用于预防或治疗肝纤维化的包含脂肪干细胞来源外排体作为活性成分的组合物制造技术

本发明专利技术涉及用于预防、减轻或治疗肝纤维化的包含人脂肪干细胞来源外排体作为活性成分的组合物。根据本发明专利技术的脂肪干细胞来源外排体携带用于治疗肝纤维化的遗传信息、蛋白质、生长因子等，并且因此已在治疗动物模型中的肝纤维化中显示出优异的结果，并且作为细胞来源物质，外排体具有可高度生物相容且具有极好的吸收率的优势。因此，可使目前使用的药物的限制或在使用干细胞本身的治疗中可由于干细胞癌变或细胞废物而引起的不良反应最小化，并且可通过在不需要手术的情况下简单实施的静脉内注射、局部注射等自然地递送至肝脏，因此可降低经济成本并且还可减轻对患者的压力。总之，预期根据本发明专利技术的脂肪干细胞来源外排体有效地用于预防、减轻和治疗肝纤维化。

Composition containing adipose stem cell-derived efflux as an active ingredient for the prevention or treatment of liver fibrosis

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于预防或治疗肝纤维化的包含脂肪干细胞来源外排体作为活性成分的组合物
本专利技术涉及用于预防、减轻或治疗肝纤维化的组合物，其包含脂肪干细胞来源外排体。
技术介绍
肝纤维化是由慢性炎症导致的细胞外基质过度沉积引起的，并且如果这种慢性肝病持续的话，其可能由于肝中的结构转化和肝细胞数量的减少而进展为肝硬化。这种慢性肝病可被认为是从慢性乙型肝炎或丙型肝炎，由于持续过度饮酒和使用肝毒性材料等引起的慢性肝炎，到纤维化，到肝硬化的持续的疾病进展，而不是独立的疾病。目前，对肝炎和肝硬化的治疗是为了减慢症状的进展和由此引起的肝功能的下降，并且存在着使用药物(例如取决于病因的聚乙二醇干扰素(peginterferon)或抗病毒剂)(在肝纤维化的情况下)和通过肝移植达到完全康复(在严重的情况下)的方法。然而，在药物治疗的情况下，可能发生治疗抗性，并且肝移植的限制在于其应忍耐供体不足以及手术的风险和成本，因此，已出现了对新的治疗方法的需求。使用干细胞的肝再生治疗方法是近年来受到许多关注的治疗方法，并且已知的是，注射的干细胞通过在损伤的肝中分化成功能性肝细胞以及重构显示治疗作用。迄今为止，已报道了干细胞在体外高效率分化成功能性肝细胞的结果(韩国专利No.10-1542849)，但存在着当干细胞被移植到动物模型或人体中时肝细胞分化的效率实际上低的问题。此外，由于肝干细胞的准确标志物不明确，存在着不能准确地知道增殖和分化成肝细胞之干细胞的缺点。此外，一般而言，使用干细胞的常规治疗的最大问题在于不能证明准确的效力，因为取决于患者，移植率和体内细胞的存活率是不一致的，而且另外，不能排除干细胞癌变的可能性，并且由于含有由干细胞分泌的多种生长因子的培养液包含多种细胞废物以及生长因子，其可引起潜在的问题。因此，需要新的治疗方法以解决使用干细胞治疗肝病的局限性。
技术实现思路
技术问题为了解决上述常规问题，本专利技术人使用从人脂肪干细胞分离的外排体评估了对肝纤维化的治疗作用，并通过在人肝星形细胞和肝纤维化动物模型中施用外排体确认了优异的治疗作用，并且在此基础上完成了本专利技术。因此，本专利技术的一个目的是提供用于预防、减轻或治疗肝纤维化的包含脂肪干细胞来源外排体作为活性成分的组合物。然而，通过本专利技术所要解决的技术问题不限于上述提及的问题，并且本领域技术人员可从以下描述中清楚地理解其他未提及的事项。技术方案为了实现本专利技术的目的，本专利技术提供了用于预防或治疗的药物组合物，其包含脂肪干细胞来源外排体作为活性成分。此外，本专利技术提供了用于减轻肝纤维化的健康功能食品组合物，其包含脂肪干细胞来源外排体作为活性成分。作为本专利技术的一个实施方案，脂肪干细胞可以是人脂肪干细胞。作为本专利技术的另一个实施方案，组合物可降低血液中天冬氨酸转氨酶(Aspartateaminotransferase，AST)、丙氨酸转氨酶(Alanineaminotransferase，ALT)、碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase，Alp)、总胆红素(Totalbilirubin，TP)或LW/BW(肝重与体重之比)的水平。此外，本专利技术提供了用于预防或治疗肝纤维化的方法，其包括向对象施用包含脂肪干细胞来源外排体作为活性成分的药物组合物的步骤。此外，本专利技术提供了脂肪干细胞来源外排体的预防或治疗肝纤维化的用途。有益效果根据本专利技术的脂肪干细胞来源外排体携带用于治疗肝纤维化的遗传信息、蛋白质、生长因子等，并且因此已在治疗动物模型中的肝纤维化中显示出优异的结果，并且作为细胞来源物质，外排体具有可高度生物相容且具有极好的吸收率的优势。