本发明专利技术涉及一株解淀粉芽胞杆菌Bs‑18的生防功能基因序列。野生生防菌株解淀粉芽胞杆菌Bs‑18防治黄瓜白粉病菌大田防治效果达79.2%，通过构建Bs‑18的突变体文库，从突变体库中筛选到一株生防功能发生明显变化的突变体T4‑7，反向PCR方法获得其插入基因片段的序列。为了验证此基因片段与生防作用相关，通过电击转化的方法获得了基因恢复株，大田防治试验结果表明基因恢复株的生防效果高于T4‑7菌株，但又略低于野生生防菌株Bs‑18。由此说明此基因片段与生防菌株Bs‑18的生防作用相关，可以达到防治黄瓜白粉病菌的目的。
Sequence and Application of a Biocontrol Functional Gene of Bacillus amylolytica
【技术实现步骤摘要】
一株解淀粉芽胞杆菌生防功能基因序列及其应用
本专利技术属于生防控制
，涉及一株解淀粉芽胞杆菌菌株Bs-18的生防功能相关的基因，具体内容涉及一株优良的解淀粉芽胞杆菌菌株Bs-18的生防功能基因序列。
技术介绍
随着许多微生物基因组全序列的获得，人们对微生物关注和研究的热点逐渐从结构基因组学转移到功能基因组学上。转座子随机突变技术因操作简单逐渐成为研究功能基因组（如发现新基因、克隆功能基因、发掘已知基因的新功能）的一种有效工具。目前利用转座子随机突变技术获得了枯草芽胞杆菌与芽孢形成、生物被膜形成以及植物与微生物互作等相关的基因。可见转座子突变技术已成为发现功能基因的一种有效手段。穿梭质粒载体pMarA上携带转座子TnYLB-1，它具有转座频率高、插入稳定、随机插入、非寄主专化性等优点，已成为人们研究细菌基因功能的首选转座子。解淀粉芽胞杆菌具有抗菌谱广，对人畜无毒，不污染环境，抗逆能力强，稳定性好等优点，作为生防菌株应用于农业生产，在农作物病害的生物防治方面发挥着重要的作用。本实验室从黄瓜根际土壤中分离到一株解淀粉芽胞杆菌Bs-18，对黄瓜白粉病的大田防效达79.2%，从分子水平揭示生防菌株发挥生防作用的机制，获得生防作用相关的基因序列，将为生防菌株的改造、新基因的发掘及有效使用提供理论基础。
技术实现思路
为实现上述目的，本专利技术公开了如下的
技术实现思路
：一株解淀粉芽胞杆菌Bs-18的生防功能基因序列，如SEQIDNO.1所示，其所对应的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。本专利技术进一步公开了用于解淀粉芽胞杆菌Bs-18的生防功能基因序列构建的特异性引物，其特征在于：T4-7FwdGGCGGATCCGTCCGTTTCATAAGTTGACAAGACGSEQIDNO.3；T4-7RevGCCGAATTCCAAAGGAAGTGGCAGCGAATGSEQIDNO.4。本专利技术更进一步公开了一株用于构建解淀粉芽胞杆菌Bs-18的生防功能突变体，菌株命名为T4-7，其特征在于该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏登记号为：CGMCCNo.17316；保藏时间为：2019年3月8日。所述的突变株T4-7为解淀粉芽孢杆菌Bs-18被TnYLB-1转座子随机插入的突变株。突变株T4-7由天津市植物保护研究所植物病害生物防治研究室筛选得到，T4-7被中国科学院微生物研究所鉴定为一株解淀粉芽胞杆菌（Bacillusamyloliquefaciens），并保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏登记号为：CGMCCNo.17316；保藏时间为：2019年3月8日。中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。解淀粉芽胞杆菌突变株（Bacillusamyloliquefaciens）命名为T4-7的生理生化特性如下：菌株T4-7为从土壤中分离出的野生解淀粉芽胞杆菌菌株Bs-18被转座子TnYLB-1随机插入的突变体菌株，为革兰氏阳性芽胞杆菌，具有解淀粉能力。菌株在LB培养基上菌落半透明状，在干燥情况下菌落有褶皱，边缘界限明显。生长温度30℃—36℃生长良好。本专利技术同时也公开了一种采用所述的用于构建解淀粉芽胞杆菌Bs-18的生防功能突变体T4-7插入基因序列获得及其恢复株的构建方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）突变体T4-7插入基因的测序：通过反向PCR法获得T4-7被转座子TnYLB-1随机插入的插入片段序列；（2）插入基因的PMK4穿梭质粒表达载体的构建：应用限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切T4-7的插入基因全序列和质粒PMK4，再将酶切片段连接构建重组载体；将构建的重组载体转化大肠杆菌，挑取正确的转化子进行测序，所测序列与插入基因序列、质粒PMK4进行BLAST比对分析，同源性100%说明构建的穿梭质粒表达载体构建成功；（3）突变体插入基因功能的恢复：将构建的重组表达载体电击转化突变体T4-7；（4）大田防治试验验证此基因的生防功能：通过防治黄瓜白粉病试验，结果表明突变体恢复株的生防效果高于突变株T4-7。