一种重组酯酶及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种重组酯酶及其在催化邻苯二甲酸酯制备邻苯二甲酸中的应用，所述重组酯酶氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术重组酯酶可以降解多种PAEs底物，在30min内可将250mg/L的邻苯二甲酸二乙酯(DEP)完全催化为邻苯二甲酸(PA)，DBP可水解约96.8％，DMP可水解约46.4％，可应用于邻苯二甲酸酯污染的生物修复。

A recombinant esterase and its application

The invention discloses a recombinant esterase and its application in catalyzing the preparation of phthalate from phthalate, and the amino acid sequence of the recombinant esterase is shown in SEQ ID No.2. The recombinant esterase of the invention can degrade a variety of PAEs substrates, and can completely catalyze 250mg / L of diethyl phthalate (DEP) to phthalic acid (PA) within 30min. DBP can be hydrolyzed by water about 96.8%, DMP can be hydrolyzed by water about 46.4%, which can be applied to bioremediation of phthalic acid ester pollution.

【技术实现步骤摘要】
一种重组酯酶及其应用(一)
本专利技术涉及一种重组酯酶及其应用。(二)
技术介绍
邻苯二甲酸酯(Phthateacidesters，PAEs)是世界上广泛使用的人工合成的难降解有机化合物，主要用于塑料增塑剂、涂料、油漆等的化工生产。已有证据表明，PAEs是一类环境内分泌干扰物，其最明显的危害是使生殖机能下降，对动物及人类生殖系统有一定损害，可引起睾丸萎缩、精子减少、生殖细胞超微结构改变，且对胚胎发育有一定毒性。微生物降解被认为是自然环境中PAEs完全矿化的主要过程，过去的研究中已分离到多种微生物表现出了降解邻苯二甲酸酯的能力。经典的邻苯二甲酸酯降解途径认为，不管在有氧还是无氧条件下，邻苯二甲酸酯类在相关酯酶作用下先水解为邻苯二甲酸单酯，再进一步水解为邻苯二甲酸(PA)，在有氧环境下，邻苯二甲酸通过邻苯二甲酸双加氧酶反应生成二羟基邻苯二甲酸，经过脱氢和脱羧最后形成原儿茶酸；原儿茶酸可通过正位或偏位开环形成相应的有机酸，进而转化成丙酮酸、琥珀酸、草酰乙酸等进入三羧酸循环，最终转化为CO2和H2O。其中酯键的水解是一个共同的关键起始步骤，起始该过程的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组酯酶，其特征在于所述重组酯酶氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组酯酶，其特征在于所述重组酯酶氨基酸序列为SEQIDNO.2所示。


2.一种权利要求1所述重组酯酶的编码基因，其特征在于所述编码基因为SEQIDNO.1中4174bp-4896bp所示。


3.一种权利要求1所述重组酯酶编码基因构建的重组载体。


4.一种权利要求3所述重组载体转化制备的重组基因工程菌。


5.如权利要求4所述工程菌，其特征在于所述工程菌以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主构建而成。


6.一种权利要求1所述重组酯酶在催化邻苯二甲酸酯制备邻苯二甲酸中的应用。


7.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述应用为：以含重组酯酶编码基因的工程菌诱导培养获得的湿菌体经超声破碎提取的纯酶为催化剂，以邻苯二甲酸酯为底物，以pH7.0-10.0的PBS缓冲液为反应介质，在30-50℃条件下进行水解反应，反应完全后，将反应液分离纯化，获得邻苯二甲酸。


8.如权利要求7所述的应用，其特征在于所述邻苯二甲酸酯为邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二辛酯、邻苯二甲酸二乙酯...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱乐泉，吴石金，李骏，钟卫鸿，刘腾飞，尹辛格，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33