一种含干细胞外泌体提取物的制剂及其用于生发或皮肤再生修复的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种含干细胞外泌体提取物的制剂，包括间充质干细胞外泌体提取物和溶剂；间充质干细胞外泌体提取物的制备方法为：将纳米羟基磷灰石加入含10％胎牛血清的基础培养基中分散均匀得到混合培养基质，将所述混合培养基质加入培养容器中，然后接种P1

【技术实现步骤摘要】
一种含干细胞外泌体提取物的制剂及其用于生发或皮肤再生修复的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种含干细胞外泌体提取物的制剂及其用于生发或皮肤再生修复的应用。

技术介绍

[0002]间充质干细胞是一种多能干细胞，它具有强大的增殖能力和多向分化能力，且能分泌各种功能性因子，能够促进毛发和皮肤的再生，在治疗脱发和皮肤组织损伤领域有良好的的应用推广前景。间充质干细胞的外泌体是其向外界环境中分泌的一种纳米囊泡结构，含有蛋白质、脂质、mRNA等生物活性物质，可以直接进入靶细胞中，将其内容物转移到靶细胞内，与直接采用间充质干细胞进行治疗相比具有更稳定、吸收利用效果更好等优势，备受研究者的关注。综上，开发修复效果更好的间充质干细胞外泌体提取物制剂，成为当前生发或皮肤再生修复研究领域的热点。

