间充质干细胞分泌提取物的用途、间充质干细胞分泌提取物及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种间充质干细胞分泌提取物在制备抑制疼痛药物中的应用，能够抑制疼痛，提高疼痛患者生活质量；充分利用了间充质干细胞培养中分泌大量活性物质因子的特点，最大限度发挥了细胞培养上清液的功效，降低废弃的细胞培养上清液作为生物垃圾对自然环境和人类健康存在的潜在危害，也降低了间充质干细胞作为细胞治疗的成本。

Use of secretory extract of mesenchymal stem cells, secretory extract of mesenchymal stem cells and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
间充质干细胞分泌提取物的用途、间充质干细胞分泌提取物及其制备方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种间充质干细胞分泌提取物的用途、间充质干细胞分泌提取物及其制备方法。
技术介绍
慢性疼痛是一种不愉快的感觉性和情绪性体验，这种体验跟明确的、或潜在的、或自己认为的组织损伤有关，疼痛持续或反复发作超过三个月定义为慢性疼痛。全世界约有15亿人饱受慢性疼痛的困扰，被比喻为一种不死的癌症。2018年6月，世界卫生组织修订国际疾病分类，慢性疼痛被定义为疾病。慢性疼痛包括软组织及关节劳损性或退变疼痛、椎间盘源性疼痛、神经源性疼痛。从美国的统计数据看到，2012年的慢性疼痛医疗支出，超过了心脏病、肿瘤和糖尿病三大人类健康杀手的费用总和。由此可见，慢性疼痛所造成的医疗负担极重，全社会都应尽早重视起来。对于慢性疼痛的治疗，目前主要还是以手术和服用止痛药为主，手术带来的创伤性不言而喻，止痛处方药也只能缓解疼痛而未能根除潜在病因。干细胞疗法正在改变整个医疗行业，合理地利用这一科学进步，人类有望使慢性疼痛的影响最小化。干细胞治疗也有望成为提高慢性疼痛患者生活质量的一种突破性方法。间充质干细胞(MesenchymalStemCell，MSC)是一种体内的种子修复细胞，在适当条件下可以分化为包括神经、心脏、肌肉、血管、软骨、骨骼、脂肪、肾脏、肝脏、皮肤等器官或组织的细胞。此外，间质干细胞还具有独特的免疫调节功能，能够控制炎症的同时修复机体内受损的组织。间充质干细胞能够修复机体损伤组织，控制炎症，同时促使自体细胞新生的机理一方面是其自身的增殖分化能力，可以分化成不同的体细胞以代替受损的机体细胞，更重要的一点是其强大的细胞因子分泌功能，形成免疫调节因子(HGF、LIF)、趋化因子(RANTES、SDF-1α、fractalkine、MIP-1α、MCP-1、MCP-2)、支持祖细胞的营养因子(IL-6、FGF-2、PDGF-AA、PDGF-BB、EGF)、血管再生因子(VEGF165、FGF-2、PDGF-AA、PDGF-BB、EGF)、抑制疤痕因子(HGF、FGF-2)、抗凋亡因子(VEGF165、FGF-2、HGF)、伤口愈合相关因子(IL-6、IL-8、TGF-β1、MCP-1、VEGF、GM-CSF、TIMP-1)、各型胶原蛋白(I、II、III、IV型胶原蛋白)以及各种溶菌酶等系统的调控网络。这些细胞因子可有效地调控机体细胞信号传导、活化人体干细胞，进而生理性修复或替代机体损伤、病变及衰老的细胞。但目前人们无论在实验研究，还是GMP(Goodmanufacturingpractices,生产质量管理规范)生产中只关注间充质干细胞的生产，对间充质干细胞培养的上清液当作生物垃圾废弃，这极大地浪费了间充质干细胞在培养过程中分泌的生物活性物质。如何得到一种能够抑制慢性疼痛的物质及充分利用充质干细胞分泌的活性物质，是本领域亟待解决的技术问题。
技术实现思路
针对如何得到一种能够抑制慢性疼痛的物质及充分利用充质干细胞分泌的活性物质的技术问题，本专利技术的目的在于提供一种间充质干细胞分泌提取物的用途、间充质干细胞分泌提取物及其制备方法。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用下述技术方案予以实现：本专利技术提供了一种间充质干细胞分泌提取物的用途，所述间充质干细胞分泌提取物在制备抑制疼痛药物中的应用。进一步地，所述抑制疼痛药物的使用方式是肌肉注射。进一步地，所述抑制疼痛药物中间充质干细胞分泌提取物的用量为0.3±0.05mg/kg。本专利技术还提供了一种如上所述的间充质干细胞分泌提取物，所述间充质干细胞分泌提取物的间充质干细胞来源于人的脐带、羊膜、胎盘、牙髓、骨髓以及脂肪中的任意一种或几种。进一步地，所述间充质干细胞为第3～10代体外培养的传代间充质干细胞。