一种复合干细胞生物制剂制造技术

本发明专利技术公开了一种复合干细胞生物制剂，包括脂肪干细胞，胡萝卜苷，葛根素，β‑谷甾醇，溶剂。所述脂肪干细胞为1×10

A compound stem cell biological preparation

The invention discloses a compound stem cell biological preparation, which comprises fat stem cells, carotene, puerarin, \u03b2 - sitosterol and solvent. The fat stem cells are 1 \u00d7 10

【技术实现步骤摘要】
一种复合干细胞生物制剂
本专利技术涉及生物制剂
，尤其涉及一种复合干细胞生物制剂。
技术介绍
伤口愈合是机体对所形成缺损进行修补恢复的复杂过程，包括凝血、炎症发生、血管新生、纤维组织形成、胞外基质沉积、瘢痕组织形成和上皮组织再生等阶段。难愈性创面会导致皮肤功能的丧失，给人们的日常生活带来极大的痛苦，也是目前治疗的难题。干细胞能通过分化为组织相关细胞、参与新生组织构建以及改变创面局部微环境等途径促进皮肤创面的愈合，具有较高的研究价值。其中，脂肪干细胞具有来源广泛、取材方便、对机体损伤小的优点，应用前景较好。但是，单一的脂肪干细胞对伤口愈合的治疗效果不够理想，限制了其有效的应用。
技术实现思路
基于
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术提出了一种复合干细胞生物制剂，其原料来源广泛、应用方便，而且能有效加快皮肤创面的愈合速度，促进皮肤的修复再生。本专利技术提出的一种复合干细胞生物制剂，包括脂肪干细胞，胡萝卜苷，葛根素，β-谷甾醇，溶剂。优选地，所述脂肪干细胞为1×107-5×107个/mL，胡萝卜苷为5-10μg/mL，葛根素为5-10μg/mL，β-谷甾醇为4-6μg/mL。优选地，所述的复合干细胞生物制剂还包括细胞保护剂，所述细胞保护剂为海藻糖、人血白蛋白或两者的混合物；优选地，所述细胞保护剂为30-50μg/mL。优选地，所述溶剂为PBS溶液或者生理盐水。优选地，所述复合干细胞生物制剂的制备方法包括下述步骤：S1、从脂肪组织中分离、培养脂肪干细胞；S2、将得到的脂肪干细胞进行表型检测；S3、将表型检测合格的脂肪干细胞用溶剂重悬，然后加入其余原料，配制得到复合干细胞生物制剂。优选地，所述复合干细胞生物制剂的制备方法还包括将培养得到的脂肪干细胞进行低氧预处理。优选地，所述低氧预处理的培养条件具体为：1％O2，5％CO2,94％N2，37℃。优选地，所述低氧预处理方法具体为：将传代培养得到的脂肪干细胞用胰酶溶液消化，然后接种到无血清培养基中，先在5％CO2,37℃常氧培养2-3d，然后更换新鲜培养基，在1％O2，5％CO2,94％N2，37℃条件下低氧培养1-2d。优选地，所述步骤S1中，脂肪干细胞的分离、培养方法具体为：取脂肪组织，用0.2-0.3％的胶原酶溶液消化后，接种到无血清培养基中培养，2-3d后更换新鲜培养基，以后每1-2d更换一次，待细胞融合达到80-90％后传代。优选地，所述步骤S3中，表型检测合格具体指：CD31、CD34和CD45＜1％，CD29、CD73、CD90＞95％。本专利技术的有益效果如下：本专利技术将脂肪干细胞，胡萝卜苷，葛根素，β-谷甾醇复配得到复合干细胞生物制剂，用于皮肤的修复再生。其中，脂肪干细胞能分泌多种活性细胞因子，如血管内皮生长因子、血小板衍生因子、转化生长因子等，并且能调节成纤维细胞、角质细胞等的活性，从而加速胶原沉积，促进再上皮化，有利于伤口的愈合以及皮肤的修复；适量的胡萝卜苷，葛根素，β-谷甾醇配合，能高效激活ERK信号通路，不仅能提高脂肪干细胞的增殖活性，进而提高伤口处活性细胞因子的分泌水平，还能促进伤口处内皮细胞的增殖，加快伤口愈合以及皮肤修复速度；胡萝卜苷，葛根素，β-谷甾醇还能起到抗氧化增效作用，能够减少氧化导致的成纤维细胞凋亡，从而加速胶原沉积，促进伤口愈合。本专利技术的复合干细胞生物制剂中，还可以加入适量细胞保护剂，例如海藻糖、人血白蛋白，起到保护脂肪干细胞的作用，提高脂肪干细胞在伤口处的存活率以及活性，有助于更好地发挥促伤口愈合作用。本专利技术的复合干细胞生物制剂所使用的脂肪干细胞还可以进行低氧预处理，提高其在伤口处的增殖能力以及细胞活性，进而提高伤口处活性细胞因子的分泌水平，更好地发挥促伤口愈合作用。