神经保护组合物、其制备方法及其医学用途技术

本发明专利技术涉及一种源自间充质干细胞的神经保护组合物，特别是一种源自牙髓间充质干细胞原代培养物的神经保护组合物。本发明专利技术还涉及一种制备所述神经保护组合物的方法，以及所述神经保护组合物在治疗与神经元损伤相关的神经系统疾病中的医学用途，所述疾病包括蛛网膜下腔出血和帕金森氏病。

Neuroprotective compositions, preparation methods and medical applications

【技术实现步骤摘要】
神经保护组合物、其制备方法及其医学用途
本专利技术涉及一种源自间充质干细胞的神经保护组合物，特别是一种源自牙髓间充质干细胞原代培养物的神经保护组合物，其制备方法，及其在治疗与神经元损伤相关的神经系统疾病中的医学用途，所述疾病包括蛛网膜下腔出血和帕金森氏病。
技术介绍
蛛网膜下腔出血(SAH)是指血液外渗至蛛网膜与脑周围的软脑脊膜之间的蛛网膜下腔中。它出现在多种临床环境中，最常见的是头部创伤；非创伤性(或自发性)蛛网膜下腔出血通常出现在破裂的脑动脉瘤或动静脉畸形的情况中。自发性病例的危险因素包括高血压、吸烟、家族史、酗酒和可卡因使用。动脉瘤型SAH带来显著的患病率和死亡率。患有动脉瘤型SAH的人有近半数在30天内死亡，三分之一的存活者遭受长期的身体、神经认知、精神和/或心理上的症状，例如偏瘫、情绪障碍、经常性头痛、认知和记忆缺陷。SAH患者还可能在年老时罹患阿尔茨海默病或失智症的可能性增加。除了原始的出血之外，多种因素，例如缺氧、低血压、脑水肿、再出血、迟发性缺血性神经功能缺损(DIND)和/或由夹闭或卷绕期间的脑动脉操作引起的缺血，都会导致继发性脑损伤。如果没有及时给予正确的医学治疗，第一次出血后存活的患者可能在3周内再次出血，其死亡率高达80％。一旦红细胞进入蛛网膜下区域并发生红细胞裂解，就会诱发化学性脑膜炎，其进而会引起一系列复杂的病理生理过程，包括颅内压升高、脑血流量和脑灌注压降低、血脑屏障(BBB)损伤、脑水肿、急性脑血管痉挛、微血管功能障碍和神经元凋亡机制。上述过程可能继发性地引起钙超载、自由基累积、线粒体功能障碍和免疫炎症反应。虽然脑血管痉挛被认为是在SAH存活者中最常见的失能和死亡原因，但其他影响(例如皮层传播抑制引起的早期脑损伤、血脑屏障破坏、微循环功能受损、神经炎症和凋亡性神经元细胞死亡)也可能促成SAH诱导的病变。本领域已知，SAH的发病与其他神经障碍和神经损伤有一些共同的病理学特征。尽管SAH及其相关并发症具有高严重性，但目前治疗SAH的措施相对而言是低效的。因此，需要一种为神经组织提供保护的治疗性组合物。
技术实现思路
干细胞对神经障碍的旁分泌效应已被注意了几十年(参见例如TorrenteD.等，HumExpToxicol.2014,33(7):673-84；以及下述综述性文献：Martínez-GarzaD.M.等，MedicinaUniversitaria2016,18(72):169-180；ImW.S.andKimM.H.,J.Mov.Disord.2014,7(1):1-6；TurgemanG.,Neural.Regen.Res.2015May,10(5):698–699；HasanA.etal.,Front.Neurol.8:28,2017,DOI:10.3389/fneur.2017.00028)。已经有人提出假说：干细胞可以分泌多种生长因子、细胞因子和趋化因子，这些因子可以增强细胞存活、增加神经生成、减少炎症和线粒体功能，并且所有这些效应都导致神经保护和修复。因此，将干细胞分泌蛋白组(secretome)而非整个干细胞引入受损组织被认为是克服基于细胞移植局限性的有前景的安全治疗措施。虽然已鉴定出由干细胞释放的一些旁分泌分子，包括Scurfin、脑源性神经营养因子(BDNF)和CC趋化因子配体2(CCL2)，但所鉴定的全部蛋白的分子量均都大于10kDa。令人惊讶和出乎意料的是，本专利技术人发现源自于间充质干细胞(MSC)的原代培养物的条件培养基(例如源自牙髓间充质干细胞(DPMSC)的原代培养物的条件培养基)的≤5kDa级分表现出优异的神经保护活性。该培养基级分显然可用于治疗神经障碍，例如SAH和帕金森氏病。因此，在第一方面，本文提供了一种神经保护组合物，其能够通过包括以下步骤的方法获得：(i)在无血清基础培养基中培养间充质干细胞至少3小时以获得细胞培养物；和(ii)处理步骤(i)中获得的细胞培养物以得到分子量不超过约5kDa的水性级分作为所述神经保护组合物。在第二方面，本文提供了一种神经保护组合物的制备方法，其包括以下步骤：(i)在无血清基础培养基中培养间充质干细胞至少3小时以获得细胞培养物；和(ii)处理步骤(i)中获得的细胞培养物以得到分子量不超过约5kDa的水性级分作为所述神经保护组合物。