一种用于痛风的脐带间充质干细胞制剂制造技术

本发明专利技术公开了一种用于痛风的脐带间充质干细胞制剂，包括脐带间充质干细胞1

【技术实现步骤摘要】
一种用于痛风的脐带间充质干细胞制剂


[0001]本专利技术涉及干细胞
，尤其涉及一种用于痛风的脐带间充质干细胞制剂。

技术介绍

[0002]痛风是嘌呤代谢紊乱和(或)尿酸排泄障碍导致血尿酸增高的一种疾病。痛风在临床上表现为高尿酸血症、痛风性关节炎，还会引发肾炎以及肾尿酸结石。由于痛风经常反复发作，导致关节肿痛，甚至变形，不仅严重影响了患者的生活和工作，还会使患者的生活质量显著下降。目前，应用于痛风治疗或者缓解症状的药物，长期服用往往会带来不良反应，因此，开发不良反应更低、而且疗效好的治疗方式，成为痛风治疗研究的重要方向。
[0003]干细胞具有很高的再生能力，能够修复受损的机体组织。干细胞还能够分泌各种细胞因子，起到增加抗炎细胞因子和免疫调节因子、抑制促炎因子生成的作用，从而有效缓解炎症。痛风的症状与关节损伤以及炎症因子的大量分泌有着密切的关系，有研究表明干细胞制剂对痛风的治疗具有一定的疗效。由于干细胞制剂具有不良反应低的特点，开发疗效好的痛风治疗用干细胞制剂具有很大的应用潜力。

