抗苯妥英钠抗体或其抗原结合片段及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种抗苯妥英钠抗体或其抗原结合片段及其应用，涉及抗体技术领域。抗苯妥英钠抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区；重链可变区包含SEQ ID NO.1所示氨基酸序列N末端第25～32位氨基酸残基的VHCDR1、第50～57位氨基酸残基的VHCDR2和第96～106位氨基酸残基的VHCDR3，轻链可变区包含SEQ ID NO.2所示氨基酸序列N末端第27

【技术实现步骤摘要】
抗苯妥英钠抗体或其抗原结合片段及其应用


[0001]本专利技术涉及抗体
，尤其是涉及一种抗苯妥英钠抗体或其抗原结合片段及其应用。

技术介绍

[0002]苯妥英钠(Phenytoin sodium)对大脑皮层运动区有高度选择性抑制作用，一般认为通过稳定脑细胞膜的功能及增加脑内抑制性神经递质5
‑
羟色胺(5
‑
HT)和γ
‑
氨基丁酸(GABA)的作用，来防止异常放电的传播而具有抗癫痫的作用。抗神经痛的作用机制可能与本品作用与中枢神经系统，降低突触传递或降低引起神经元放电的短暂刺激有关。还可对心房与心室的异位节律有抑制作用，也可加速房室的传导，降低心肌自律性，具有抗心律失常作用。较常见的不良反应有行为改变、笨拙或步态不稳，思维混乱，发音不清，手抖、神经质或烦躁易怒，这些反应往往是可逆的，一旦停药很快就消失。另外较常见有齿龈肥厚、出血，面容粗糙，毛发增生。偶见有颈部或腋部淋巴结肿大(IgA减少)，发热或皮疹(不能耐受或过敏)、白细胞减少、紫癜。罕见致双眼中毒性白内障，闭经，小脑损害、萎缩。苯妥英钠可能引起潜在的严重的皮肤病变如S
‑
J综合征和中毒性表皮坏死性松解症(TEN)。苯妥英钠片为临床上常用的抗癫痫药。适用于治疗全身强直
‑
阵孪性发作、复杂部分性发作、单纯部分性发作和癫癎持续状态。也可用于治疗三叉神经痛，隐性营养不良性大疱性表皮松解，发作性舞蹈手足徐动症，发作性控制障碍，肌强直症及三环类抗抑郁药过量时心脏传导障碍等。
>[0003]苯妥英钠应用一定剂量药物后肝代谢(羟化)能力达饱和，此时即使增加很小剂量，血药浓度非线性急剧增加，有中毒危险，要监测血药浓度。有效血药浓度为10～20mg/L，每日口服300mg，7～10日可达稳态浓度。
[0004]苯妥英钠可以采用基于免疫学原理的检测方法进行检测，如免疫荧光法、酶联免疫吸附试验、胶体金免疫层析技术等方法。基于免疫学原理的检测方法需要依赖能够与苯妥英钠结合的抗体才能实现，目前市场上苯妥英钠抗体供应较为缺乏，主要依赖进口原料。为了提供稳定可靠的原料来源，降低产品成本，同时提高苯妥英钠快速诊断商品如金标试纸条、ELISA试剂盒等的检出率及灵敏度，降低假阳率，提高自产商品的竞争力等问题，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种抗苯妥英钠抗体或其抗原结合片段，通过以苯妥英钠为抗原筛选获得一株单克隆抗体，通过克隆、鉴定与基因结构的分析，确定了其CDR区序列，本专利技术的另一目的是提供关于该抗体或其抗原结合片段的生物材料和它们的应用。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：
[0007]根据本专利技术的一个方面，提供了一种抗苯妥英钠抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区；重链可变区包含SEQ ID NO.1所示氨基酸序列N末端第25～32位氨基酸残基的VHCDR1、第50～57位氨基酸残基的VHCDR2和第96～
106位氨基酸残基的VHCDR3；
[0008]轻链可变区包含SEQ ID NO.2所示氨基酸序列N末端第27
‑
37位氨基酸残基的VLCDR1、第55～57位氨基酸残基的VLCDR2和第94～103位氨基酸残基的VLCDR3。
[0009]根据本专利技术的一个方面，还提供了一种生物材料，该生物材料选自(
ⅰ
)～(
ⅲ
)中任一项：
[0010](
ⅰ
)多核苷酸，包括编码上述的抗苯妥英钠抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列；
[0011](
ⅱ
)载体，所述载体携带前述(
ⅰ
)多核苷酸。
[0012](
ⅲ
)细胞，所述细胞携带(
ⅰ
)中多核苷酸，或含有(
ⅱ
)中载体，或表达前述抗苯妥英钠抗体或其抗原结合片段。
[0013]根据本专利技术的一个方面，还提供了上述抗苯妥英钠抗体或其抗原结合片段，或上述生物材料在非诊断和治疗目的的检测苯妥英钠，或制备用于检测苯妥英钠的产品中的应用。
[0014]根据本专利技术的一个方面，还提供了一种用于检测苯妥英钠的试剂或试剂盒，该试剂或试剂盒包含上述抗苯妥英钠抗体或其抗原结合片段。
[0015]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0016]本专利技术运用苯妥英钠免疫Balb/c小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，通过特异性的高通量筛选得到具有高度特异性的杂交瘤细胞，通过培养和再免疫获得大量小鼠腹水，再经多步分离及纯化获得高纯度、高灵敏度和高特异性的抗苯妥英钠的单克隆抗体anti