技术实现思路

[0003]基于
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术提出了一种含干细胞外泌体提取物的制剂及其用于生发或皮肤再生修复的应用。
[0004]本专利技术提出的一种含干细胞外泌体提取物的制剂，包括间充质干细胞外泌体提取物和溶剂；
[0005]所述间充质干细胞外泌体提取物的制备方法为：
[0006]将纳米羟基磷灰石加入含10％胎牛血清的基础培养基中分散均匀得到混合培养基质，将所述混合培养基质加入培养容器中，然后接种P1
‑
P3代间充质干细胞，在37℃、5％CO2条件下培养，分别在培养时间为48h、96h时更换一次混合培养基质，培养6
‑
10d时，先离心去除细胞和细胞碎片，然后将得到的上清液进行超速离心，收集沉淀物，得到间充质干细胞外泌体提取物。
[0007]优选地，所述混合培养基质中，纳米羟基磷灰石的浓度为10
‑
15μg/mL。
[0008]优选地，所述基础培养基为α
‑
MEM培养基或者DMEM培养基。
[0009]优选地，所述间充质干细胞为脂肪间充质干细胞、脐带间充质干细胞或者胎盘间充质干细胞，但不限于以上几种。
[0010]优选地，所述间充质干细胞接种的细胞密度为2
‑8×
104个/ml。
[0011]优选地，所述离心去除细胞和细胞碎片的步骤包括：于4℃下，先以300g的转速离心10
‑
15min，然后以2000g的转速离心10
‑
15min，再以10000g的转速离心30
‑
40min。
[0012]优选地，所述超速离心的条件为：于4℃下，以100000g的转速离心2
‑
3h。
[0013]优选地，每mL所述制剂含10
‑
500μg所述间充质干细胞外泌体提取物。
[0014]优选地，所述含干细胞外泌体提取物的制剂还包括功能添加剂，所述功能添加剂为当归多糖、人参多糖、铁皮石斛多糖中的至少一种；优选地，每mL所述制剂含所述功能添
加剂20
‑
50μg。
[0015]优选地，所述溶剂为生理盐水。
[0016]本专利技术还公开了所述的含干细胞外泌体提取物的制剂用于生发或皮肤再生修复的应用。
[0017]本专利技术的有益效果如下：
[0018]本专利技术通过在培养基中加入适量纳米羟基磷灰石对间充质干细胞进行诱导培养使其发生成骨分化，成骨分化诱导一段时间后的间充质干细胞外泌体中细胞因子Wnt3α的表达量增加，可以通过激活上调靶细胞中的Wnt/β
‑
catenin信号通路达到促进头发再生的效果，同时Wnt/β
‑
catenin信号通路的增强也有助于皮肤的创口愈合。因此，本专利技术的间充质干细胞外泌体提取物能够显著提升其在生发和皮肤修复方面的效果；进一步地，通过在制剂中加入功能添加剂例如当归多糖、人参多糖、铁皮石斛多糖，其能够上调碱性成纤维细胞生长因子(BFGF)和/或血管内皮生长因子(VEGF)的表达，通过对这些关键细胞因子的分泌量增加来进一步改善制剂对头发再生和创口愈合的疗效。综上，本专利技术的含干细胞外泌体提取物的制剂对生发和皮肤的再生修复方面取得了疗效的显著提升，在治疗脱发和皮肤组织损伤领域有着良好的的应用前景。
具体实施方式
[0019]下面，通过具体实施例对本专利技术的技术方案进行详细说明。
[0020]实施例1
[0021]一种含干细胞外泌体提取物的制剂，包括脂肪间充质干细胞外泌体提取物100μg/mL、余量为生理盐水；
[0022]脂肪间充质干细胞的原代、传代培养方法如下：
[0023]将脂肪组织清洗、消毒后粉碎，用0.2％的Ⅰ型胶原酶在37℃下消化50min，然后加入含0.2％胎牛血清的α
‑
MEM培养基终止消化，过滤除去脂肪组织残块，然后以1500g的转速离心5min，将得到的沉淀物细胞用含10％胎牛血清的α
‑
MEM培养基重悬，置于培养箱中在37℃、5％CO2条件下培养，每48h更换一次培养基，当细胞融合度达到80
‑
90％时，用0.25％的胰蛋白酶溶液消化细胞，得到原代细胞，记为P0代脂肪间充质干细胞；将P0代按1:3的比例进行传代培养，得到P1
‑
3代脂肪间充质干细胞。
[0024]脂肪间充质干细胞外泌体提取物的制备方法为：
[0025]将纳米羟基磷灰石加入含10％胎牛血清的α
‑
MEM培养基中分散均匀得到混合培养基质，将混合培养基质加入24孔培养板中，然后以4
×
104个/ml的细胞密度接种P1代脂肪间充质干细胞，置于培养箱中在37℃、5％CO2条件下培养，分别在培养时间为48h、96h时更换一次混合培养基质，培养9d时，先于4℃下，先以300g的转速离心10min，然后以2000g的转速离心10min，再以10000g的转速离心30min，然后将得到的上清液于4℃下，以100000g的转速离心150min，收集沉淀物，得到脂肪间充质干细胞外泌体提取物；其中，混合培养基质中，纳米羟基磷灰石的浓度为14μg/mL。
[0026]实施例2
[0027]一种含干细胞外泌体提取物的制剂，包括脂肪间充质干细胞外泌体提取物100μg/mL、当归多糖35μg/mL、余量为生理盐水；
[0028]脂肪间充质干细胞的原代、传代培养方法同实施例1。
[0029]脂肪间充质干细胞外泌体提取物的制备方法为：
[0030]将纳米羟基磷灰石加入含10％胎牛血清的α
‑
MEM培养基中分散均匀得到混合培养基质，将混合培养基质加入24孔培养板中，然后以4
×
104个/ml的细胞密度接种P1代脂肪间充质干细胞，置于培养箱中在37℃、5％CO2条件下培养，分别在培养时间为48h、96h时更换一次混合培养基质，培养9d时，先于4℃下，先以300g的转速离心10min，然后以2000g的转速离心10本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种含干细胞外泌体提取物的制剂，其特征在于，包括间充质干细胞外泌体提取物和溶剂；所述间充质干细胞外泌体提取物的制备方法为：将纳米羟基磷灰石加入含10％胎牛血清的基础培养基中分散均匀得到混合培养基质，将所述混合培养基质加入培养容器中，然后接种P1
‑
P3代间充质干细胞，在37℃、5％CO2条件下培养，分别在培养时间为48h、96h时更换一次混合培养基质，培养6
‑
10d时，先离心去除细胞和细胞碎片，然后将得到的上清液进行超速离心，收集沉淀物，得到间充质干细胞外泌体提取物。2.根据权利要求1所述的含干细胞外泌体提取物的制剂，其特征在于，所述混合培养基质中，纳米羟基磷灰石的浓度为10
‑
15μg/mL。3.根据权利要求1所述的含干细胞外泌体提取物的制剂，其特征在于，所述基础培养基为α
‑
MEM培养基或者DMEM培养基。4.根据权利要求1所述的含干细胞外泌体提取物的制剂，其特征在于，所述间充质干细胞为脂肪间充质干细胞、脐带间充质干细胞或者胎盘间充质干细胞；所述间充质干细胞接种的细胞密度为2
‑8×
104个/ml。5.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：张正亮，
申请(专利权)人：安徽科门生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：