鸡肉中链霉素标准样品、制备方法及应用技术

本发明专利技术提供一种鸡肉中链霉素标准样品的制备方法及应用，属于分析化学技术领域。用含有链霉素的饲料饲喂鸡，使活鸡体内组织中含有链霉素，给药结束后，将鸡处死，除去毛皮，给药结束后宰杀取肌肉，均质匀浆，制成肉糜，真空冷冻干燥，过筛装瓶封装，得到含有链霉素的鸡肉冻干粉标准样品。该方法解决了目标物和基体结合情形与真实检测样品不完全一致而导致提取、净化等处理结果与日常分析样本存在较大差异的问题，标准样品为实物标准样品，均匀稳定，无防腐剂及抗氧化剂，易保存，用于链霉素类药物残留测试项目的能力验证、检测方法的验证、测试仪器的校准、测试结果的质量控制与考核。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分析化学领域，涉及一种兽药残留的自然基体标准样品的制备，具体地说，涉及一种鸡肉中链霉素残留基体冻干粉标准样品及其制备方法与应用。
技术介绍
链霉素(streptomycin)是在1944年从灰链霉菌的培养液中提取的抗菌素，分子式为C21H39N7O12，分子量为581，白色粉末，水溶性在pH值3至7下对热比较稳定，有盐酸盐和硫酸盐等产品。链霉素属于氨基糖甙碱性化合物，是一种抗生的有机碱，能有效地抵抗许多细菌，它与结核杆菌菌体核糖核酸蛋白体蛋白质结合，起到了干扰结核杆菌蛋白质合成的作用，从而杀灭或者抑制结核杆菌生长的作用，其作为饲料添加剂和治疗剂在农业、牧业和养殖业上广泛应用。链霉素对人体有一定的毒副作用。双氢链霉素(dihydrostreptomycin)是链霉素的衍生物，链霉素分子中链霉糖部分的醛基被还原成伯醇基后，就成为双氢链霉素，分子式为C21H41N7O12，分子量为583.44。其抗菌效能与链霉素大致相同，但对听觉神经的毒性比链霉素大，链霉素和双氢链霉素都是氨基糖甙类抗生素中重要的药物。在水产和畜牧养殖中，二者常被用来预防各种动物性疾病或被添加到饲料中促进动物生长发育。食品中如果残留有过量的链霉素或者双氢链霉素，会对人造成严重危害，如损害前庭神经和耳蜗神经，导致眩晕和听力减退，链霉素和双氢链霉素还具有潜在的致畸作用。欧盟明确规定禁止使用该类药物作为家畜的促生长添加剂；美国FDA由于其毒副作用及容易产生耐药性，对动物源性食品中该类药物的残留也极为关注。2377/90/EEC(703/2007修订)规定动物性食品肌肉、脂肪、肝脏中链霉素最大残留限量MRL为500μg/kg，肾脏中为1000μg/kg，乳中为200μg/kg。食品法典委员会(CAC)规定动物性食品肌肉中链霉素的MRLs为0.5mg/kg,肝脏中的MRLs为0.5mg/kg,肾脏中的MRLs为1.0mg/kg。我国动物源性食品残留物质监控计划中链霉素与双氢链霉素均为禁药，在鳗鱼基质中要求方法检出限(以链霉素和双氢链霉素总量计)为10μg/kg。在食品安全检测体系中，标准样品对整个检测质量控制体系起到核心作用。在国际上，一种兽药残留量的分析方法的建立需要经3种类型的样品测试：受控组织或液体、用药物强化至或接近最大容许水平(MRL)的样品和本身具有药物残留的组织样品，从而保证分析方法能具有一定的样品基质适用范围和重复性。欧盟对兽药残留分析方法与结果表达的法规(2002/657/EC)中明确指出了需要采用实物标准样品进行检测过程控制，可见实物标准样品在兽药残留检测中的具有十分重要的意义。目前用于链霉素类药物残留检测的主要是纯标准品，检测质量控制主要是通过向样品中添加纯的标准品后进行检测分析，这种分析方法无法代表目标分析物在活体内真正存在的状态，不能真实地重现药物经过自然代谢后在动物体内的提取效率，无法反映方法的准确性。由于目标物和基体结合情形与真实检测样品不完全一致而导致提取、净化等处理结果与日常分析样本存在较大差异，从而影响结果的可靠性和有效性。另外，一般标准样品前期制备过程中添加有维生素C等抗氧化剂，导致标准样品在后期的相关药物残留检测分析等的应用过程中对实验结果造成干扰和影响。
技术实现思路
为了解决现有技术中链霉素类药物残留检测不能真实地重现药物经过自然代谢后在动物体内的提取效率，无法反映方法的准确性，影响结果的可靠性和有效性，且存在抗氧化剂影响使用结果的技术问题，本专利技术的一个目的是提供鸡肉中链霉素标准样品的制备方法与应用。本专利技术的另一个目的是提供本方法制备的鸡肉中链霉素标准样品。本专利技术为解决上述技术问题所采用的技术方案是：鸡肉中链霉素标准样品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A)、选择活鸡，人工饲喂含有链霉素的饲料，使鸡体内含有链霉素；B)、给药结束后，宰杀、取鸡肌肉，搅碎，混匀制成肉糜，均质、真空冷冻干燥得到粗样；C)、研磨步骤B所述粗样，过筛，得到鸡肉冻干粉标准样品；D)、封装所述标准样品，冷藏保存；E)、检验所述标准样品的均匀性和稳定性；F)、对所述标准样品中的有链霉素含量进行定值。所述步骤A中实验动物的选择，操作为：在养鸡场筛选个体健康、大小均一、均重1.5-2.5kg的鸡，雌雄随机，在20℃-25℃环境下隔离，每日上午8时喂食1次，驯养3日后待用。所述步骤A中药物添加，操作为：称取0.2～2.4g链霉素，加入到2.0kg饲料中，搅拌均匀，即配制出链霉素浓度为0.1～1.2g/kg的饲料A。所述步骤A中采用人工饲喂进行实验，操作为：每只鸡每日饲喂饲料A50g，即投药剂量为2～40mg/kg体重；每日给药一次，连续给药3-5日。所述步骤B中的宰杀时间为最后一次给药结束后3～5h。所述步骤B中的真空冷冻干燥条件为：预冷冻阶段：-80℃--30℃，相应预冷时间0.5-10h；真空冷冻阶段：压力控制在0.01-1.0mbar，相应时间8-15h；干燥升华阶段：-10℃-30℃，相应时间2-10h。所述步骤C过筛的目数为30～80目。所述步骤D中所用瓶子为带有铝箔垫片的白色聚乙烯塑料瓶，每瓶装10g冻干粉，电磁感应封盖，2-8℃冷藏保存。所述标准样品的链霉素含量为100μg/kg～2000μg/kg本专利技术的显著优点是：1)给鸡饲喂含有链霉素的饲料，选择适当时机，宰杀，取肌肉部分匀浆制成肉糜，冷冻干燥，过筛，分装密封包装；2)均匀性检验、稳定性研究和协作定值检测，通过给药控制和采集时机的选择可获得预期含量的目标物结合状态与实际检测样品一致的含链霉素基体阳性材料；3)本专利技术的产品可以在常温下运输，保质期长，目标物和基体结合情形与真实检测样品一致，标准样品为实物标准样品，均匀稳定，无防腐剂及抗氧化剂，易保存，用于链霉素类药物残留测试项目的能力验证、检测方法的验证、测试仪器的校准、测试结果的质量控制与考核。附图说明图1为链霉素的化学结构式。图2为本专利技术的标准样品制备工艺流程图。图3为本专利技术的标准样品的LC-MS谱图。具体实施方式如图2所示，本专利技术的鸡肉中链霉素标准样品的制备方法，包括以下步骤：A)药物喂养；B)取样、去杂质、匀浆；C)真空冷冻干燥；D)研磨、筛分、混样、封装；E)均匀性和稳定性检验；F)确定链霉素含量。下面结合具体实施例，对本专利技术做进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本专利技术而非用于限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1一种鸡肉中链霉素标准样品的制备方法，其具体步骤如下：(1)实验动物的选择：在养鸡场筛选个体健康、大小均一、均重2kg的肉食白羽鸡，雌雄随机。在25℃环境下隔离，每日上午8时喂食1次，驯养3日后，从中挑选18只待用；药物饲养：称取1.6g链霉素，加入到2.0kg饲料中，搅拌均匀后，喂食18只驯养后的鸡，每只鸡日均饲喂50g饲料，每日上午8时喂食1次。投药剂量为20mg/kg体重，连续投药3日；(2)给药3日后，即最后一次给药结束3h后，宰杀后取鸡肌肉，搅碎，混匀制成肉糜；(3)真空冷冻干燥：采用真空冷冻干燥机(CHRiSTEpsilon2-6D)进行冷冻干燥，物料厚度2cm，-本文档来自技高网...

