抗地高辛抗体或其抗原结合片段及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种抗地高辛抗体或其抗原结合片段及其应用，涉及抗体技术领域

【技术实现步骤摘要】
抗地高辛抗体或其抗原结合片段及其应用


[0001]本专利技术涉及抗体
，尤其是涉及一种抗地高辛抗体或其抗原结合片段及其应用
。

技术介绍

[0002]地高辛是强心苷类药物中使用最广泛的药物，迄今为止临床应用已有
200
多年的历史，对心脏具有高亲和力和选择性
。
治疗剂量下可轻微抑制
Na
+
/K
+
‑
ATP
酶，破坏钠在心肌细胞膜上的主动转运，使细胞内
Na
+
浓度增加，
K+
浓度降低
。
随后通过
Na
+
和
Ca
2+
双向交换机制，导致细胞内
Ca
2+
浓度增加，心肌收缩力加强，产生正性肌力作用，用于治疗充血性心力衰竭和某些心律失常
。
[0003]地高辛，是一种强心苷类药物，提取自毛花洋地黄的叶中，又称异羟基洋地黄毒苷
。
地高辛的分子式为
C
41
H
64
O
14
，相对分子质量
780.95
，是由甾体母核
C17
上的5元不饱和内酯环与3个
D
‑
洋地黄毒糖的
C3
位通过脱水缩合而成
。
地高辛在结构上比洋地黄毒苷多了一个羟基，羟基数目的增加，使地高辛的极性增大而亲脂性减弱，相应的，地高辛的口服吸收较洋地黄毒苷低
。
地高辛为白色结晶或结晶状粉末，味苦，易溶于吡啶，不溶于水和乙醚，在酸性或碱性状态下易发生水解，而在密封避光状态下能够保持稳定
。
[0004]地高辛主要用于治疗各种伴有心力衰竭的心脏疾病，对伴有水肿的充血性心力衰竭
、
早搏及心房纤维性颤动
、
室上性心动过速等尤为有效
。
伴随地高辛在临床上的广泛应用，其治疗安全指数和毒性一直是被重视的问题
。
地高辛的治疗安全范围小，有效血药浓度范围为
0.8
～
2.0
μ
g
·
L
‑1，一旦用药剂量过大，导致心脏内
Ca
2+
超载，可发生明显的心脏毒性反应
。
此外，在联合用药普遍化和常规化的治疗环境下，药物的相互作用对地高辛血药浓度的影响也成为了不可忽视的问题
。
[0005]地高辛可以采用基于免疫学原理的检测方法进行检测，例如免疫荧光法
、
酶联免疫吸附试验
、
胶体金免疫层析技术等方法
。
抗体是免疫检测方法中的主要试剂，提供更多的与地高辛结合的高质量抗体能够为基于免疫学原理的检测方法提供稳定可靠的原料来源，降低国产商品对进口原料的依赖，降低产品成本
。
同时提高地高辛快速诊断商品如金标试纸条
、ELISA
试剂盒等的检出率及灵敏度，降低假阳率，提高自产商品的竞争力
。
[0006]有鉴于此，特提出本专利技术
。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种抗地高辛抗体或其抗原结合片段，通过以地高辛为抗原筛选获得一株单克隆抗体，通过克隆
、
鉴定与基因结构的分析，确定了其
CDR
区序列，本专利技术的另一目的是提供关于该抗体或其抗原结合片段的生物材料和它们的应用
。
[0008]为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：
[0009]第一方面，提供了一种抗地高辛抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区；重链可变区包含
SEQ ID NO.1
所示氨基酸序列
N
末端第
17
～
24
位氨基酸残基的
VHCDR1、
第
42
～
49
位氨基酸残基的
VHCDR2
和第
88
～
98
位氨基酸残基的
VHCDR3
；
[0010]轻链可变区包含
SEQ ID NO.2
所示氨基酸序列
N
末端第
27
～
37
位氨基酸残基的
VLCDR1、
第
55
～
57
位氨基酸残基的
VLCDR2
和第
94
～
102
位氨基酸残基的
VLCDR3。
[0011]第二方面，提供了一种生物材料，该生物材料选自
(
ⅰ
)
～
(
ⅲ
)
中任一项：
[0012](
ⅰ
)
多核苷酸，包括编码上述的抗地高辛抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列；
[0013](
ⅱ
)
载体，所述载体携带前述
(
ⅰ
)
多核苷酸
。
[0014](
ⅲ
)
细胞，所述细胞携带
(
ⅰ
)
中多核苷酸，或含有
(
ⅱ
)
中载体，或表达前述抗地高辛抗体或其抗原结合片段
。
[0015]第三方面，提供了提供了上述抗地高辛抗体或其抗原结合片段，或上述生物材料在非诊断和治疗目的的检测地高辛，或制备用于检测地高辛的产品中的应用
。
[0016]第四方面，提供了一种用于检测地高辛的试剂或试剂盒，该试剂或试剂盒包含上述抗地高辛抗体或其抗原结合片段
。
[0017]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0018]本专利技术运用地高辛免疫
Balb/c
小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，通过特异性的高通量筛选得到具有高度特异性的杂交瘤细胞，通过培养和再免疫获得大量小鼠腹水，再经多步分离及纯化获得高纯度
、
高灵敏度和高特异性的抗地高辛的单克隆抗体
anti
‑
DGX
‑
mab1
，为开发检测地高辛的免疫试纸条提供了所需的原料
。
本专利技术的抗地高辛的单克隆抗体
anti
‑
DGX
‑
mab1
可用于免疫印迹
、
免疫荧光等免疫学检测，所获抗体经验证具有良好的特异性结合能力
。
具体实施方式
[0019]下面将结合实施例对本专利技术的技术方案进行清楚
、
完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
抗地高辛抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包括重链可变区和轻链可变区；重链可变区包含
SEQ ID NO.1
所示氨基酸序列
N
末端第
17
～
24
位氨基酸残基的
VHCDR1、
第
42
～
49
位氨基酸残基的
VHCDR2
和第
88
～
98
位氨基酸残基的
VHCDR3
；轻链可变区包含
SEQ ID NO.2
所示氨基酸序列
N
末端第
27
～
37
位氨基酸残基的
VLCDR1、
第
55
～
57
位氨基酸残基的
VLCDR2
和第
94
～
102
位氨基酸残基的
VLCDR3。2.
根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，重链可变区中
VHFR1
的氨基酸序列如
SEQ ID NO.3
所示，和
/
或
VHFR2
的氨基酸序列如
SEQ ID NO.4
所示，和
/
或
VHFR3
的氨基酸序列如
SEQ ID NO.5
所示，和
/
或
VHFR4
的氨基酸序列如
SEQ ID NO.6
所示；和
/
或，轻链可变区中
VLFR1
的氨基酸序列如
SEQ ID NO.7
所示，和
/
或
VLFR2
的氨基酸序列如
SEQ ID NO.8
所示，和
/
或
VLFR3
的氨基酸序列如
SEQ ID NO.9
所示，和
/
或
VLFR4
的氨基酸序列如
SEQ ID NO.10
所示
。3.
根据权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，重链可变区的氨基酸序列如
SEQ IN NO.1
所示；和
/
或，轻链可变区的氨基酸序列如
SEQ IN NO.2
所示
。4.
根据权利要求1～3任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段还包含
IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE
或
IgD
任何其中之一的部分或全部恒定区的序列；优选地，所述抗原结合片段包括
F(ab
’
)2、Fab
’
、Fab、Fv、scFv、dsFv、
双特异抗体和抗体最小识别单位中的一种或多种；优选地，所述抗体或其抗原结合片段除去
CDR

【专利技术属性】
技术研发人员：上官科科，魏文涛，成含锋，
申请(专利权)人：杭州旭科生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：