技术实现思路

[0004]基于
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术提出了一种用于痛风的脐带间充质干细胞制剂。
[0005]本专利技术提出的一种用于痛风的脐带间充质干细胞制剂，包括脐带间充质干细胞1
‑5×
106个/mL、车前子多糖5
‑
20mg/mL、甘露聚糖肽200
‑
300μg/mL、茶多酚50
‑
100μg/mL、其余为生理盐水。
[0006]优选地，所述脐带间充质干细胞的制备方法为：
[0007](1)取新鲜脐带经过消毒、清洗后，剔除血管，剪成块状，将得到的组织块依次用胰蛋白酶、胶原酶消化，然后用PBS洗涤，置于培养皿中，加入含10％胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5％CO2培养箱中进行培养，待细胞融合度达到80
‑
90％后，按1:(2
‑
4)的比例进行传代，记为P1代；
[0008](2)采用含10％胎牛血清的DMEM培养基对所述P1代细胞传代培养至P3
‑
P5代，然后去除培养基，用胰酶消化后，离心收集细胞，即得。
[0009]优选地，步骤(1)中，将得到的组织块依次用胰蛋白酶、胶原酶消化的具体步骤为：将组织块置于培养皿中，加入浓度为0.125％的胰蛋白酶，在37℃水浴下消化20
‑
30min，然后离心，弃去上清液，将得到的组织块用PBS洗涤后置于培养皿中，加入浓度为0.2％的胶原酶，在37℃水浴下消化1.5
‑
2h，然后离心，弃去上清液，即可。
[0010]优选地，步骤(2)中，加入浓度为0.125％的胰蛋白酶，在37℃水浴下消化10
‑
15min后，在1000
‑
1500r/min下离心5
‑
10min，即可。
[0011]优选地，所述车前子多糖的制备方法为：将干燥的车前子用8
‑
10倍重量的乙醇浸泡过夜，然后过滤，取滤渣，加入10
‑
15倍重量的水，在90
‑
95℃下提取3
‑
5h，然后将滤液浓
缩，用乙醇沉淀，将沉淀物依次用无水乙醇、丙酮洗涤，冷冻干燥后，将得到的粗多糖加入10
‑
15倍重量的水溶解，然后除去杂蛋白，用水透析后浓缩、用乙醇沉淀、干燥，即得。
[0012]一种所述的用于痛风的脐带间充质干细胞制剂的制备方法，包括下述步骤：
[0013]S1、分别将甘露聚糖肽、茶多酚溶于适量生理盐水中，得到甘露聚糖肽溶液和茶多酚溶液；再将所述甘露聚糖肽溶液、茶多酚溶液混合均匀，加热搅拌，然后冷却至室温，得到组分A；
[0014]S2、将车前子多糖溶于适量生理盐水，得到组分B；
[0015]S3、将培养后离心收集得到的脐带间充质干细胞用适量生理盐水重悬，得到组分C；
[0016]S4、将组分A、组分B与组分C混合后，用生理盐水定容至一定体积，即得。
[0017]优选地，S1中，加热搅拌的条件为：在30
‑
40℃下搅拌30
‑
60min。
[0018]一种用于痛风的脐带间充质干细胞制剂，由所述的制备方法制得。
[0019]本专利技术的有益效果如下：
[0020]本专利技术的干细胞制剂以脐带间充质干细胞、车前子多糖、甘露聚糖肽、茶多酚作为主要组分，其中脐带间充质干细胞能够起到修复受损的机体组织、增加抗炎细胞因子和免疫调节因子、抑制促炎因子生成的作用，有效缓解炎症；车前子多糖、茶多酚不仅能够起到抗氧化作用，提高脐带间充质干细胞的活力，还能降低炎性因子IL
‑
1β的生成，起到很好的抗炎作用；车前子多糖、甘露聚糖肽、茶多酚复配，还可以起到协同作用，提高干细胞制剂体系的稳定性，使其能够更好地发挥抗炎、修复的功效。在制备过程中，通过将茶多酚、甘露聚糖肽先进行混合，使茶多酚与甘露聚糖肽之间能够形成多酚
‑
多肽共价复合物，再与车前子多糖、脐带间充质干细胞进行混合的方法，既能提高体系中茶多酚和车前子多糖的稳定性和生物活性，使其更好地发挥抗炎功效，而且该方法所形成的复合体系有利于维持脐带间充质干细胞的生物活性，从而更好地发挥脐带间充质干细胞修复组织、抑制促炎因子生成的作用。因此，本专利技术的干细胞制剂能够抑制促炎因子的生成，有效缓解痛风引起的关节肿胀、疼痛等症状，具有疗效好、不良反应低的优点。
具体实施方式
[0021]下面，通过具体实施例对本专利技术的技术方案进行详细说明。
[0022]实施例1
[0023]一种用于痛风的脐带间充质干细胞制剂，包括脐带间充质干细胞3
×
106个/mL、车前子多糖15mg/mL、甘露聚糖肽250μg/mL、茶多酚80μg/mL、其余为生理盐水。
[0024]其制备方法包括下述步骤：
[0025]S1、分别将250mg甘露聚糖肽溶于100mL生理盐水中，将80mg茶多酚溶于100mL生理盐水中，得到甘露聚糖肽溶液和茶多酚溶液；再将甘露聚糖肽溶液、茶多酚溶液混合均匀，在35℃下搅拌40min，然后冷却至室温，得到组分A；
[0026]S2、将干燥的车前子用9倍重量的浓度为80％的乙醇浸泡过夜，然后过滤，取滤渣，加入12倍重量的水，在90℃下提取4h，然后将滤液浓缩，用浓度为80％的乙醇沉淀，将沉淀物依次用无水乙醇、丙酮洗涤，冷冻干燥后，将得到的粗多糖加入12倍重量的水溶解，然后加入1/3体积的氯仿
‑
正丁醇混合液(由氯仿与正丁醇按体积比为4:1混合得到)振摇离心除
去水相和有机相交界处的蛋白层，取水相重复用氯仿
‑
正丁醇混合液去除杂蛋白，直至水相和有机相交界处无蛋白层，然后将水相用水透析后浓缩、用浓度为80％的乙醇沉淀、干燥，得到车本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于痛风的脐带间充质干细胞制剂，其特征在于，包括脐带间充质干细胞1
‑5×
106个/mL、车前子多糖5
‑
20mg/mL、甘露聚糖肽200
‑
300μg/mL、茶多酚50
‑
100μg/mL、其余为生理盐水。2.根据权利要求1所述的用于痛风的脐带间充质干细胞制剂，其特征在于，所述脐带间充质干细胞的制备方法为：(1)取新鲜脐带经过消毒、清洗后，剔除血管，剪成块状，将得到的组织块依次用胰蛋白酶、胶原酶消化，然后用PBS洗涤，置于培养皿中，加入含10％胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5％CO2培养箱中进行培养，待细胞融合度达到80
‑
90％后，按1:(2
‑
4)的比例进行传代，记为P1代；(2)采用含10％胎牛血清的DMEM培养基对所述P1代细胞传代培养至P3
‑
P5代，然后去除培养基，用胰酶消化后，离心收集细胞，即得。3.根据权利要求2所述的用于痛风的脐带间充质干细胞制剂，其特征在于，步骤(1)中，将得到的组织块依次用胰蛋白酶、胶原酶消化的具体步骤为：将组织块置于培养皿中，加入浓度为0.125％的胰蛋白酶，在37℃水浴下消化20
‑
30min，然后离心，弃去上清液，将得到的组织块用PBS洗涤后置于培养皿中，加入浓度为0.2％的胶原酶，在37℃水浴下消化1.5
‑
2h，然后离心，弃去上清液，即可。4.根据权利要求2所述的用于痛风的脐带间充质干细胞制剂，其特征在于，步骤(2)中，加入浓度为0.125％的胰蛋白酶，在37℃水浴下消...

【专利技术属性】
技术研发人员：张正亮，
申请(专利权)人：安徽科门生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：