法技术方案

用于制备含有血红蛋白HbAlc的样品用于通过电化学传感器测量的系统包括裂解制剂，该裂解制剂包括两性离子表面活性剂。该系统进一步包括氧化制剂，该氧化制剂包括阳离子表面活性剂和异噻唑啉衍生物以及蛋白酶制剂，该蛋白酶制剂包括包含唑的分子。

Sample preparation system and method for enzymatic A1C detection and quantification

A system for preparing a sample containing hemoglobin HbAlc for measurement by an electrochemical sensor includes a lysate, which includes an amphoteric surfactant. The system further comprises an oxidizing preparation including a cationic surfactant, isothiazoline derivative and a protease preparation including a molecule containing a azole.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于酶促A1C检测和定量的样品制备系统和方法
技术介绍
对于各种血液分析物和体液中的其它可检测量度的即时护理(“POC”)和家庭测试对于患者和医生是期望的。一种此类分析物是A1C，一类糖基化血红蛋白。高水平的血糖导致遍及全身的蛋白质包括血红蛋白的过度糖基化。血红蛋白的糖基化主要发生在β链的氨基末端处以及具有游离氨基的其它位点。血红蛋白A经历由葡萄糖的缓慢糖基化，其取决于在红血细胞的120天寿命内葡萄糖的时间平均浓度。糖基化血红蛋白A的最普遍和最有特色的种类是A1C，占健康个体中的总血红蛋白的大约3％至6％。A1C与血糖水平的相关性使其成为用于监测患有糖尿病的人中的长期血糖水平的有用方法。平均(平均值)血糖水平(MBG)是A1C水平的函数，且因此可推导。
技术实现思路
在一个实施方案中，用于制备通过电化学传感器测量的含有血红蛋白A1C的样品的系统包括裂解制剂，该裂解制剂包括两性离子表面活性剂。该系统进一步包括氧化制剂，该氧化制剂包括阳离子表面活性剂和异噻唑啉衍生物以及蛋白酶制剂，该蛋白酶制剂包括包含唑的分子。在替代实施方案中，两性离子表面活性剂可以是另一种表面活性剂。在一个替代方案中，两性离子表面活性剂是Zwittergent3-14。在另一个替代方案中，阳离子表面活性剂是1-十二烷基氯化吡啶鎓，并且异噻唑啉衍生物是1,2-苯并异噻唑-3(2H)-酮。可替代地，蛋白酶制剂包括中性蛋白酶。在一个替代方案中，唑是咪唑。任选地，咪唑在pH7.5下为1M。可替代地，该系统包括取样器/混合器装置，并且裂解制剂位于取样器/混合器装置中。在另一替代方案中，该系统包括测试条，并且氧化制剂和蛋白酶制剂位于测试条中。在一个实施方案中，用于测定血红蛋白如HbAlC的糖基化百分比的系统包括第一电化学测试区域，该第一电化学测试区域提供了HbAlC的浓度；以及第二电化学测试区域，该第二电化学测试区域提供了血红蛋白的总量。该系统进一步包括裂解制剂，该裂解制剂包括两性离子表面活性剂。该系统进一步包括氧化制剂，该氧化制剂包括阳离子表面活性剂和异噻唑啉衍生物以及蛋白酶制剂，该蛋白酶制剂包括包含唑的分子。在一个替代方案中，第一电化学测试区域包括具有果糖基氨基酸氧化酶或果糖基肽氧化酶涂层的测试条。在另一个替代方案中，第一电化学测试区域包括三氯化六胺合钌介质。在另外一个替代方案中，第一电化学测试区域包括铁氰化物介质。可替代地，两性离子表面活性剂是Zwittergent3-14。在另一个替代方案中，阳离子表面活性剂是1-十二烷基氯化吡啶鎓，并且异噻唑啉衍生物是1,2-苯并异噻唑-3(2H)-酮。可替代地，蛋白酶制剂包括中性蛋白酶。在一个替代方案中，唑是咪唑。任选地，咪唑在pH7.5下为1M。在一个替代方案中，咪唑为0.5至2M。在另一个替代方案中，咪唑的pH为6-8。可替代地，该系统包括取样器/混合器装置，并且裂解制剂位于取样器/混合器装置中。在另一个替代方案中，该系统包括测试条，并且氧化制剂和蛋白酶制剂位于测试条中。在一个实施方案中，制备用于电化学血红蛋白AlC测定的样品的方法包括接受血液样品。该方法进一步包括用裂解制剂裂解血液样品中的红血细胞，该裂解制剂包括两性离子表面活性剂。该方法进一步包括用氧化制剂氧化血液样品中的血红蛋白，该氧化制剂包括阳离子表面活性剂和异噻唑啉衍生物。该方法进一步包括用蛋白酶制剂消化血红蛋白，该蛋白酶制剂包括包含唑的分子。在一个替代方案中，两性离子表面活性剂是Zwittergent3-14。在另一个替代方案中，阳离子表面活性剂是1-十二烷基氯化吡啶鎓，并且异噻唑啉衍生物是1,2-苯并异噻唑-3(2H)-酮。可替代地，蛋白酶制剂包括中性蛋白酶。在一个替代方案中，唑是咪唑。附图说明图1显示了使用4％十二烷基氯化吡啶鎓的血红蛋白氧化的滴定测量结果的图；图2显示了通过向裂解的血液中添加1,2-苯并异噻唑啉的血红蛋白氧化的滴定测量结果的图；图3显示了当使用十二烷基氯化吡啶鎓和1,2-苯并异噻唑啉两者时，血红蛋白氧化的滴定测量结果的图；图4显示了将pH保持在7.5下的咪唑的滴定图；图5显示了具有不同水平的咪唑的剂量应答图的图；图6显示了如何使用献血者来测量内源性F-VH的图；图7显示了使用1M咪唑作为稀释剂的稀释比较的图；图8显示了与电化学测试仪的安培数相比，表示为果糖基-L-缬氨酰组氨酸的假设血红蛋白水平的图；图9显示了用于HbAlc的电化学测试条的一个实施方案。具体实施方案某些术语在本文中使用仅为了方便起见，而不应视为对用于HbAlc的酶促检测和定量的样品制备系统和方法的实施方案的限制。本文所述的制备技术以及酶促检测和定量技术使得HbAlc的电化学检测成为可能。在附图中，在几个图自始至终，相同的附图标记用于指定相同的元件。当葡萄糖结合血红蛋白的β链的N末端缬氨酸残基时，形成血红蛋白A1C。HbAlc在总血红蛋白中的百分比描述了最近三个月平均血糖测量的过程。它是糖尿病患者已将其糖尿病控制得如何好或如何差的指示剂，并且也可以是糖尿病前期的指示剂。测量HbA1c使测量血红蛋白和糖基化血红蛋白成为必需，因为HbA1c被测量为总血红蛋白的百分比。血红蛋白可以用电化学方法测量，因为它能够与果糖基-L-缬氨酰组氨酸(F-VH)电化学反应(用果糖基氨基酸氧化酶作为酶或可替代地果糖基肽氧化酶)。这仅仅是电化学反应方案的实例，并且本文描述的许多技术可以与其它电化学测量方案一起使用。仅仅HbAlc的电化学反应不足以产生商业上可行的测定。这是因为全血样品不能立即提供待测量的HbAlc的可用性。然而，释放HbAlc的系统和方法可以引起测定的各个方面的干扰。因此，为了提供可以对全血起作用的系统，可能需要多种技术来释放HbAlc。在许多实施方案中，酶促HbAlc测定涉及的步骤包括下述：1.裂解红血细胞。2.氧化血红蛋白。3.允许蛋白酶消化血红蛋白以释放F-VH。4.使F-VH与果糖基肽氧化酶反应。5.测量F-VH的反应。如所述的，相关申请提供了F-VH如何在电化学测试条上反应。此处所述的测试用电化学传感器进行测试，其中将试剂干燥以测试F-VH。关于下述测试的实验设置由将全血加入含有裂解试剂、氧化试剂或蛋白酶的试剂中组成。然后将该溶液计量加入电化学传感器上。在许多实施方案中，提供测定中的第一步是裂解红血细胞。在许多实施方案中，可以使用表面活性剂来完成RBC裂解。可以获得许多表面活性剂，并且一些表面活性剂在裂解RBC方面更好或更有效。表面活性剂可以是非离子的、阴离子的、阳离子的或两性离子的。基于研究和实验，在一个实施方案中，使用两性离子表面活性剂，因为它将稍微变性的血红蛋白保持在溶液中。其它表面活性剂将裂解细胞，但Zwittergent3-14看起来保持血红蛋白从溶液中脱离，并且不能与蛋白酶反应。这是表面活性剂的重要特征。Zwittergent3-14的化学式为C19H41N03S，并且具有正十四烷基-N本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于制备通过电化学传感器测量的含有血红蛋白HbAlc的样品的系统，所述系统包括：/n裂解制剂，所述裂解制剂包括两性离子表面活性剂；/n氧化制剂，所述氧化制剂包括阳离子表面活性剂和异噻唑啉衍生物；/n蛋白酶制剂，所述蛋白酶制剂包括包含唑的分子。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于制备通过电化学传感器测量的含有血红蛋白HbAlc的样品的系统，所述系统包括：
裂解制剂，所述裂解制剂包括两性离子表面活性剂；
氧化制剂，所述氧化制剂包括阳离子表面活性剂和异噻唑啉衍生物；
蛋白酶制剂，所述蛋白酶制剂包括包含唑的分子。


2.权利要求1的系统，其中所述两性离子表面活性剂是Zwittergent3-14。


3.权利要求2的系统，其中所述阳离子表面活性剂是1-十二烷基氯化吡啶鎓，并且所述异噻唑啉衍生物是1,2-苯并异噻唑-3(2H)-酮。


4.权利要求3的系统，其中所述蛋白酶制剂包括中性蛋白酶。


5.权利要求4的系统，其中所述唑是咪唑。


6.权利要求5的系统，其中所述咪唑在0.5M至2M的范围内并且在6-8的pH下。


7.权利要求6的系统，其中所述系统包括取样器/混合器装置，并且所述裂解制剂位于所述取样器/混合器装置中。


8.权利要求7的系统，其中所述系统包括测试条，并且所述氧化制剂和所述蛋白酶制剂位于所述测试条中。


9.一种用于测定血红蛋白如HbAlC的糖基化百分比的系统，所述系统包括：
第一电化学测试区域，所述第一电化学测试区域提供HbAlC的浓度；以及
第二电化学测试区域，所述第二电化学测试区域提供血红蛋白的总量；
裂解制剂，所述裂解制剂包括两性离子表面活性剂；
氧化制剂，所述氧化制剂包括阳离子表面活性剂和异噻唑啉衍生物；
蛋白酶制剂，所述蛋白酶制剂包括包含唑的分子。


10.权利要求9的系统，其中所述第一电化学测试区域包括具有选自果糖基氨基酸氧化酶和果糖基肽氧化酶的涂层的测试条。


11.权利要求10的系统，其中所述第一电化学测试区域包括三氯化六胺...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·L·休斯，B·维尔纳，
申请(专利权)人：聚合物技术系统公司，
类型：发明
国别省市：美国;US