线粒体通透性转换孔大小的数学模式测定法制造技术

技术编号:6844476 阅读:333 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术涉及线粒体通透性转换孔大小测量,确切说是线粒体通透性转换孔大小的数学模式测定方法。本发明专利技术建立线粒体体积改变的数学模型,将实验室常用的仪器分光光度仪测定的吸光光度值代入数学模型,经过一系列计算得到模型参数t1/2,从而间接定量反映mPTP的大小。该方法能够简便、准确的测量出mPTP的大小。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及线粒体通透性转换孔大小测量,确切说是线粒体通透性转换孔大小的数学模式测定方法。
技术介绍
线粒体膜(特别是线粒体内膜)通常具有严格的紧闭性,仅限于质子等透过,对分子量大于1500Da的分子不具有通透性。在缺血、缺氧等应激条件下,线粒体膜通透性发生病理改变,形成的病理孔道,允许分子量大于1500Da的物质自由通过线粒体内外膜,进入线粒体内。该变化被称为线粒体通透性转换,内外膜之间形成的孔道被称为线粒体通透性转换孑L (mitochondrial permeability transition pore, mPTP)。目前尚不清楚 mPTP 的具体结构和组成,现有的技术手段很难测量其大小,只是应用形态学及分子生物学的方法, 使用分光光度仪分别测量应激处理前后的线粒体悬浮液的吸光度,通过比较两者的吸光度似否有统计学差异,从而判断mPTP似否形成。但是,该方法不能定量描述mPTP大小,揭示 mPTP开放的具体情况,所以有必要深入研究和开发mPTP大小测量的方法和技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于找到一种方法,使得采用目前实验室测量mPTP的分光光度仪就能够方便、准确,定量测量mPTP的大小,从而解决目前mPTP大小无法定量测量的问题。本专利技术解决mPTP定量测量的技术方案是mPTP形成后,大分子物质进入线粒体内,由于渗透作用,液体进入线粒体,从而引起线粒体膨胀。线粒体膨胀后,透光度增加造成光密度下降,OD值降低。根据上述分析建立方程如下dV权利要求1. 一种线粒体通透性转换孔大小的数学模式测定法,包括数学模型的建立、测试所用的封堵溶液和测试溶液液配方以及根据该数学模型建立的t1/2参数计算表,具体内容如下数学樽型2.按照权利要求1所建立的数学模型理论依据是线粒体体积变化规律是线粒体体积变化率与线粒体体积变化能力成正比,是根据线粒体体积变化推导mPTP大小。3.按照权利要求1所述的封堵溶液配方是0.25M右旋糖酐6000、5mM Tris-Mops ρΗ = 7. 4,0. 2mM EGTA-Tris、10 μ M 鱼藤酮。4.按照权利要求1所述的测试溶液配方是0.25Μ蔗糖、5mM Tris-Mops ρΗ = 7. 4、 0. 2mMEGTA-Tris、10yM 鱼藤酮。5.按照权利要求1所述的计算t1/2基本测量数据是分光光度仪测得的OD值,OD值通过数学模型拟合,得到曲线方程,最后经过一系列计算才得到t1/2。全文摘要本专利技术涉及线粒体通透性转换孔大小测量,确切说是线粒体通透性转换孔大小的数学模式测定方法。本专利技术建立线粒体体积改变的数学模型,将实验室常用的仪器分光光度仪测定的吸光光度值代入数学模型,经过一系列计算得到模型参数t1/2,从而间接定量反映mPTP的大小。该方法能够简便、准确的测量出mPTP的大小。文档编号G01N15/08GK102235964SQ20101016501公开日2011年11月9日 申请日期2010年5月7日 优先权日2010年5月7日专利技术者李立环, 陈东 申请人:中国医学科学院阜外心血管病医院本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种线粒体通透性转换孔大小的数学模式测定法,包括数学模型的建立、测试所用的封堵溶液和测试溶液液配方以及根据该数学模型建立的t1/2参数计算表,具体内容如下数学模型:等式左边表示线粒体体积变化率,kp表示体积变化速率常数,VT表示线粒体膨胀所能达到的最大体积,Vt表示t时刻线粒体体积。方程①整体表示:线粒体体积变化率与线粒体体积变化能(VT-Vt)成正比。封堵溶液及测试溶液配方表:表1实验溶液配方表溶液名称  成份封堵溶液  0.25M Dextran6000、5mM Tris-Mops pH=7.4、0.2mM EGTA-Tris、10μM Rotenone测试溶液  0.25M Sucrose、5mM Tris-Mops pH=7.4、0.2mM EGTA-Tris、10μM Rotenonet1/2参数计算表:表2 t1/2计算表注:AT=A30

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:陈东李立环
申请(专利权)人:中国医学科学院阜外心血管病医院
类型:发明
国别省市:11

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