本专利技术还提供了一种如上所述的间充质干细胞分泌提取物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：传代间充质干细胞制备：将体外分离获得的间充质干细胞以无血清培养基进行细胞培养，于37±0.5℃培养直至细胞生长至85±5％融合时进行传代培养，获得传代间充质干细胞；间充质干细胞分泌提取物原液制备：将所述传代的间充质干细胞进行细胞培养，于37±0.5℃培养直至细胞生长至85±5％融合后，于30～-32℃继续培养6～8h，获得细胞培养上清物质，将所述细胞培养上清物质离心去除细胞碎片，获得间充质干细胞分泌提取物原液；间充质干细胞分泌提取物脱敏粗产品制备：将所述间充质干细胞分泌提取物原液用0.22μm滤器过滤，获得的滤液用截留分子量为10KD的超滤管离心，获得间充质干细胞分泌提取物脱敏粗产品；小分子激动剂去除：将所述间充质干细胞分泌提取物脱敏粗产品用截留分子量为3KD的超滤管离心，获得间充质干细胞分泌提取物。进一步地，在所述小分子激动剂去除步骤后，还包括以下步骤：用生理盐水调节间充质干细胞分泌提取物的蛋白总浓度为4±0.1mg/mL，按体积比6％添加Dextran40葡萄糖注射液，获得间充质干细胞分泌提取物蛋白稳定体系。进一步地，所述制备方法中的过滤以及离心均在4±1℃条件下进行。进一步地，所述间充质干细胞分泌提取物原液制备步骤中，于30～-32℃继续培养6～8h培养前和培养后，分别测定细胞活率确认细胞活率大于90％后进行下一步操作。进一步地，所述无血清培养基为质量浓度为5/10％血小板裂解物生理盐水溶液。本专利技术提供了一种间充质干细胞分泌提取物在制备抑制疼痛药物中的应用，能够抑制疼痛，提高疼痛患者生活质量；充分利用了间充质干细胞培养中分泌大量活性物质因子的特点，最大限度发挥了细胞培养上清液的功效，降低废弃的细胞培养上清液作为生物垃圾对自然环境和人类健康存在的潜在危害，也降低了间充质干细胞作为细胞治疗的成本。附图说明图1本专利技术实施例1和2脐带间充质干细胞不同培养温度形态图；图2本专利技术实施例3脐带间充质干细胞不同培养温度、时间细胞培养上清液细胞因子表达谱图；图3本专利技术实施例2至4各制备步骤后蛋白总浓度变化谱图；图4本专利技术实施例5间充质干细胞分泌提取物蛋白稳定体系保存效果图。具体实施方式下面以具体实施方式对专利技术作进一步详细说明本专利技术参照特定的实施例进行了描述，但是，很显然仍可以做出各种修改和变换而不违背本专利技术的精神和范围。因此，本专利技术的说明书和附图应该认为是说明性的而非限制性的。本专利技术提供的一实施例的间充质干细胞分泌提取物，其间充质干细胞分泌提取物的间充质干细胞来源于人的脐带、羊膜、胎盘、牙髓、骨髓以及脂肪中的任意一种或几种，以使该间充质干细胞分泌提取物了用于制备抑制疼痛药物。从而得到一种能够抑制疼痛，提高疼痛患者生活质量的药物；此外，还充分利用了间充质干细胞培养中分泌大量活性物质因子的特点，最大限度发挥了细胞培养上清液的功效，降低废弃的细胞培养上清液作为生物垃圾对自然环境和人类健康存在的潜在危害，也降低了间充质干细胞作为细胞治疗的成本。可选地，该抑制疼痛药物的使用方式是肌肉注射。优选地，肌肉注射位置为疼痛部位。进一步可选地，该抑制疼痛药物中的间充质干细胞分泌提取物用量为0.3±0.05mg/kg。可选地，可将间充质干细胞分泌提取物用注射用水/生理盐水稀释至4±0.1mg/mL罐装于西林瓶中；优选地，添加终体积比为6％的Dex本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种间充质干细胞分泌提取物的用途，其特征在于，所述间充质干细胞分泌提取物在制备抑制疼痛药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞分泌提取物的用途，其特征在于，所述间充质干细胞分泌提取物在制备抑制疼痛药物中的应用。2.根据权利要求1所述的间充质干细胞分泌提取物的用途，其特征在于，所述抑制疼痛药物的使用方式是肌肉注射。3.根据权利要求1所述的间充质干细胞分泌提取物的用途，其特征在于，所述抑制疼痛药物中间充质干细胞分泌提取物的用量为0.3±0.05mg/kg。4.一种如权利要求1至3任意一项所述的间充质干细胞分泌提取物，其特征在于，所述间充质干细胞分泌提取物的间充质干细胞来源于人的脐带、羊膜、胎盘、牙髓、骨髓以及脂肪中的任意一种或几种。5.根据权利要求4所述的间充质干细胞分泌提取物，其特征在于，所述间充质干细胞为第3～10代体外培养的传代间充质干细胞。6.一种如权利要求4或5所述的间充质干细胞分泌提取物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：传代间充质干细胞制备：将体外分离获得的间充质干细胞以无血清培养基进行细胞培养，于37±0.5℃培养直至细胞生长至85±5％融合时进行传代培养，获得传代间充质干细胞；间充质干细胞分泌提取物原液制备：将所述传代的间充质干细胞进行细胞培养，于37±0.5℃培养直至细胞生长至85±5％融合后，于30～-32℃继续...

【专利技术属性】
技术研发人员：王云虹，李志刚，丁炜，王颖颖，王煜骏，高屏宜，郭玉洁，万兴中，刘湖，
申请(专利权)人：北京京蒙细胞生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11