IL-5抗体、其抗原结合片段及医药用途制造技术

IL‑5抗体、其抗原结合片段及医药用途。包含IL‑5抗体CDR区的鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体，以及包含IL‑5抗体及其抗原结合片段的药物组合物，以及其作为药物的用途。

IL-5 antibody, its antigen binding fragment and its medical application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】IL-5抗体、其抗原结合片段及医药用途
本公开涉及IL-5抗体以及其抗原结合片段，进一步地，本公开还涉及包含所述IL-5抗体CDR区的嵌合抗体、人源化抗体，本公开还涉及包含所述IL-5抗体及其抗原结合片段的药物组合物，以及其作为IL-5相关疾病诊断剂和治疗药物的用途。
技术介绍
白细胞介素-5(IL-5)是白细胞介素家族的重要成员之一，又称为T细胞替代因子(T cell replacing factor TRF)、B细胞生长因子-II(B cell growth factor-II BCGF-II)、IgA增强因子(IgA-enhancing factor IgA-EF)、酸性粒细胞分化因子(eosinophil differentiation factor EDF)，是一种主要由辅助性T细胞2(Th2)分泌的同二聚体糖蛋白。人的IL-5由134个氨基酸残基组成，包括由22个氨基酸组成的信号肽和2个糖基化位点，人和鼠IL-5在氨基酸水平同源性为70％。具有活性的IL-5呈现寡二聚体形式，两条肽链以二硫键连接，以反向平行的构型存在，而IL-5的单体则无生物学活性(Adv Immunol.1994；57:145-90)。嗜酸性粒细胞(eosinophil，EOS)与肺部多种炎性疾病包括与过敏性反应有关的变应性病症有关，其中哮喘是一种慢性呼吸道炎症疾病，全球约有3亿患者，发病率为10％。其发病机制与多种细胞因子有关，IL-5及其受体IL-5R在哮喘的发病过程中扮演着重要的角色。哮喘患者支气管肺组织内有大量的炎性细胞浸润，其中以嗜酸性粒细胞增多最为显著。许多研究都表明嗜酸性粒细胞是导致哮喘气道炎症的主要细胞之一(Curr Opin Pulm Med.2005Jan；11(1):1-6)。IL-5在EOS的分化、成熟、黏附、浸润和凋亡过程中发挥着极其重要的作用。大量的动物试验和临床研究均表明，IL-5可活化骨髓中的EOS祖细胞，并引起外周血和气道内EOS的聚集，从而导致气道的慢性炎症和高反应性(J Immunol.2014 Oct 15；193(8):4043-52)。此外，IL-5还能延长EOS的存活时间、增强其对特殊刺激因子(如IgA或IgG)的脱颗粒反应，介导嗜酸性粒细胞的趋化反应(J Asthma Allergy.2015 Nov 3；8:125-34)。在哮喘患者和人支气管抗原诱发模型中均检测到IL-5表达水平的增加(Greenfeder et al,Respiratory Research,2:71-79,2001)；哮喘患者吸入重组人IL-5蛋白会导致嗜酸性粒细胞数目增多，支气管高反应性及嗜酸性粒细胞毒性颗粒的释放，这些都表明IL-5是哮喘发病中的一个关键因素。目前对哮喘治疗最有效的方法是通过鼻腔或口腔给予固醇类药物来抑制哮喘中一些关键介质(包括IL-5)的表达，以减轻肺部炎症。然而长期使用固醇类药物具有很多副作用，因此，有必要寻找新的治疗哮喘的药物靶点。已有研究证明，使用IL-5的抗体抑制IL-5与其受体结合，可显著降低嗜酸性粒细胞在肺内的聚集，降低血液、组织、痰液中的嗜酸性粒细胞水平，并可减少嗜酸性粒细胞所介导的炎症反应，提高肺功能，对严重的嗜酸性粒细胞哮喘和复发性哮喘均具有很好的疗效(Drugs.2017May；77(7):777-784)。现有上市的IL-5抗体只有GSK公司的mepolizumab和Teva Pharma公司的reslizumab，其他针对IL-5靶点的抗体均处于临床前研究阶段，相关专利有WO2017033121、WO2016040007、WO2015095539、WO2012083370、WO2012158954、WO2006046689、WO9621000、WO9535375等，但是上述药物在IL-5诱导的嗜酸性粒细胞的消除和肺功能的改善方面仍有可提高的空间。因此，有必要继续开发具有高选择性、高亲和力和良好药效的抗体，为治疗哮喘提供更多和更优的抗IL-5治疗方案。
技术实现思路
本公开提供与IL-5的氨基酸序列或三维结构特异性结合的单克隆抗体或抗原结合片段(也可称IL-5结合分子)。一方面，本公开提供一种单克隆抗体或其抗原结合片段，所述单克隆抗体或其抗原结合片段结合人IL-5，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中：(i)重链可变区包含选自如SEQ ID NO：16-18氨基酸序列所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区或与SEQ ID NO：16-18所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的HCDR变体，轻链可变区包含选自如SEQ ID NO：19-21氨基酸序列所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区或与SEQ ID NO：19-21所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的LCDR变体；或(ii)重链可变区包含选自如SEQ ID NO：22-24氨基酸序列所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区或与SEQ ID NO：22-24所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的HCDR变体，轻链可变区包含选自如SEQ ID NO：25-27氨基酸序列所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区或与SEQ ID NO：25-27所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的LCDR变体；或(iii)重链可变区包含选自如SEQ ID NO：28-30氨基酸序列所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区或与SEQ ID NO：28-30所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的HCDR变体，轻链可变区包含选自如SEQ ID NO：31-33氨基酸序列所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区或与SEQ ID NO：31-33所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的LCDR变体；或(iv)重链可变区包含选自如SEQ ID NO：34-36氨基酸序列所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区或与SEQ ID NO：34-36所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的HCDR变体，轻链可变区包含选自如SEQ ID NO：37-39氨基酸序列所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区或与SEQ ID NO：37-39所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的LCDR变体；或(v)重链可变区包含选自如SEQ ID NO：40-42氨基酸序列所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区或与SEQ ID NO：40-42所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的HCDR变体，轻链可变区包含选自如SEQ ID NO：43-45氨基酸序列所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区或与SEQ ID NO：43-45所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种单克隆抗体或其抗原结合片段，所述单克隆抗体或其抗原结合片段特异性结合人IL-5，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中：/n(i)重链可变区包含选自如SEQ ID NO：16-18氨基酸序列所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区或与SEQ ID NO：16-18所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的HCDR变体，轻链可变区包含选自如SEQ ID NO：19-21氨基酸序列所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区或与SEQ ID NO：19-21所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的LCDR变体；或/n(ii)重链可变区包含选自如SEQ ID NO：22-24氨基酸序列所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区或与SEQ ID NO：22-24所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的HCDR变体，轻链可变区包含选自如SEQ ID NO：25-27氨基酸序列所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区或与SEQ ID NO：25-27所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的LCDR变体；或/n(iii)重链可变区包含选自如SEQ ID NO：28-30氨基酸序列所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区或与SEQ ID NO：28-30所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的HCDR变体，轻链可变区包含选自如SEQ ID NO：31-33氨基酸序列所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区或与SEQ ID NO：31-33所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的LCDR变体；或/n(iv)重链可变区包含选自如SEQ ID NO：34-36氨基酸序列所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区或与SEQ ID NO：34-36所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的HCDR变体，轻链可变区包含选自如SEQ ID NO：37-39氨基酸序列所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区或与SEQ ID NO：37-39所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的LCDR变体；或/n(v)重链可变区包含选自如SEQ ID NO：40-42氨基酸序列所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区或与SEQ ID NO：40-42所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的HCDR变体，轻链可变区包含选自如SEQ ID NO：43-45氨基酸序列所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区或与SEQ ID NO：43-45所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的LCDR变体；或/n(vi)重链可变区包含选自如SEQ ID NO：34-36氨基酸序列所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区或与SEQ ID NO：34、82、36所示的HCDR1、HCDR2和 HCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的HCDR变体，轻链可变区包含选自如SEQ ID NO：37-39氨基酸序列所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区或与SEQ ID NO：37-39所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的LCDR变体。/n...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170929 CN 201710906068X一种单克隆抗体或其抗原结合片段，所述单克隆抗体或其抗原结合片段特异性结合人IL-5，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中：
(i)重链可变区包含选自如SEQ ID NO：16-18氨基酸序列所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区或与SEQ ID NO：16-18所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的HCDR变体，轻链可变区包含选自如SEQ ID NO：19-21氨基酸序列所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区或与SEQ ID NO：19-21所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的LCDR变体；或
(ii)重链可变区包含选自如SEQ ID NO：22-24氨基酸序列所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区或与SEQ ID NO：22-24所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的HCDR变体，轻链可变区包含选自如SEQ ID NO：25-27氨基酸序列所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区或与SEQ ID NO：25-27所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的LCDR变体；或
(iii)重链可变区包含选自如SEQ ID NO：28-30氨基酸序列所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区或与SEQ ID NO：28-30所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的HCDR变体，轻链可变区包含选自如SEQ ID NO：31-33氨基酸序列所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区或与SEQ ID NO：31-33所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的LCDR变体；或
(iv)重链可变区包含选自如SEQ ID NO：34-36氨基酸序列所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区或与SEQ ID NO：34-36所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的HCDR变体，轻链可变区包含选自如SEQ ID NO：37-39氨基酸序列所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区或与SEQ ID NO：37-39所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的LCDR变体；或
(v)重链可变区包含选自如SEQ ID NO：40-42氨基酸序列所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区或与SEQ ID NO：40-42所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的HCDR变体，轻链可变区包含选自如SEQ ID NO：43-45氨基酸序列所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区或与SEQ ID NO：43-45所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的LCDR变体；或
(vi)重链可变区包含选自如SEQ ID NO：34-36氨基酸序列所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区或与SEQ ID NO：34、82、36所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的HCDR变体，轻链可变区包含选自如SEQ ID NO：37-39氨基酸序列所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区或与SEQ ID NO：37-39所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3区分别具有3，2或1个氨基酸差异的LCDR变体。


