The invention provides a method for removing cysteine caps from antibodies and re-capping the antibodies with cysteine molecules. The method includes, in particular, the cultivation of host cells containing at least one capped engineered cysteine residue protein molecule and the contact of the cell culture with cysteine. Dissolved oxygen levels can be manipulated in the cell culture to further enhance the removal and capping processes.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】工程化半胱氨酸帽的分布相关申请的交叉引用本申请要求2016年11月7日提交的美国临时申请序列号62/418,572的权益，所述临时申请出于所有目的整体并入本文专利技术背景其中选定的氨基酸已突变为半胱氨酸的单克隆抗体(mAb)(即工程化半胱氨酸mAb或ecmAb)特别适用于缀合物(例如，抗体药物缀合物或ADC)，因为包含ecmAb的缀合物具有有利的特性，包括药物与抗体比(DAR)的均一性；有利的药代动力学、稳定性和溶解性。半胱氨酸突变位于抗体中通常不形成链间或链内二硫键的氨基酸序列的位置，并且产生突变体mAb的细胞内的表达机制将半胱氨酸残基视为未配对的半胱氨酸。因此，工程化半胱氨酸通常以混合二硫化物的形式与非编码的半胱氨酸分子一起表达(即，工程化半胱氨酸被加帽剂(例如，半胱氨酸(cys-帽)、同型半胱氨酸(hcy-帽)、半胱氨酰甘氨酸(cysgly-帽)或谷胱甘肽(gsh-帽))“加帽”，形成工程化半胱氨酸帽(EC-帽))。在任何批次的工程化半胱氨酸抗体中，工程化半胱氨酸的高反应性硫醇通常受一系列EC-帽物种的保护。虽然ecmAb不影响最终的mAb或ADC，但ecmA...
【技术保护点】
1.一种用于从蛋白质分子中除去半胱氨酸帽的方法，所述方法包括：培养包含具有至少一个加帽半胱氨酸残基的蛋白质分子的宿主细胞；以及使所述宿主细胞培养物与胱氨酸接触；由此从所述蛋白质分子中除去所述半胱氨酸帽。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.11.07 US 62/418,5721.一种用于从蛋白质分子中除去半胱氨酸帽的方法，所述方法包括：培养包含具有至少一个加帽半胱氨酸残基的蛋白质分子的宿主细胞；以及使所述宿主细胞培养物与胱氨酸接触；由此从所述蛋白质分子中除去所述半胱氨酸帽。2.如权利要求1所述的方法，其还包括使所述宿主细胞培养物与溶解氧(DO)接触。3.如权利要求1所述的方法，其还包括：在使所述宿主细胞培养物与胱氨酸接触的同时或之后，使所述宿主细胞培养物与第一操作的DO在0％-50％DO的设定点下接触；在使所述宿主细胞培养物与所述第一操作的DO接触之后，使所述宿主细胞培养物与第二操作的DO在20％-100％DO的设定点下接触。4.如权利要求3所述的方法，其中使所述宿主细胞培养物与所述第一操作接触的持续时间为0.5-8小时。5.如权利要求4所述的方法，其中使所述宿主细胞培养物与所述第一操作接触的持续时间为2小时。6.如权利要求3所述的方法，其中使所述宿主细胞培养物与所述第二操作接触的持续时间为0.5-8小时。7.如权利要求6所述的方法，其中使所述宿主细胞培养物与所述第二操作接触的持续时间为2小时。8.如权利要求3所述的方法，其中所述第一操作的DO处于0％DO的设定点。9.如权利要求3所述的方法，其中所述第二操作的DO处于100％DO的设定点。10.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述蛋白质是抗体。11.如权利要求10所述的方法，其还包括在足以形成抗体-药物缀合物的条件下将所述抗体与药物-接头化合物组合。12.如权利要求10所述的方法，其中所述抗体具有至少两个工程化半胱氨酸残基。13.如权利要求12所述的方法，其中所述工程化半胱氨酸残基存在于所述抗体分子的重恒...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·巴尔加瓦，CW·A·陈，M·J·雷斯，
申请(专利权)人：西雅图基因公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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