一种含干细胞外泌体的雾化剂及其用于治疗肺部疾病的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种含干细胞外泌体的雾化剂，包括下述组分：脐带间充质干细胞外泌体1

【技术实现步骤摘要】
一种含干细胞外泌体的雾化剂及其用于治疗肺部疾病的应用


[0001]本专利技术涉及干细胞制剂
，尤其涉及一种含干细胞外泌体的雾化剂及其用于治疗肺部疾病的应用。

技术介绍

[0002]肺是人体重要的呼吸器官。肺损伤多由肺部外伤、感染等因素引起，其不仅会导致人们生活质量的下降，甚至严重威胁到人体的健康和寿命。干细胞能够促进肺部损伤组织的修复，减少促炎细胞因子，降低过度炎症反应，对于抗肺纤维化和肺部炎症具有良好的防治效果。但是，直接向体内输入干细胞的作用是有限的。干细胞外泌体是干细胞分泌微小的囊泡，主要功效成分包括mRNA、microRNA和蛋白质等，与干细胞的生物学性能相似而更加安全稳定高效，膜结构与细胞膜相同，可以通过胞吞进入细胞，在体内发挥更持久的作用。多项研究表明，干细胞外泌体通过雾化的形式吸入，可以起到靶向修复肺部损伤的效果，其对肺部疾病的干预效果优于直接使用干细胞。因此，对于肺部疾病的治疗来说，干细胞外泌体雾化制剂的开发是一个很有前景的研究方向。