‑
Phenytoin
‑
sodium
‑
mab1，为开发检测苯妥英钠的免疫试纸条提供了所需的原料。本专利技术的抗苯妥英钠的单克隆抗体anti
‑
Phenytoin
‑
sodium
‑
mab1可用于免疫印迹、免疫荧光等免疫学检测，所获抗体经验证具有良好的特异性结合能力。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0018]图1为本专利技术实施例2提供的包被有A1
‑
1号抗体的免疫层析试纸的检测结果。
具体实施方式
[0019]下面将结合实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0020]一般地，连同本文描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白和核酸化学和杂交使用的命名法和其技术是本领域众所周知和通常使用的那些。除非另有说明，本专利技术的方法和技术一般根据本领域众所周知，且如各种一般和更具体的参考文献中所述的常规方法来进行，所述参考文献在本说明书自始至终引用和讨论。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书、如本领域通常实现的或如本文所述来进行。连同本
文描述的分析化学、合成有机化学以及医学和药物化学使用的命名法、以及其实验室程序和技术是本领域众所周知和通常使用的那些。
[0021]在本文中“抗体或其抗原结合片段”是指结合特定抗原的蛋白，其泛指包含互补决定区(CDR区)的一切蛋白及蛋白片段。此外，“抗体或其抗原结合片段”也包括天然发生的抗体以及非天然发生的抗体。在本文中“抗原结合片段”是包含抗体CDR的物质，其缺乏至少一些存在于全长链中的氨基酸但仍能够特异性结合本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗苯妥英钠抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包括重链可变区和轻链可变区；重链可变区包含SEQ ID NO.1所示氨基酸序列N末端第25～32位氨基酸残基的VHCDR1、第50～57位氨基酸残基的VHCDR2和第96～106位氨基酸残基的VHCDR3；轻链可变区包含SEQ ID NO.2所示氨基酸序列N末端第27
‑
37位氨基酸残基的VLCDR1、第55～57位氨基酸残基的VLCDR2和第94～103位氨基酸残基的VLCDR3。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，重链可变区中VHFR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，和/或VHFR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，和/或VHFR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，和/或VHFR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；和/或，轻链可变区中VLFR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，和/或VLFR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，和/或VLFR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，和/或VLFR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示。3.根据权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，重链可变区的氨基酸序列如SEQ IN NO.1所示；和/或，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IN NO.2所示。4.根据权利要求1～3任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段还包含IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE或IgD任何其中之一的部分或全部恒定区的序列；优选地，所述抗原结合片段包括F(ab
’
)2、Fab
’
、Fab、Fv、scFv、dsFv、双特异抗体和抗体最小识别单位中的一种或多种；优选地，所述抗体或其抗原结合片段除去CDR区域，其余部分序列来源物种包括小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、兔、雪貂、猫、狗、山羊、绵羊、奶牛、猪、马、猴和人中的一种或多种；优选地，所述抗体还包括重链恒定区和轻链恒定区...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏文涛，上官科科，成含锋，汪燕燕，魏昕洋，
申请(专利权)人：杭州旭科生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：