因此，可克服目前使用的药物的限制，并且可使在使用干细胞本身的治疗中可由于干细胞癌变或细胞废物而引起的副作用最小化。此外，可通过在不需要手术的情况下简单实施的静脉内注射、局部注射等自然地递送至肝脏，因而降低了经济成本。总之，预期根据本专利技术的脂肪干细胞来源外排体有效地用于预防、减轻和治疗肝纤维化。附图说明图1是使用电子显微镜和纳米颗粒跟踪分析仪确认从人脂肪干细胞分离的外排体的物理和生物化学性质的结果。图2显示通过用人脂肪干细胞来源外排体(A-Exosome，A-外排体)处理来确认α-SMA表达水平的降低的结果，以确认通过TGF-β1诱导的活化肝星形细胞LX-2中表达的α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscleactin，α-SMA)。图3是进行实时聚合酶链式反应评价的结果，以确认与肝纤维化相关的肝星形细胞系LX-2的定量mRNA变化。图4是通过进行免疫荧光评价确认α-SMA的表达水平的结果，以比较地评价人脂肪干细胞来源外排体和其他组织干细胞来源外排体的效力。图5是通过进行实时聚合酶链式反应评价确认α-SMA、胶原蛋白1(Collagen1)的表达水平的结果，以比较地评价人脂肪干细胞来源外排体和其他组织干细胞来源外排体的效力。图6是将荧光标记的人脂肪干细胞来源外排体静脉内施用到每个模型中之后，在24小时时通过固定主要器官确认荧光的结果，以确认正常模型和肝纤维化诱导模型中人脂肪干细胞来源外排体的体内运动。图7显示了为确认人脂肪干细胞来源外排体在肝纤维化小鼠模型中的抗纤维化作用而建立的动物实验的模拟图。图8是通过将外排体施用到正常模型和肝纤维化小鼠模型中三次并在首次施用之后5天收集血液，测量血液AST(天冬氨酸转氨酶)、ALT(丙氨酸转氨酶)、ALP(碱性磷酸酶)、TBIL(总胆红素)、TP(总蛋白质)和LW/BW(肝重与体重之比)的水平的结果。图9a是通过将外排体施用到正常模型和肝纤维化小鼠模型中一定次数，并在首次施用之后5天提取肝脏并用肉眼观察得到的图像。图9b是对固定的肝组织进行H&E染色、马森三色(Masson’strichrome，MT)染色和α-SMA染色，然后用光学显微镜观察的结果。图9c是通过将MT与总区域相比较来显示胶原蛋白的量和α-SMA的量的定量图。具体实施方式本专利技术能够进行多种修改并且具有多个实例，因此在附图中说明并在详细说明中详细地描述了具体实例。然而，应当理解的是，这并不是将本专利技术限定于具体的实施方案，而是包括落入本专利技术精神和技术范围内的替代方案的所有修改和等同方案。在描述本专利技术时，当判断有关现有技术的详细描述可使本专利技术的主旨变得模糊时，将省略详细描述。本专利技术人已深入研究了克服使用目前用于治疗肝纤维化的治疗药物或干细胞本身的细胞治疗的问题的方式，并且结果，已确认了人脂肪干细胞来源外排体对肝纤维化的治疗作用，从而完成了本专利技术。在下文中，将更加详细地描述根据本专利技术具体实施方案的用于预防或治疗肝纤维化的药物组合物。具体地，在本专利技术的一个实施方案中，培养人脂肪干细胞并收集细胞培养上清液，以及分离和纯化从细胞分泌的外排体(参见实施例1)，从而通过体外细胞实验和体内小鼠模型确认外排体的抗纤维化作用。此外，通过使用光学显微镜的免疫荧光评价以及通过实时聚合酶链式反应定量地证明纤维化相关mRNA的量确认了α-SMA的表达水平，其确认了在通过TGF-β1处理活化的肝星形细胞中α-SMA的表达水平极大提高，以及证明了α-SMA的表达水平随着人脂肪干细胞来源外排体的处理浓度的增加而显著降低(参见实施例2)。此外，确认了当通过TGF-β1处理使肝星形细胞活化时本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于预防或治疗肝纤维化的药物组合物，其包含脂肪干细胞来源外排体作为活性成分。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.11.21 KR 10-2016-0155121;2017.11.20 KR 10-2011.用于预防或治疗肝纤维化的药物组合物，其包含脂肪干细胞来源外排体作为活性成分。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述脂肪干细胞是人脂肪干细胞。3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物降低血液中天冬氨酸转氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：朴宰亨，李翰相，许龙，韩和昇，
申请(专利权)人：胞外体干细胞株式会社，
类型：发明
国别省市：韩国,KR