抗体变体制造技术

本发明专利技术涉及一种抗体，其与TNFα结合并展现经修饰的FcRn结合。本发明专利技术的抗体具有良好的效应子功能和/或药代动力学特性。

Antibody variant

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗体变体
本专利技术涉及经修饰的抗体，其具有改善的效应子功能和/或药代动力学特性。该抗体可用于治疗性治疗各种病症，特别是炎性病状。
技术介绍
在过去20年，单克隆抗体作为临床药物中的治疗试剂的重要性日益增加。多年来，改善抗体的努力集中在降低它们潜在的免疫原性，从而产生人源化或甚至完全人抗体。另一种方法旨在通过改善其效应子功能来优化抗体。直接效应由抗体的可变抗原结合区介导，而间接效应由恒定Fc区介导。改善效应子功能的努力主要集中在调节Fc区。此外，希望改善治疗性抗体的血清半衰期，这可以减少所需抗体的量，并且可以通过延长治疗间隔而提高其用于患者的便利性。对于治疗性应用，免疫球蛋白G(IgG)出于若干种原因一直是优选的选择类别；IgG易于纯化、在储存时相对较稳定、可以经静脉内施用、在体内具有延长的生物半衰期并且能够参与一系列生物效应子功能，诸如激活补体依赖性细胞毒性(CDC)和通过各种Fc受体相互作用(抗体依赖性细胞的细胞毒性；ADCC)募集效应细胞。在五种免疫球蛋白类别中，IgG因其与IgG再循环受体-新生儿Fc受体(FcRn)独特的相互作用而表现出最长的生物半衰期。受体的已知功能之一是拯救IgG免于催化降解。已解决的FcRn-Fc共结晶结构已显示，与Fc的相互作用发生在IgG铰接-CH2-CH-3区。这种相互作用以严格的pH依赖性方式在6.0-6.5的酸性pH下在内体中发生。结合的IgG分子被再循环回到细胞表面，其中它们在7.4的生理pH下被释放到循环中，而非络合的IgG分子注定要进行溶酶体降解。该再循环是实现IgG延长的半衰期的机制；FcRn-IgG相互作用的调节将因此允许特定控制γ免疫球蛋白和Fc融合蛋白的血清半衰期。根据应用，可能希望增加或减少IgG的血清滞留时间。对于治疗性应用，较长的半衰期是希望的，因为将需要更少的剂量和更少的注射。已经研究几种增加半衰期的方法，这些方法包括使用聚乙二醇(PEG)、生成白蛋白或Fc融合蛋白以及增强FcRn-IgG相互作用。聚乙二醇化药剂从1990年以来一直在临床应用，并且聚乙二醇化是已建立的用于延长血液中的药物滞留的技术。因为人血清白蛋白(HSA)也由FcRn经由pH依赖性相互作用再循环，因此也已制备几种增强稳定性和半衰期的白蛋白-融合蛋白。此外，与白蛋白或白蛋白结合结构域融合的抗体片段已在临床前研究中证明延长了血清滞留时间。产生Fc融合蛋白是另一种将赋予蛋白质或肽与完整抗体相似特性的策略。已经研究的Fc区修饰在Saxena(2016)FrontiersinImmunology,第7卷,文章号580中概述。各种Fc突变进一步描述于WO1998/023289A1、WO2000/042072A2、WO2010/106180A2和WO2014/108198A1中。对具有改善的效应子功能和/或药代动力学的抗体存在持续需要。
技术实现思路
本申请的专利技术人发现，抗体的Fc区中的某些特异性突变增加该抗体在pH6下对FcRn的亲和力，而在pH7.4下的亲和力保持较低。具有这些突变的抗体具有改善的药代动力学特性。此外，本专利技术的优选的抗体变体相比其相应的亲本野生型抗体具有对T细胞增殖更好的抑制。因此，本专利技术涉及以下项目[1]至[91]中定义的主题：[1]一种抗体，其包含TNFα结合结构域和FcRn结合位点，在pH6下对人FcRn具有高亲和力，所述高亲和力表征为解离平衡常数(KD)小于500nM，并且进一步在pH7.4下对人FcRn不具有亲和力或具有低亲和力，所述低亲和力表征为KD大于1μM，其中所述抗体的氨基酸序列包含氨基酸380A和434A。[2]如项目[1]所述的抗体，其中所述抗体通过用丙氨酸取代位置434处的天冬酰胺(N434A)获得。[3]如项目[1]或[2]所述的抗体，其中所述抗体通过用丙氨酸取代位置380处的谷氨酸(E380A)获得。[4]如前述项目中任一项所述的抗体，其中所述抗体的氨基酸序列的位置307处的氨基酸不同于丙氨酸。[5]如前述项目中任一项所述的抗体，其中所述抗体的氨基酸序列进一步包含氨基酸307T。[6]如前述项目中任一项所述的抗体，其包含重链，所述重链包含如SEQIDNO:13中所示的氨基酸序列。[7]如前述项目中任一项所述的抗体，其在pH6下对人FcRn的亲和力大于英利昔单抗(IFX)的亲和力。