在第三方面，本文提供了一种神经保护组合物在制造一供用于治疗个体体内与神经元损伤相关的神经障碍的医药品上的用途，其中，所述神经保护组合物能够通过上述方法获得。在第四方面，本文提供了一种治疗个体的与神经元损伤相关的神经障碍的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的神经保护组合物以抑制神经元损伤；其中，所述神经保护组合物能够通过上述方法获得。在第五方面，本文提供了一种神经保护组合物在制造一供用于保护患有或有风险患有神经功能丧失的个体免受神经元损伤的医药品上的用途，其中，所述神经保护组合物能够通过上述方法获得。在第六方面，本文提供了一种抵御神经元损伤的保护方法，所述方法包括向患有或有风险患有神经功能丧失的个体施用有效量的神经保护组合物，从而保护所述个体免受神经元损伤；其中，所述神经保护组合物能够通过上述方法获得。在第七方面，本文提供了一种神经保护组合物在制造一供用于抑制有需要的个体的脑神经炎症的医药品上的用途，其中所述神经保护组合物能够通过上述方法获得。在第八方面，本文提供了一种抑制有需要的个体的脑神经炎症的方法，所述方法包括施用有效量的神经保护组合物，从而抑制所述个体的脑神经炎症；其中，所述神经保护组合物能够通过上述方法获得。在优选的实施方案中，处理步骤(ii)包括通过分子量截留值为5kDa的膜来超滤步骤(i)中获得的细胞培养物，从而收集通过该膜的滤液作为所述神经保护组合物。在优选的实施方案中，间充质干细胞是牙髓间充质干细胞。在优选的实施方案中，与神经元损伤相关的神经障碍选自于由肌萎缩侧索硬化症、阿尔茨海默病、帕金森氏病、亨廷顿病、肌营养不良症、多发性硬化、缺血性中风、出血性中风、短暂性脑缺血发作(TIA)和创伤性脑损伤(TBI)组成的群组。在更优选的实施方案中，与神经元损伤相关的神经障碍选自于由阿尔茨海默病、帕金森氏病、亨廷顿病、缺血性中风、原发性SAH、继发性SAH、创伤性SAH和脑内出血(ICH)、短暂性脑缺血发作(TIA)和创伤性脑损伤(TBI)组成的群组。在甚至更优选的实施方案中，与神经元损伤相关的神经障碍选自于由帕金森氏病、原发性SAH和继发性SAH组成的群组。附图说明参考下面对优选实施方案的描述并结合附图，本专利技术的上述和其他目的、特征和效果将变得显而易见，在附图中：图1A-1C是显示对照组(图1A)、SAH组(图1B)和治疗组(图1C)中大鼠脑表面上的微循环脉管系统的图像，其中大鼠脑中的小动脉和小静脉分别用字母A和V标记；图2A和2B是显示出SAH大鼠模型中脑表面处的局部血流和脑组织氧压的直方图；图2C是显示出SAH大鼠模型的脑组织中的Iba1阳性小神经胶质细胞的组织学图像；图3是显示出本专利技术的神经保护组合物对神经元细胞活力的增强作用的直方图；图4A和4B是显示出D-gal诱导的大鼠肝性脑病模型中脑表面处的局部血流和脑组织氧压的直方图；图4C是显示出D-gal诱本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备神经保护组合物的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：(i)在无血清基础培养基中培养间充质干细胞至少3小时以获得细胞培养物；和(ii)处理步骤(i)中获得的细胞培养物以得到分子量不超过约5kDa的水性级分作为所述神经保护组合物。

【技术特征摘要】
2017.12.01 GB 1720018.91.一种制备神经保护组合物的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：(i)在无血清基础培养基中培养间充质干细胞至少3小时以获得细胞培养物；和(ii)处理步骤(i)中获得的细胞培养物以得到分子量不超过约5kDa的水性级分作为所述神经保护组合物。2.如权利要求1所述的方法，其中，所述处理步骤(ii)包括通过分子量截留值为5kDa的膜来超滤步骤(i)中获得的细胞培养物，从而收集通过该膜的滤液。3.如权利要求1所述的方法，其中，所述间充质干细胞是牙髓间充质干细胞。4.一种能够用权利要求1至3中任一项所述的方法获得的神经保护组合物。5.一种神经保护组合物在制造一供用于治疗个体体内与神经元损伤相关的神经障碍的医药品上的用途，其中，所述神经保护组合物能够用权利要求1至3中任一项所述的方法获得。6.如权利要求5所述的用途，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈德福，王国川，
申请(专利权)人：凯薾国际生医有限公司，
类型：发明
国别省市：中国台湾,71