【技术保护点】
鸡肉中链霉素标准样品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A)、选择活鸡，人工饲喂含有链霉素的饲料，使鸡体内含有链霉素；B)、给药结束后，宰杀、取鸡肌肉，搅碎，混匀制成肉糜，均质、真空冷冻干燥得到粗样；C)、研磨步骤B所述粗样，过筛，得到鸡肉冻干粉标准样品；D)、封装所述标准样品，冷藏保存；E)、检验所述标准样品的均匀性和稳定性；F)、对所述标准样品中的有链霉素含量进行定值。

【技术特征摘要】
1.鸡肉中链霉素标准样品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A)、选择活鸡，人工饲喂含有链霉素的饲料，使鸡体内含有链霉素；B)、给药结束后，宰杀、取鸡肌肉，搅碎，混匀制成肉糜，均质、真空冷冻干燥得到粗样；C)、研磨步骤B所述粗样，过筛，得到鸡肉冻干粉标准样品；D)、封装所述标准样品，冷藏保存；E)、检验所述标准样品的均匀性和稳定性；F)、对所述标准样品中的有链霉素含量进行定值。2.如权利要求1所述的鸡肉中链霉素标准样品的制备方法，其特征在于，所述步骤A中实验动物的选择，操作为：在养鸡场筛选个体健康、大小均一、均重1.5-2.5kg的鸡，雌雄随机，在20℃-25℃环境下隔离，每日上午8时喂食1次，驯养3日后待用。3.如权利要求1所述的鸡肉中链霉素标准样品的制备方法，其特征在于，所述步骤A中药物添加，操作为：称取0.2~2.4g链霉素，加入到2.0kg饲料中，搅拌均匀，即配制出链霉素浓度为0.1~1.2g/kg的饲料A。4.如权利要求1所述的鸡肉中链霉素标准样品的制备方法，其特征在于，所述步骤A中采用人工饲喂进行实验，操作...

【专利技术属性】
技术研发人员：王秋艳，林维宣，张宁，王贵滨，
申请(专利权)人：辽宁省检验检疫科学技术研究院，
类型：发明
国别省市：辽宁;21