根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体是重组抗体，优选选自鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体。


根据权利要求2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述的人源化抗体含有SEQ ID NO:49、57、63、69或75所示的重链可变区或其变体；所述变体是在SEQ ID NO:49、57、63、69或75所示的重链可变区序列上具有1-10个氨基酸突变。


根据权利要求3所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述变体是在SEQ ID NO:49、57、63、69或75所示的重链可变区的FR区位置上具有1-10个氨基酸的回复突变；优选的，所述回复突变是在SEQ ID NO:49所示的重链可变区上选自S49T，V93T和K98S或其组合的氨基酸回复突变，或所述回复突变是在SEQ ID NO:57所示的重链可变区上选自S49T,V93T和K98T或其组合的氨基酸回复突变，或所述回复突变是在SEQ ID NO:63所示的重链可变区上选自R38K，M48I，R67K，V68A，M70L，R72V，T74K和L83F或其组合的氨基酸回复突变，或所述回复突变是在SEQ ID NO:69所示的重链可变区上选自F29I，R38K，V48I，R72A，T97F的氨基酸回复突变和CDR中N55V的突变或其组合，或所述回复突变是在SEQ ID NO:75所示的重链可变区上选自R38K，M48I，R67K，V68A，R72A，T74K，M81L，L83F和D89E或其组合的氨基酸回复突变。


根据权利要求4所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述人源化抗体包含选自SEQ ID NO:50或51所示的重链可变区，或包含选自SEQ ID NO:58或59所示的重链可变区，或包含选自SEQ ID NO:64，65和66中任一个所示的重链可变区，或包含选自SEQ ID NO:70或71所示的重链可变区，或包含选自SEQ ID NO:76至79中任一个所示的重链可变区。


根据权利要求2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述的人源化抗体含有SEQ ID NO:46、54、60、67或72所示的轻链可变区或其变体；所述变体是在SEQ ID NO:46、54、60、67或72...

【专利技术属性】
技术研发人员：应华，石金平，王义芳，胡齐悦，葛虎，陶维康，
申请(专利权)人：江苏恒瑞医药股份有限公司，上海恒瑞医药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32