一种亚甲基二氧吡咯戊酮检测试纸条和应用制造技术

本发明专利技术提供了一种亚甲基二氧吡咯戊酮检测试纸条，其T线位置负载有式Ⅰ所示结构的亚甲基二氧吡咯戊酮抗原，用于对亚甲基二氧吡咯戊酮的检测，具有较高的检测灵敏度。

A test strip for methylenedioxypyrrolidone and its application

The invention provides a methylenedioxypyrrolidone detection test strip, whose T-line position is loaded with methylenedioxypyrrolidone antigen of the structure shown in Formula I, which is used for the detection of methylenedioxypyrrolidone with high detection sensitivity.

【技术实现步骤摘要】
一种亚甲基二氧吡咯戊酮检测试纸条和应用
本专利技术涉及免疫检测
，尤其涉及一种亚甲基二氧吡咯戊酮检测试纸条和应用。
技术介绍
亚甲基二氧吡咯戊酮(Methylenedioxypyrovalerone)，简称MDPV，是当前在欧美兴起的迷幻药，初时人们以其外形如同海盐，故称之为“浴盐”。在本世纪初的欧洲出现MDPV的滥用，当前主要发生在德国、芬兰等一些国家。这种滥用行为可能引发相关社会问题，因而在出现MDPV滥用流行的国家，执法部门将其视为具有一定危险性的药物。最近的主要案例如下：2012年5月26日美国迈阿密有一名男子尤金怀疑服用此种迷幻药后，犹如“丧尸”般在街上发狂追咬路人，一名流浪汉走避不及，惨被咬脱半边脸皮，遂有人将MDPV称作“丧尸浴盐”。同年香港《文汇报》报道，香港荃湾深夜有“丧尸”出没。一名90后迷幻青年，疑吸食新兴毒品“浴盐”后顿变“丧尸”，如行尸走肉般至荃湾葵盛围一间中学外，遇见学校保安员突发狂袭击，仅隔9分钟再于附近紧咬另一名夜归少女颈部。MDPV是兴奋剂属性的精神药物，能抑制去甲肾上腺素，在1969年开发时，它是一种不起眼的兴奋剂，但后来却证实此药可导致心理及身体受到严重伤害。药剂师解释称，服食MDPV后做出类似丧尸咬人行为，是由于MDPV会增加脑部多巴胺及去甲肾上腺素分泌，从而令人兴奋，同时出现幻觉、妄想，还变得孔武有力，最恐怖是令人产生暴力倾向，产生磨牙反应以致“想咬嘢”。当前部分国家(如英国、丹麦、瑞典、比利时等国)对MDPV进行管制。英国根据《1971年药物滥用法》，将MDPV列为B类药物管理，未经许可的销售、购买和持有均为非法。在英国，非法持有MDPV最高可处5年和/或无限额的罚金；非法生产、运输MDPV可处高于14年和/或无限额的罚金。在澳大利亚，虽然该物质还未列入非法物质之列，但澳大利亚海关和检疫检验局会查扣此类物质。2007年美国食品药品管理局批准MDPV可以作为实验研究使用的化学物质，但不得用于医疗用途。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种亚甲基二氧吡咯戊酮检测试纸条和应用，可应用于亚甲基二氧吡咯戊酮检测。所述亚甲基二氧吡咯戊酮结构如下：本专利技术提供了一种亚甲基二氧吡咯戊酮抗原，具有式Ⅰ所示结构：其中，PR为大分子蛋白，优选为牛血清白蛋白(BSA)。本专利技术提供了上述亚甲基二氧吡咯戊酮抗原的制备方法，包括以下步骤：式Ⅱ所示化合物与脯氨酸进行缩合反应，然后与大分子蛋白质偶联，得到亚甲基二氧吡咯戊酮抗原；上述偶联是通过脯氨酸的羧基与大分子蛋白进行共价偶联。本专利技术将脯氨酸手臂用于胶体金检测亚甲基二氧吡咯戊酮，使得抗原特异性好，灵敏度高。上述反应的反应路线如下(以PR为BSA为例)：所述式Ⅱ所示化合物可以按照本领域技术人员熟知的方法制备，本专利技术优选按照以下方法制备：首先将戊二酸酐和1,3-苯并间二氧杂环戊烯在三氯化铝的催化下进行开环缩合反应，得到化合物2；然后进行溴代，得到化合物3；再加入吡咯烷，在缚酸剂存在下，进行取代反应，得到化合物4，即式Ⅱ所示化合物。其反应方程式如下：本专利技术提供了上述亚甲基二氧吡咯戊酮抗原，或上述制备方法制备的亚甲基二氧吡咯戊酮抗原，在制备检测亚甲基二氧吡咯戊酮的胶体金试纸条中的应用。本专利技术中，所述检测为痕量检测，其最低检出限(cutoff)为100ng/ml。基于此，本专利技术还提供了一种亚甲基二氧吡咯戊酮检测试纸条，其T线位置负载有上述亚甲基二氧吡咯戊酮抗原，或上述制备方法制备的亚甲基二氧吡咯戊酮抗原。