【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于对核酸进行测序的组合物和方法序列表本申请含有以ASCII格式电子提交并整体通过参考并入本文的序列表。所述在2018年2月14日生成的ASCII拷贝名为51178-003WO2_Sequence_Listing_2.14.18_ST25，大小为125,690个字节。
本专利技术总的来说涉及核酸(例如DNA)测序，并且更具体来说涉及人工核酸、包括人工核酸和转座酶的组合物以及将其用于例如文库制备和测序的方法。
技术介绍
核酸(例如DNA)测序已变成现代生物学的不可或缺的部分，并具有广泛应用，例如物种(例如病原体)的鉴定和分类、遗传异常例如与疾病相关的突变的鉴定、测量细胞中存在的RNA转录本以及许多其他应用。当前的方法包括大规模并行或“下一代”测序(NGS)，其允许在单次测序运行中并行处理许多核酸。NGS通过极大提高测序速度并在同时降低成本，已彻底改革了基因组学和分子生物学。一般来说，NGS方法包括从待测序的靶核酸制备模板核酸的文库，从所述文库获得序列数据，以及组装所述序列数据以推断所述靶核酸的序列。大多数NGS...
【技术保护点】
1.一种多价转座酶试剂，其包含：/n(a)水溶性多价核心；/n(b)第一人工核酸，其包含含有TBS的第一末端；/n(c)第二人工核酸，其包含含有TBS的第一末端；和/n(d)第三人工核酸，其包含含有TBS的第一末端，/n其中所述第一人工核酸、第二人工核酸和第三人工核酸被连接到所述可溶性多价核心。/n
【技术特征摘要】 【专利技术属性】
【国外来华专利技术】20170214 US 62/458,8931.一种多价转座酶试剂，其包含：
(a)水溶性多价核心；
(b)第一人工核酸，其包含含有TBS的第一末端；
(c)第二人工核酸，其包含含有TBS的第一末端；和
(d)第三人工核酸，其包含含有TBS的第一末端，
其中所述第一人工核酸、第二人工核酸和第三人工核酸被连接到所述可溶性多价核心。
2.权利要求1的试剂，其中所述第一人工核酸、第二人工核酸或第三人工核酸通过由偶联反应产生的共价键连接到所述可溶性多价核心。
3.权利要求2的试剂，其中所述偶联反应选自叠氮化物-炔烃Huisgen环加成、酰胺或硫代酰胺键形成、周环反应、Diels-Alder反应、磺酰胺键形成、醇或酚烷基化、缩合反应、二硫键形成和亲核取代。
4.权利要求3的试剂，其中所述偶联反应是叠氮化物-炔烃Huisgen环加成。
5.权利要求4的试剂，其中所述叠氮化物-炔烃Huisgen环加成是铜(I)催化的叠氮化物-炔烃环加成(CuAAC)或应变助催的叠氮化物-炔烃环加成(SPAAC)。
6.权利要求1的试剂，其中所述第一人工核酸、第二人工核酸或第三人工核酸被非共价连接到所述可溶性多价核心。
7.权利要求6的试剂，其中所述第一人工核酸、第二人工核酸或第三人工核酸通过亲和结合对连接到所述可溶性多价核心。
8.权利要求7的试剂，其中所述亲和结合对包含生物素-链亲和素、生物素-亲和素、配体-受体、抗原-抗体或抗原结合片段、或者Ig结合蛋白-Ig。
9.权利要求8的试剂，其中所述亲和结合对包含生物素-链亲和素或生物素-亲和素。
10.权利要求7-9中任一项的试剂，其中所述亲和结合对包含结合第二亲和组分的第一亲和组分，其中所述第一亲和组分被连接到所述可溶性多价核心，并且所述第二亲和组分被连接到所述第一人工核酸、第二人工核酸或第三人工核酸。
11.权利要求1-10中任一项的试剂，其还包含第一转座酶、第二转座酶和第三转座酶，所述第一转座酶、第二转座酶和第三转座酶结合到所述第一人工核酸的TBS、第二人工核酸的TBS和第三人工核酸的TBS。
12.权利要求1-11中任一项的试剂，其还包含第四人工核酸，所述第四人工核酸包含含有TBS的第一末端并被连接到所述可溶性多价核心。
13.权利要求12的试剂，其还包含第一转座酶、第二转座酶、第三转座酶和第四转座酶，所述第一转座酶、第二转座酶、第三转座酶和第四转座酶结合到所述第一人工核酸的TBS、第二人工核酸的TBS、第三人工核酸的TBS和第四人工核酸的TBS。
14.权利要求13的试剂，其中所述第一转座酶、第二转座酶、第三转座酶和第四转座酶中的至少两者形成寡聚化对。
15.权利要求14的试剂，其中所述第一转座酶和第二转座酶形成第一突触复合体，并且所述第三转座酶和第四转座酶形成第二突触复合体。
16.权利要求13的试剂，其还包含第五转座酶和第六转座酶，其中所述第一转座酶和第五转座酶被寡聚化以形成第一突触复合体，并且所述第二转座酶和第六转座酶被寡聚化以形成第二突触复合体，其中所述第五转座酶和第六转座酶被结合到接头核酸，所述接头核酸包含含有TBS的第一末端。
17.权利要求1-16中任一项的试剂，其还包含多个另外的人工核酸，每个另外的人工核酸包含含有TBS的第一末端，并且每个另外的人工核酸被连接到所述多价核心。
18.权利要求17的试剂，其还包含结合到所述多个另外的人工核酸的TBS的多个另外的转座酶，其中成对的所述多个另外的转座酶被寡聚化以形成突触复合体。
19.权利要求18的试剂，其中所述试剂包含3至1000个之间的突触复合体。
20.权利要求19的试剂，其中所述试剂包含3至12个之间的突触复合体。
21.一种多价转座酶试剂，其包含：
(a)水溶性多价核心；
(b)连接到所述可溶性多价核心的三个或更多个突触复合体，每个所述突触复合体包含第一转座酶和第二转座酶，其中所述第一转座酶被结合到包含TBS的第一人工核酸，所述第二转座酶被结合到包含TBS的第二人工核酸，并且其中所述第一转座酶和第二转座酶被寡聚化。
22.权利要求21的试剂，其中每个突触复合体的所述第一人工核酸和第二人工核酸被连接到所述可溶性多价核心。
23.权利要求21的试剂，其中至少一个突触复合体的所述第一人工核酸或第二人工核酸不被连接到所述可溶性多价核心。
24.权利要求1-23中任一项的试剂，其中所述可溶性多价核心是聚合物、核酸、肽、多肽、蛋白质或胶束。
25.权利要求24的试剂，其中所述可溶性多价核心是聚合物。
技术研发人员：约瑟夫·C·梅勒，杰克·T·莱昂纳德，
申请(专利权)人：斯库维尔公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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