【技术实现步骤摘要】
一种LFF1细胞的构建方法
：本专利技术属于生物
，具体地说，涉及一种LFF1细胞及其构建方法。
技术介绍
：慢病毒(Lentivirus，LV)为一类逆转录病毒的亚群。由HIV-1改建而来的慢病毒载体系统以其高效而稳定的基因转移效率而成为近年来研究者们的主要选择。由于LV既能感染处于分裂期的细胞，又能感染处于非分裂期的细胞，而且由LV携带整合入宿主基因组的目的基因对转录沉默作用有较强的抵抗力，使得目的基因可在宿主细胞内的长期而稳定表达。同时，慢病毒感染目的细胞的过程与天然HIV病毒感染细胞的过程比较相似，但慢病毒无法自我复制，具有较高的生物安全性。综上所述，与其他逆转录病毒载体相比，LV具有较高的基因转导效率，蛋白表达具有长期稳定性及较高的生物安全性。因此，以慢病毒载体为表达载体，包装为重组慢病毒后感染目的细胞促使其大量表达抗原的方法具有重大优势与意义。目前，在肿瘤的特异性免疫治疗方面，现有的LAK、DC、CIK、DC-CIK细胞和方法基本被证明是无效的，而NK、CAR-NK、TIL、等细胞技术还有待成熟，CAR－T细胞在安全性和实体瘤治疗中还有缺陷。现有...
【技术保护点】
1.一种LFF1细胞的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对外周血进行ctDNA外显子测序，或者以肿瘤组织进行全外显子测序，筛选出突变位点，进行抗原表位预测；所述抗原表位的预测是以突变的氨基酸位点为中心，向两侧延伸8个氨基酸，作为潜在抗原表位，分析潜在抗原表位的IC50，将IC50＜1000nM的潜在抗原表位确定为抗原表位；(2)分析任意抗原表位两两相连后接头处的IC50，IC50≥1000nM时进行多肽连接，并进行基因合成；(3)将步骤(2)合成的基因构建表达抗原表位肽的慢病毒表达质粒，并进行慢病毒包装；(4)使用表达抗原表位肽的慢病毒转染抗原呈递细胞，并与PBMC...
【技术特征摘要】
2018.09.30 CN 201811153201X1.一种LFF1细胞的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对外周血进行ctDNA外显子测序，或者以肿瘤组织进行全外显子测序，筛选出突变位点，进行抗原表位预测；所述抗原表位的预测是以突变的氨基酸位点为中心，向两侧延伸8个氨基酸，作为潜在抗原表位，分析潜在抗原表位的IC50，将IC50＜1000nM的潜在抗原表位确定为抗原表位；(2)分析任意抗原表位两两相连后接头处的IC50，IC50≥1000nM时进行多肽连接，并进行基因合成；(3)将步骤(2)合成的基因构建表达抗原表位肽的慢病毒表达质粒，并进行慢病毒包装；(4)使用表达抗原表位肽的慢病毒转染抗原呈递细胞，并与PBMC共孵育得到效应细胞；(5)将T细胞上的免疫抑制性信号分子进行敲除，制备得到LFF1细胞。2.如...
【专利技术属性】
技术研发人员：焦顺昌，张嵘，张天赋，周子珊，宋玉洁，陈小彬，解佳森，
申请(专利权)人：北京鼎成肽源生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11
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