本专利技术同时也公开了解淀粉芽胞杆菌Bs-18的生防功能基因序列在防治黄瓜白粉病方面的应用。实验结果显示突变株T4-7的生防效果明显较野生生防菌株降低，而基因恢复株的生防效果高于其突变株，但稍低于野生生防菌株，由此说明基因恢复株参与了野生菌株发挥生防作用的某一环节，但是并不是野生生防菌株发挥生防作用的唯一因子。本专利技术更加详细的描述如下：生防解淀粉芽胞杆菌Bs-18由天津市植物保护研究所粮经病害研究室从黄瓜根际土壤中筛选得到，本研究室应用电击法构建了携带转座子TnYLB-1的穿梭质粒pMarA转化Bs-18的突变体文库，并通过室内平板筛选法筛选到了抑菌作用发生明显变化的突变体菌株T4-7。下面事例以T4-7为研究对象，探索其发生生防作用的相关基因。基因的序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术公开的解淀粉芽胞杆菌Bs-18的生防相关基因的序列为：ATGGCTAAAGGCGGGCTCGGAAAAGGGATTAACGCGTTGTTTAATCAGGTTGATTTGTCTGAAGAGACAGTGGAAGAGATTAAAATCAGTGATTTGCGCCCCAATCCTTATCAGCCAAGAAAACAATTTGACGATGAGTCATTAGCTGAACTGAAGGAATCTATCATTCAGCATGGCATTCTTCAGCCCATTATCGTGAGAAAATCATTGAAGGGCTATGATATTGTAGCCGGCGAACGCCGTTACCGCGCCGCAAAACTTGCCGGTAAAGAGACAGTGCCGGCTATCGTGCGGGATTTATCTGAATCGCTGATGCGAGAAATCGCTCTTTTGGAAAACCTTCAGCGTGAAGACTTATCACCGCTTGAAGAAGCTCTGGCATATGACTCACTGCTGAAGCATTTGGATTTAACCCAGGAACAGCTCGCTAAACGGCTCGGAAAAAGCAGGCCTCATATTGCCAACCATTTAAGACTGCTGACGCTGCCGGAAAGCATCCAGAACCTCATTGCAGAAGGTACGTTATCCATGGGACACGGCAGAACCTTGCTTGGTTTGAAAAATAAAGACAAGCTTGAGCCGCTTGTGAAGAAAGTGGTTGAAGAACAGCTGAACGTCCGTCAGCTTGAGCAGCTGATTCAGCAGTTAAACAACAATGTTCCACGTGAAACAAAGAAAAAAGAACCTGTTCAAGATGTTGTGTTAAAAGAGCGGGAATCGTATTTGCAAAATTACTTCGGAACAACAGTAAATATTAAGAGACAAAAGAAAAAAGGGAAGATTGAGATTGAGTTTTTCTCAAATGAAGATCTTGAACGCATCCTAGAACTATTGTCTGAAAGAGAAGCGTAA其所对应的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示：MAKGGLGKGINALFNQVDLSEE本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一株解淀粉芽胞杆菌Bs‑18的生防功能基因序列，如SEQ ID NO.1所示，其所对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
【技术特征摘要】
1.一株解淀粉芽胞杆菌Bs-18的生防功能基因序列，如SEQIDNO.1所示，其所对应的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。2.一种用于解淀粉芽胞杆菌Bs-18的生防功能基因序列构建的特异性引物，其特征在于：T4-7FwdGGCGGATCCGTCCGTTTCATAAGTTGACAAGACGSEQIDNO.3；T4-7RevGCCGAATTCCAAAGGAAGTGGCAGCGAATGSEQIDNO.4。3.一株用于构建解淀粉芽胞杆菌Bs-18的生防功能突变体，菌株命名为T4-7，其特征在于该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏登记号为：CGMCCNo.17316；保藏时间为：2019年3月8日。4.一种采用权利要求3所述的用于构建解淀粉芽胞杆菌Bs-18的生防功能突变体T4-7进行构建的方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）突变体T4-7插入基因的测序...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙淑琴，杨秀荣，孙冰冰，霍建飞，张惟，
申请(专利权)人：天津市植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：天津,12
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。