本专利技术的复合干细胞生物制剂以脂肪干细胞为主要成分，不仅具有原料来源广泛、应用方便的优点，而且能有效加快皮肤创面的愈合速度，促进皮肤的修复再生，治疗效果好。具体实施方式下面，通过具体实施例对本专利技术的技术方案进行详细说明。实施例1一种复合干细胞生物制剂，包括1×107个/mL的脂肪干细胞，5μg/mL胡萝卜苷，5μg/mL的葛根素，4μg/mL的β-谷甾醇，30μg/mL的海藻糖和溶剂，其中溶剂为PBS溶液。复合干细胞生物制剂的制备方法为：(1)取小鼠腹股沟脂肪组织，用0.2％的胶原酶溶液消化后，接种到无血清培养基中培养，2d后更换新鲜培养基，以后每1d更换一次，待细胞融合达到80％后传代；(2)将P2代脂肪干细胞用胰酶溶液消化，然后接种到无血清培养基中，先在5％CO2,37℃常氧培养2d，然后更换新鲜培养基，在1％O2，5％CO2,94％N2，37℃条件下低氧培养1d；(3)将低氧培养得到的脂肪干细胞进行表型检测，表型检测合格标准为：CD31、CD34和CD45＜1％，CD29、CD73、CD90＞95％；(4)将表型检测合格的脂肪干细胞用溶剂重悬，然后加入其余原料，配制得到复合干细胞生物制剂。实施例2一种复合干细胞生物制剂，包括3×107个/mL的脂肪干细胞，8μg/mL胡萝卜苷，6μg/mL的葛根素，5μg/mL的β-谷甾醇，45μg/mL的细胞保护剂和溶剂。其中，细胞保护剂为海藻糖和人血白蛋白的混合物，海藻糖和人血白蛋白的重量比为1:1；溶剂为PBS溶液。复合干细胞生物制剂的制备方法为：(1)取小鼠腹股沟脂肪组织，用0.25％的胶原酶溶液消化后，接种到无血清培养基中培养，2d后更换新鲜培养基，以后每1d更换一次，待细胞融合达到80％后传代；(2)将P2代脂肪干细胞用胰酶溶液消化，然后接种到无血清培养基中，先在5％CO2,37℃常氧培养2d，然后更换新鲜培养基，在1％O2，5％CO2,94％N2，37℃条件下低氧培养1d；(3)将低氧培养得到的脂肪干细胞进行表型检测，表型检测合格标准为：CD31、CD34和CD45＜1％，CD29、CD73、CD90＞95％；(4)将表型检测合格的脂肪干细胞用溶剂重悬，然后加入其余原料，配制得到复合干细胞生物制剂。实施例3一种复合干细胞生物制剂，包括5×107个/mL的脂肪干细胞，10μg/mL胡萝卜苷，10μg/mL的葛根素，6μg/mL的β-谷甾醇，50μg/mL的海藻糖和溶剂，其中溶剂为生理盐水。复合干细胞生物制剂的制备方法为：(1)取小鼠腹股沟脂肪组织，用0.3％的胶原酶溶液消化后，接种到无血清培养基中培养，3d后更换新鲜培养基，以后每2d更换一次，待细胞融合达到80％后传代；(2)将P2代脂肪干细胞用胰酶溶液消化，然后接种到无血清培养基中，先在5％CO2,37℃常氧培养2d，然后更换新鲜培养基，在1％O2，5％CO2,94％N2，37℃条件下低氧培养1d；(3)将低氧培养得到的脂肪干细胞进行表型检测，表型检测合格标准为：CD本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种复合干细胞生物制剂，其特征在于，包括脂肪干细胞，胡萝卜苷，葛根素，β-谷甾醇，溶剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种复合干细胞生物制剂，其特征在于，包括脂肪干细胞，胡萝卜苷，葛根素，β-谷甾醇，溶剂。


2.根据权利要求1所述的复合干细胞生物制剂，其特征在于，所述脂肪干细胞为1×107-5×107个/mL，胡萝卜苷为5-10μg/mL，葛根素为5-10μg/mL，β-谷甾醇为4-6μg/mL。


3.根据权利要求1或2所述的复合干细胞生物制剂，其特征在于，还包括细胞保护剂，所述细胞保护剂为海藻糖、人血白蛋白或两者的混合物；优选地，所述细胞保护剂为30-50μg/mL。


4.根据权利要求1-3任一项所述的复合干细胞生物制剂，其特征在于，所述溶剂为PBS溶液或者生理盐水。


5.根据权利要求1-4任一项所述的复合干细胞生物制剂，其特征在于，所述复合干细胞生物制剂的制备方法包括下述步骤：
S1、从脂肪组织中分离、培养脂肪干细胞；
S2、将得到的脂肪干细胞进行表型检测；
S3、将表型检测合格的脂肪干细胞用溶剂重悬，然后加入其余原料，配制得到复合干细胞生物制剂。


6.根据权利要求5所述的复合干细胞生物制剂，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：张鹏成，
申请(专利权)人：安徽科门生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34