[8]如前述项目中任一项所述的抗体，其中所述在pH6下对人FcRn的高亲和力表征为解离常数KD小于400nM。[9]如前述项目中任一项所述的抗体，其中所述在pH6下对人FcRn的高亲和力表征为解离常数KD小于300nM。[10]如前述项目中任一项所述的抗体，其中所述在pH6下对人FcRn的高亲和力表征为解离常数KD小于200nM。[11]如前述项目中任一项所述的抗体，其中所述在pH6下对人FcRn的高亲和力表征为解离常数KD小于150nM。[12]如前述项目中任一项所述的抗体，其中所述在pH6下对人FcRn的高亲和力表征为解离常数KD在5nM至500nM、或10nM至400nM、或25nM至300nM、或50nM至200nM、或75nM至175nM的范围内。[13]如前述项目中任一项所述的抗体，其中表征所述在pH6下的高亲和力的所述KD是通过表面等离子体共振(SPR)测定的。[14]如前述项目中任一项所述的抗体，其中所述在pH7.4下对人FcRn的低亲和力表征为KD大于10μM。[15]如前述项目中任一项所述的抗体，其中表征所述在pH7.4下对人FcRn的低亲和力的所述KD是通过SPR测定的。[16]如项目[1]至[13]中任一项所述的抗体，其中在pH7.4下对人FcRn的亲和力过低，使得KD值无法通过SPR测定。[17]如前述项目中任一项所述的抗体，其以小于200pM的KD与人TNFα结合。[18]如前述项目中任一项所述的抗体，其以小于100pM的KD与人TNFα结合。[19]如前述项目中任一项所述的抗体，其以小于50pM的KD与人TNFα结合。[20]如前述项目中任一项所述的抗体，其以小于25pM的KD与人TNFα结合。[21]如前述项目中任一项所述的抗体，其以小于10pM的KD与人TNFα结合。[22]如前述项目中任一项所述的抗体，其跨越极化细胞单层从顶侧转运到基底外侧。[23]如前述项目中任一项所述的抗体，其以大于对照抗体的量跨越极化细胞单层从顶侧转运到基底外侧，所述对照抗体包含具有如SEQIDNO:1中所示的氨基酸序列的轻链和具有如SEQIDNO:2中所示的氨基酸序列的重链。[24]如前述项目中任一项所述的抗体，其以大于英利昔单抗的量跨越极化细胞单层从顶侧转运到基底外侧。[25]如项目[24]所述的抗体，其中跨越所述极化细胞单层转运的抗体的量比跨越所述极化细胞单层转运的英利昔单抗的量大两倍。[26]如项目[23]至[25]中任一项所述的抗体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体，其包含TNFα结合结构域和FcRn结合位点，其在pH 6下对人FcRn具有高亲和力，所述高亲和力表征为解离平衡常数(K

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170919 EP 17191988.91.一种抗体，其包含TNFα结合结构域和FcRn结合位点，其在pH6下对人FcRn具有高亲和力，所述高亲和力表征为解离平衡常数(KD)小于500nM，并且其进一步在pH7.4下对人FcRn不具有亲和力或具有低亲和力，所述低亲和力表征为KD大于10μM，其中所述抗体的氨基酸序列包含氨基酸380A和434A。


2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体的氨基酸序列进一步包含氨基酸307T。


3.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其在pH6下对人FcRn的亲和力大于英利昔单抗在pH6下对人FcRn的亲和力。


4.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述对人FcRn的高亲和力表征为解离平衡常数(KD)小于300nM。


5.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，所述抗体以小于100pM的KD与人TNFα结合。


6.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，所述抗体以大于英利昔单抗的量跨越极化细胞单层从顶侧转运到基底外侧。


7.根据权利要求6所述的抗体，其中跨越所述极化细胞单层转运的所述抗体的量比跨越所述极化细胞单层转运的亲本免疫球蛋白的量大两倍，其中所述亲本免疫球蛋白与所述抗体的不同之处仅...

【专利技术属性】
技术研发人员：EM富勒，
申请(专利权)人：蒂洛特斯制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH