用于治疗勃起功能障碍的干细胞外泌体浓缩液凝胶制剂及其制备方法与给药方法技术

本发明专利技术公开了一种用于治疗勃起功能障碍的干细胞外泌体浓缩液凝胶制剂及其制备方法与给药方法，采用饥饿脐带间充质干细胞的方法,在较短时间内就能得到人脐带间充质外泌体提取物，通过超速离心的方法浓缩以获得高浓度的人脐带间充质干细胞外泌体，其中人间充质干细胞外泌体外用凝胶中含有海藻酸钠和复方电解质注射液作为稳定剂，并含有保湿剂、透皮吸收促进剂，使其形成稳定均一，利于吸收的凝胶状物质。用于男性ED的治疗。

Stem cell exocrine concentrate gel preparation for treating erectile dysfunction and preparation method and administration method thereof

The invention discloses a stem cell exocrine concentrate gel preparation for treating erectile dysfunction, a preparation method and a medication method thereof, and adopts the method of starving umbilical cord mesenchymal stem cells to obtain human umbilical cord mesenchymal exocrine extract in a relatively short time, which is concentrated by ultracentrifugation to obtain high concentration human umbilical cord mesenchymal stem cells exudates. Mesenchymal stem cell exocrine external gel contains sodium alginate and Multiple Electrolytes Injection as stabilizers, and contains moisturizing agents and transdermal enhancers to form stable and uniform gel like substances. For the treatment of male ED.

【技术实现步骤摘要】
用于治疗勃起功能障碍的干细胞外泌体浓缩液凝胶制剂及其制备方法与给药方法
本专利技术涉及干细胞外泌体浓缩液凝胶制剂，尤其是一种用于治疗勃起功能障碍的干细胞外泌体浓缩液凝胶制剂及其制备方法与给药方法。
技术介绍
勃起功能障碍(erectiledysfunction，ED)是最常见的一种男性性功能障碍，指阴茎持续不能达到或维持足够的勃起以完成满意性生活，病程3个月以上。ED一般可分为器质性ED、手术或外伤性ED、精神性ED、阴茎自身病变等，常规的治疗方法可通过口服药物治疗，但药物治疗依赖性强，不能达到根治的目的。脐带间充质干细胞属于成体干细胞，具有多向分化、组织修复、免疫调节等多种功能，因其免疫原性极低，异体使用不会引起免疫排斥，故在临床应用中具有极大的优势。研究显示，脐带间充质干细胞能够一定程度上治疗和缓解ED症状。但是，直接静脉回输脐带间充质干细胞由于细胞难于到达阴茎部位，所以治疗效果有限，而将脐带间充质干细胞直接注射于阴茎中的方法相对复杂，且风险较高。研究发现，脐带间充质干细胞行使生物学功能的一个最重要途径是通过分泌大量生物活性因子，进而调节病变组织的机能、促进血管再生、加速组织再生修复。而大量的生物活性因子的分泌途径主要是通过外泌体，一种生物膜包裹的、直径在40-200nm不等的分泌小泡。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，提供一种用于治疗勃起功能障碍的干细胞外泌体浓缩液凝胶制剂及其制备方法与给药方法，通过饥饿培养脐带间充质干细胞并进行富集浓缩的方法，获得高浓度的具有生物活性的脐带间充质干细胞外泌体，制备通过外部涂抹用于治疗ED的外用脐带间充质干细胞外泌体浓缩凝胶制剂。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种用于治疗勃起功能障碍的干细胞外泌体浓缩液凝胶制剂的制备方法，包括以下步骤：(1)人脐带间充质干细胞的培养：选取生长状态良好的，微生物检测均为阴性的，P2-P8的人源脐带间充质干细胞，按照3-5*104/cm2的初始密度接种于细胞培养瓶或细胞培养皿中，培养基为基础培养基中含有体积比浓度5-15％的胎牛血清的培养体系；(2)接种培养2-4天后，细胞融合率达到80-95％，细胞生长状态良好，吸弃全部培养上清，并以医用复方电解质注射液清洗细胞2-4次，然后加入复方电解质溶液，使溶液高度达到2-3mm，放入二氧化碳培养箱中饥饿培养；(3)饥饿培养18-30h后，回收全部培养上清，以0.22um孔径滤膜过滤，过滤后的培养上清在3000-5000g的离心力条件下离心10-20min，再次回收离心上清；(4)在200000-500000g的离心力条件下对回收的上清离心30-60min，离心后轻轻取出离心管，以移液管吸弃上部70％-90％体积的液体，将下部10％-30％体积的液体及沉淀混合均匀后作为制备ED治疗制剂的原料—脐带间充质干细胞外泌体浓缩液；(5)ED治疗凝胶制剂的配制：每100ml制剂中含有药用高分子稳定剂2-10g、保湿剂5-10ml、透皮吸收促进剂5-10ml、步骤(4)得到的脐带间充质干细胞外泌体浓缩液10-50ml，复方电解质注射液余量。上述的制备方法制得的用于治疗勃起功能障碍的干细胞外泌体浓缩液凝胶制剂。上述用于治疗勃起功能障碍的干细胞外泌体浓缩液凝胶制剂，通过直接涂抹于阴茎龟头处，通过皮肤直接吸收的给药方法。本专利技术的有益效果是：间充质干细胞在培养过程中会分泌多种大量的外泌体，外泌体能够促进皮肤组织分化、血管新生以及肉芽组织的生长，可调节局部组织微环境，促进血管新生，改善局部供血，从而达到改善阴茎供血、治疗ED的效果。本专利技术采用饥饿脐带间充质干细胞的方法,在较短时间内就能得到人脐带间充质外泌体提取物，通过超速离心的方法浓缩以获得高浓度的人脐带间充质干细胞外泌体。制剂中加入了保湿剂和吸收促进剂，最大限度增加外泌体的稳定性和活性，并提高其透皮吸收能力，治疗效果大大提高。附图说明图1实施例1治疗前后性生活时间对比图。图2实施例2治疗前后性生活时间对比图。图3实施例3治疗前后性生活时间对比图。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步详细说明：本专利技术的用于治疗勃起功能障碍的干细胞外泌体浓缩液凝胶制剂的制备方法，包括以下步骤：(1)人脐带间充质干细胞的培养：选取生长状态良好的，微生物检测均为阴性的，P2-P8的人源脐带间充质干细胞，按照3-5*104/cm2的初始密度接种于细胞培养瓶或细胞培养皿中，培养基为基础培养基中含有体积比浓度5-15％的胎牛血清的培养体系；(2)接种培养2-4天后，细胞融合率达到80-95％，细胞生长状态良好，吸弃全部培养上清，并以医用复方电解质注射液清洗细胞2-4次，然后加入复方电解质溶液，使溶液高度达到2-3mm，放入二氧化碳培养箱中饥饿培养；(3)饥饿培养18-30h后，回收全部培养上清，以0.22um孔径滤膜过滤，过滤后的培养上清在3000-5000g的离心力条件下离心10-20min，再次回收离心上清；(4)在200000-500000g的离心力条件下对回收的上清离心30-60min，离心后轻轻取出离心管，以移液管吸弃上部70％-90％体积的液体，将下部10％-30％体积的液体及沉淀混合均匀后作为制备ED治疗制剂的原料—脐带间充质干细胞外泌体浓缩液；(5)ED治疗凝胶制剂的配制：每100ml制剂中含有药用高分子稳定剂2-10g、保湿剂5-10ml、透皮吸收促进剂5-10ml、步骤(4)得到的脐带间充质干细胞外泌体浓缩液10-50ml，复方电解质注射液余量。上述的制备方法制得的用于治疗勃起功能障碍的干细胞外泌体浓缩液凝胶制剂。上述用于治疗勃起功能障碍的干细胞外泌体浓缩液凝胶制剂，通过直接涂抹于阴茎龟头处，通过皮肤直接吸收的给药方法。所述药用高分子稳定剂为海藻酸钠、透明质酸钠、壳聚糖和羟乙基淀粉中的一种。所述保湿剂为丙二醇和甘油。所述头皮吸收促进剂为二甲基亚砜。所述复方电解质溶液为四川科伦药业股份有限公司生产，成分为每1000ml含氯化钠5.26g、葡萄糖酸钠5.02g、醋酸钠3.68g、氯化钾0.37g、氯化镁0.30g本专利技术含有浓缩3.3-9倍的脐带间充质干细胞饥饿培养获得外泌体成分。通过对脐带间充质干细胞饥饿培养的方法，促进其生物活性物质的分泌。以外泌体的形式回收脐带间充质干细胞分泌的生物活性物质，大大提高了回收效率、回收方式更为简便通过超速离心的方法浓缩外泌体，提高了外泌体的浓度。本专利技术间充质干细胞在培养过程中会分泌多种大量的外泌体，人脐带间充质干细胞分泌的外泌体能够促进皮肤组织分化、血管新生以及肉芽组织的生长，可调节局部组织微环境，促进血管新生，改善局部供血，从而达到改善阴茎供血、治疗ED的效果。本专利技术采用饥饿脐带间充质干细胞的方法,在较短时间内就能得到人脐带间充质外泌体提取物，通过超速离心的方法浓缩以获得高浓度的人脐带间充质干细胞外泌体，其中人间充质干细胞外泌体外用凝胶中含有海藻酸钠和复方电解质注射液作为稳定剂，并含有保湿剂、透皮吸收促进剂，使其形成稳定均一，利于吸收的凝胶状物质。用于男性ED的治疗。实施案例1：患者李某，39岁，因工作繁忙、压力大，在一年前出现性欲减退、性生活频率降低，并出现早期的勃起功能障碍症状，治疗前3个月内本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于治疗勃起功能障碍的干细胞外泌体浓缩液凝胶制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)人脐带间充质干细胞的培养：选取生长状态良好的，微生物检测均为阴性的，P2‑P8的人源脐带间充质干细胞，按照3‑5*10

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗勃起功能障碍的干细胞外泌体浓缩液凝胶制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)人脐带间充质干细胞的培养：选取生长状态良好的，微生物检测均为阴性的，P2-P8的人源脐带间充质干细胞，按照3-5*104/cm2的初始密度接种于细胞培养瓶或细胞培养皿中，培养基为基础培养基中含有体积比浓度5-15％的胎牛血清的培养体系；(2)接种培养2-4天后，细胞融合率达到80-95％，细胞生长状态良好，吸弃全部培养上清，并以医用复方电解质注射液清洗细胞2-4次，然后加入复方电解质溶液，使溶液高度达到2-3mm，放入二氧化碳培养箱中饥饿培养；(3)饥饿培养18-30h后，回收全部培养上清，以0.22um孔径滤膜过滤，过滤后的培养上清在3000-5000g的离心力条件下离心10-20mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：张冰晶，韩洪起，鲁振宇，牟鑫煜，徐悦，
申请(专利权)人：天津欣普赛尔生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12