技术实现思路

[0003]基于
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术提出了一种含干细胞外泌体的雾化剂及其用于治疗肺部疾病的应用。
[0004]本专利技术提出的一种含干细胞外泌体的雾化剂，包括下述组分：脐带间充质干细胞外泌体1
‑
10μg/mL、脐带多肽10
‑
30μg/mL、黄芪多糖30
‑
50μg/mL、余量为缓冲液。
[0005]优选地，所述缓冲液为PBS缓冲液、乙酸
‑
乙酸钠缓冲液、柠檬酸
‑
柠檬酸钠缓冲液、硼酸
‑
硼砂缓冲液中的至少一种。
[0006]优选地，所述缓冲液的pH为5
‑
7。
[0007]一种所述的含干细胞外泌体的雾化剂的制备方法，包括下述步骤：
[0008]S1、取新鲜脐带经过消毒、清洗后，剔除血管，剪成块状，将得到的组织块依次用胰蛋白酶、胶原酶消化，然后用PBS洗涤，置于培养皿中，加入含10％胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5％CO2培养箱中进行培养，待细胞融合度达到80
‑
90％后，按1:(2
‑
4)的比例进行传代，记为P1代，并收集P1代传代后剩下的组织块；
[0009]S2、采用含10％胎牛血清的DMEM培养基对所述P1代细胞传代培养至P3
‑
P5代，待P3
‑
P5代细胞融合度达到80
‑
90％后，去除培养基，用PBS洗涤细胞后，加入DMEM/F12无血清培养基培养20
‑
30h，离心，收集上清液，然后将所述上清液超速离心，收集沉淀，得到脐带间充质干细胞外泌体；
[0010]S3、将所述传代后剩下的组织块用PBS洗涤后置于培养瓶中，加入复合酶液进行酶解反应，酶解反应结束后，先高温灭酶，然后冷却、离心，将得到的上清液采用截留分子量为1万的超滤膜进行超滤，收集透过液进行浓缩、冷冻干燥，得到脐带多肽；
[0011]S4、分别将脐带间充质干细胞外泌体、脐带多肽和黄芪多糖加入适量缓冲液充分
溶解，得到脐带间充质干细胞外泌体溶液、脐带多肽溶液和黄芪多糖溶液，然后将脐带间充质干细胞外泌体溶液、脐带多肽溶液和黄芪多糖溶液按比例混合均匀，加入缓冲液定容至一定浓度，即得。
[0012]优选地，S1中，将得到的组织块依次用胰蛋白酶、胶原酶消化的具体步骤为：将组织块置于培养皿中，加入浓度为0.125％的胰蛋白酶，在37℃水浴下消化20
‑
30min，然后离心，弃去上清液，将得到的组织块用PBS洗涤后置于培养皿中，加入浓度为0.2％的胶原酶，在37℃水浴下消化1.5
‑
2h，然后离心，弃去上清液，即可。
[0013]优选地，S2中，超速离心的转速为100000
‑
150000r/min，时间为30
‑
90min。
[0014]优选地，S3中，所述复合酶液由胰蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶组成，其中胰蛋白酶的浓度为0.1
‑
0.15％，中性蛋白酶的浓度为0.1
‑
0.2％，碱性蛋白酶的浓度为0.1
‑
0.15％。
[0015]优选地，S3中，所述酶解反应的条件为：在35
‑
45℃水浴下酶解5
‑
10h。
[0016]一种所述的含干细胞外泌体的雾化剂用于治疗肺部疾病的应用。
[0017]本专利技术的有益效果如下：
[0018]本专利技术以脐带间充质干细胞外泌体、脐带多肽以及黄芪多糖为主要有效组分制备雾化剂，其中脐带间充质干细胞外泌体通过雾化的形式吸入，可以起到靶向抗炎、修复肺部损伤的效果，而脐带多肽是以在制备脐带间充质干细胞外泌体中残余的组织块经过复合酶酶解法制得，可以很好地回收利用剩余的组织块，而且采用复合酶酶解得到的脐带多肽具有优异的抗炎效果，小分子脐带多肽还能改善细胞代谢，从而促进肺部组织对脐带间充质干细胞外泌体的吸收，有利于进一步促进肺部组织的快速修复；黄芪多糖具有抗炎、抗氧化的作用，不仅有利于修复肺部损伤，还能缓解肺部组织在纤维化过程中产生的氧化应激。因此，本专利技术雾化剂的各组分之间具有协同作用，其抗炎、修复肺部损伤的效果更为优异，在肺部疾病治疗领域具有很好的应用前景。
具体实施方式
[0019]下面，通过具体实施例对本专利技术的技术方案进行详细说明。
[0020]实施例1
[0021]一种含干细胞外泌体的雾化剂，包括下述组分：脐带间充质干细胞外泌体2μg/mL、脐带多肽15μg/mL、黄芪多糖40μg/mL、余量为pH为6.5的PBS缓冲液。
[0022]上述含干细胞外泌体的雾化剂的制备方法包括下述步骤：
[0023]S1、取新鲜脐带经过消毒、清洗后，剔除血管，剪成块状，将得到的组织块置于培养皿中，加入浓度为0.125％的胰蛋白酶，在37℃水浴下消化25min，然后离心，弃去上清液，将得到的组织块用PBS洗涤后置于培养皿中，加入浓度为0.2％的胶原酶，在37℃水浴下消化100min，然后在1000r/min下离心10min，弃去上清液，用PBS洗涤后，置于培养皿中，加入含10％胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5％CO2培养箱中进行培养，待细胞融合度达到80％后，按1:3的比例进行传代，记为P1代，并收集P1代传代后剩下的组织块；
[0024]S2、采用含10％胎牛血清的DMEM培养基对所述P1代细胞传代培养至P3代，待P3代细胞融合度达到800％后，去除培养基，用PBS洗涤细胞后，加入DMEM/F12无血清培养基培养25h，在1000r/min下离心10min，收集上清液，然后将所述上清液在120000r/min下超速离心
60min，收集沉淀，得到脐带间充质干细胞外泌体；
[0025]S3、将所述传代后剩下本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种含干细胞外泌体的雾化剂，其特征在于，包括下述组分：脐带间充质干细胞外泌体1
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10μg/mL、脐带多肽10
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30μg/mL、黄芪多糖30
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50μg/mL、余量为缓冲液。2.根据权利要求1所述的含干细胞外泌体的雾化剂，其特征在于，所述缓冲液为PBS缓冲液、乙酸
‑
乙酸钠缓冲液、柠檬酸
‑
柠檬酸钠缓冲液、硼酸
‑
硼砂缓冲液中的至少一种。3.一种如权利要求1或2所述的含干细胞外泌体的雾化剂的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：S1、取新鲜脐带经过消毒、清洗后，剔除血管，剪成块状，将得到的组织块依次用胰蛋白酶、胶原酶消化，然后用PBS洗涤，置于培养皿中，加入含10％胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5％CO2培养箱中进行培养，待细胞融合度达到80
‑
90％后，按1:(2
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4)的比例进行传代，记为P1代，并收集P1代传代后剩下的组织块；S2、采用含10％胎牛血清的DMEM培养基对所述P1代细胞传代培养至P3
‑
P5代，待P3
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P5代细胞融合度达到80
‑
90％后，去除培养基，用PBS洗涤细胞后，加入DMEM/F12无血清培养基培养20
‑
30h，离心，收集上清液，然后将所述上清液超速离心，收集沉淀，得到脐带间充质干细胞外泌体；S3、将所述传代后剩下的组织块用PBS洗涤后置于培养瓶中，加入复合酶液进行酶解反应，酶解反应结束后，先高温灭酶，然后冷却、离心，将得到的上清液采用截留分子量为1万的超滤膜进行超滤，收...

【专利技术属性】
技术研发人员：张正亮，
申请(专利权)人：安徽科门生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：