本专利技术对所述试纸条的构造没有特殊限定，可以为本领域技术人员熟知的构造，在本专利技术的某些具体实施例中，其为胶体金试纸条，包括样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸。其中，硝酸纤维素膜上靠近吸水滤纸一端设置有控制线，靠近样品垫一端设置有T线。其结构示意图如图1所示。本专利技术还提供了上述检测试纸条在亚甲基二氧吡咯戊酮检测中的应用。与现有技术相比，本专利技术提供了一种亚甲基二氧吡咯戊酮抗原，具有式Ⅰ所示结构。上述亚甲基二氧吡咯戊酮抗原可应用于胶体金试纸条，用于对亚甲基二氧吡咯戊酮的检测，具有较高的检测灵敏度。本专利技术还提供了上述亚甲基二氧吡咯戊酮抗原的制备方法，以1,3-苯并间二氧杂环戊烯为原料合成半抗原，从C原子上接上交联臂再与具有免疫原性的蛋白质偶联，以此来获得具有反应原性和免疫原性的完全抗原。此合成方法简单，所使用的材料和催化剂均为普通产品，具有实用性，适于工业生产并能产生经济价值；同时，不使用氯仿等高毒性溶剂，毒性较低，更具有安全性，适用于胶体金试纸条。本专利技术还提供了一种亚甲基二氧吡咯戊酮检测试纸条，其T线位置负载有式Ⅰ所示结构的亚甲基二氧吡咯戊酮抗原，用于对亚甲基二氧吡咯戊酮的检测，具有较高的检测灵敏度。附图说明图1为本专利技术实施例制备的胶体金检测试纸条的结构示意图。具体实施方式为了进一步说明本专利技术，下面结合实施例对本专利技术提供的亚甲基二氧吡咯戊酮检测试纸条和应用进行详细描述。实施例1一、亚甲基二氧吡咯戊酮抗原的制备在氩气保护下，向250ml反应瓶中加入6g无水氯化铝，然后加入无水二氯甲烷40ml，搅拌使其溶解。溶解以后加入3.42g戊二酸酐，继续搅拌20min。然后滴加入1.22g1,3-苯并间二氧杂环戊烯(溶解于20ml无水二氯甲烷中)，30min内滴加完成。滴加完成以后，回流过夜。反应完成以后冷却到室温。冷却以后将溶液倒入40ml冰水中，并且加入20ml二氯甲烷和20ml6N盐酸，剧烈摇晃以后静置分层。分层以后留下二氯甲烷相，用1NHCl洗涤二氯甲烷相2次，无水硫酸镁干燥，过滤，旋蒸得到1.9g红色油状物质。过硅胶柱纯化得到1.6g红色油状产物2，收率67.8％。结构验证如下：13CNMR(DMSO)δ:198.467,175.866,150.785,147.274,129.003,120.753,109.746,107.110,100.034,36.897,29.234,27.529；ESIm/z＝237(M+1)。在氩气保护下，分别将1.6g产物2和1.08g溴素溶解于10ml醋酸中。产物2的醋酸溶液置于100ml圆底烧瓶中，然后将溶解有溴素的醋酸溶液缓慢滴加入烧瓶。滴加完毕后室温搅拌2小时。反应完成以后，至于旋转蒸发仪上蒸去醋酸，然后用20ml二氯甲烷溶解粗产物。二氯甲烷溶液依次用20ml饱和碳酸氢钠溶液，20ml水和20ml饱和氯化钠溶液洗涤。然后干燥、蒸干二氯甲烷溶液得到产物3，2.1g(收率98％)。无需进一步纯化直接用于下一步反应。将2.1g产物3溶解于20ml乙腈中，然后加入1g三乙胺和0.5g吡咯烷。室温反应过夜。反应完成以后浓缩，硅胶柱纯化。得到1.78g产物4，收率89％。结构验证如下：13CNMR(DMSO)δ:195.776，177.112，150.051，146.764，129.043，121.003，108.964，107.545，100.975，75.981，54.729,29.663,21.452；ESIm/z＝306(M+1)。1.78g产物4溶解于20ml二氯甲烷中并且置于100ml圆底烧瓶内，然后加入1.12gEDC和1.75g三乙胺，搅拌2小时。然后0.7g脯氨酸溶解于10ml二氯本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种亚甲基二氧吡咯戊酮检测试纸条，其特征在于，其T线位置负载有式Ⅰ所示结构的亚甲基二氧吡咯戊酮抗原：

【技术特征摘要】
1.一种亚甲基二氧吡咯戊酮检测试纸条，其特征在于，其T线位置负载有式Ⅰ所示结构的亚甲基二氧吡咯戊酮抗原：其中，PR为大分子蛋白。2.根据权利要求1所述的亚甲基二氧吡咯戊酮检测试纸条，其特征在于，所述大分子蛋白为牛血清白蛋白。3.根据权利要求1所述的亚甲基二氧吡咯戊酮检测试纸条，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：凌世生，徐少军，张正挺，倪健，
申请(专利权)人：杭州旭科生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33