【技术实现步骤摘要】
一种基于细胞多巴胺释放效应的阿片类活性物质的检测方法及其检测试剂盒
本专利技术属于生物
,具体涉及一种基于细胞多巴胺释放效应的阿片类活性物质的检测方法及其检测试剂盒。
技术介绍
对于吸毒人员吸食新型阿片类精神物质,如芬太尼的检测和监管是各国监管部门的难题。因为目前的检测手段主要依赖于抗体(如抗芬太尼抗体)的免疫法,包括层析法、ELISA法等;以及气质联用、液质联用等大型仪器分析。但芬太尼在人体内代谢较快,造成检测样本中目标检测成分含量极低,无法检测到。另一方面,新型合成的芬太尼层出不穷,且分子结构多样,使基于抗体的免疫检测法几乎不可能,甚至气质联用、液质联用也难以实现监管检测。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述技术问题,本专利技术的目的在于提供一种基于细胞多巴胺释放效应的阿片类活性物质的检测方法及其检测试剂盒。本专利技术构思为:无论是天然阿片类物质,还是各种各样的合成阿片类精神物质,如芬太尼及其衍生物,其在机体内都会作用到阿片受体这个靶点,从而产生其生物学效应。阿片受体至少包括μ型、k型、δ型、和σ型四种阿片受体,μ型阿片受体是吗啡、芬太尼等阿片类精神物质亲 ...
【技术保护点】
1.一种基于细胞多巴胺释放效应的阿片类活性物质的检测方法,其特征在于包括以下步骤:1)将阿片受体基因克隆到CMV启动子下,构建真核表达质粒;2)将步骤1)真核表达质粒转染到神经母细胞瘤细胞,并建立阿片受体稳转的神经母细胞瘤细胞系,进行培养扩增得到检测组细胞培养液;同时建立一个转染对照空载体的神经母细胞瘤细胞系,进行培养扩增得到对照组细胞培养液;3)步骤2)检测组细胞培养液中加入标准品并充分反应,标准品为吗啡或芬太尼,配制一系列不同标准品浓度的标准液;将标准液离心分离后,取上清液并用ELISA检测试剂盒检测多巴胺效应下的吸光度OD值,以测得的吸光度OD值为纵坐标,以标准液中的 ...
【技术特征摘要】
1.一种基于细胞多巴胺释放效应的阿片类活性物质的检测方法,其特征在于包括以下步骤:1)将阿片受体基因克隆到CMV启动子下,构建真核表达质粒;2)将步骤1)真核表达质粒转染到神经母细胞瘤细胞,并建立阿片受体稳转的神经母细胞瘤细胞系,进行培养扩增得到检测组细胞培养液;同时建立一个转染对照空载体的神经母细胞瘤细胞系,进行培养扩增得到对照组细胞培养液;3)步骤2)检测组细胞培养液中加入标准品并充分反应,标准品为吗啡或芬太尼,配制一系列不同标准品浓度的标准液;将标准液离心分离后,取上清液并用ELISA检测试剂盒检测多巴胺效应下的吸光度OD值,以测得的吸光度OD值为纵坐标,以标准液中的标准品浓度为横坐标绘制标准曲线,计算拟合回归方程;4)步骤2)检测组细胞培养液中加入待测样本,充分反应,离心分离后取上清液,对反应后的检测组细胞培养液的上清液用ELISA检测试剂盒检测多巴胺效应下的吸光度OD1值;步骤2)对照组细胞培养液中加入待测样本,充分反应,离心分离后取上清液,对反应后的对照组细胞培养液的上清液用ELISA检测试剂盒检测多巴胺效应下的吸光度OD2值;计算吸光度OD1值与吸光度OD2值之差,并带入步骤3)回归方程,即可推算出待测样本中的阿片类活性物质的效应含量。2.如权利要求1所述的一种基于细胞多巴胺释放效应的阿片类活性物质的检测方法,其特征在于步骤1)中,所述阿片受体基因为人源μ型阿片受体MOR1基因;所述真核表达质粒为pCMV-MOR1质粒,其构建过程为:将人源μ型阿片受体MOR1基因克隆到慢病毒表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-Neo的CMV启动子下,连接酶切位点为EcoRI和NotI,构建真核表达质粒pCMV-MOR1。3.如权利要求1所述的一种基于细胞多巴胺释放效应的阿片类活性物质的检测方法,其特征在于步骤2)中,神经母细胞瘤细胞为SK-N-SH细胞;建立阿片受体稳转的神经母细胞瘤细胞系的过程为:将pCMV-MOR1质粒、pH1质粒、pH2质粒共转染至慢病毒包装细胞293V,制备得到CMV-MOR1慢病毒;将...
【专利技术属性】
技术研发人员:范春雷,程向荣,
申请(专利权)人:浙江诺迦生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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