经人工操纵的血管生成调控系统技术方案

本发明专利技术涉及经人工操纵工程化的血管生成相关因子及其用途，以用于血管生成调控。更具体而言，本发明专利技术涉及可人工调控血管生成的系统，所述系统包括经人工操纵工程化的血管生成相关因子以调控血管生成和/或能够操纵对血管生成相关因子进行人工工程化的组合物。在具体方面中，本发明专利技术涉及经人工工程化的血管生成相关因子(例如，VEGFA、HIF1A、ANGPT2、EPAS1、ANGPTL4等)，操纵和/或通过其表达产物的血管生成调控系统。

Manipulated angiogenesis control system

The present invention relates to an engineered angiogenesis related factor by manual manipulation and its use for regulating angiogenesis. More specifically, the present invention relates to a system that can artificially regulate angiogenesis, comprising compositions that artificially manipulate engineered angiogenesis-related factors to regulate angiogenesis and/or can manipulate engineered angiogenesis-related factors. In particular, the present invention relates to an artificially engineered angiogenesis-related factor (e.g., VEGFA, HIF1A, ANGPT2, EPAS1, ANGPTL4, etc.) that manipulates and/or regulates angiogenesis through its expression products.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】经人工操纵的血管生成调控系统
本专利技术涉及用于调控新血管形成的经人工操纵的新血管形成相关因子及其用途。更具体而言，本专利技术涉及能够人工调控新血管形成的系统，该系统包括用于调控新血管形成的经人工操纵的新血管形成相关因子和/或能够用于新血管形成相关因子的人工操纵的组合物。
技术介绍
在许多严重疾病的病例中发现的过度新血管形成发生于诸如癌症、黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、关节炎和银屑病的疾病中。在这种状态下，将新血管提供给具有疾病的组织，导致破坏正常组织，并且在癌症的情况中，新血管允许肿瘤细胞进入循环系统并由此定居于另一器官中(肿瘤转移)。特别是，由于癌症细胞通过新血管形成接收营养成分并转移至另一器官，新血管形成对于癌症的生长和转移是必要的。已知癌症组织中生成的毛细血管的密度与多种类型的癌症中癌症转移的可能性之间存在实际的密切关系。此外，类风湿性关节炎(其为炎性疾病中的代表性疾病)是由自身免疫紊乱引起的，然而，在疾病发展过程中，关节之间的滑膜腔中发生的慢性炎症导致新血管形成，从而致使软骨被破坏。每年导致世界上数百万人失明的多种眼科疾病也是由新血管形成引起的。作为代表性实例，糖尿病性失明是糖尿病并发症，并且是指视网膜中产生的毛细血管通过新血管形成侵入玻璃体，最终失明。因此，新血管形成抑制物质可有效地用作其中发生持续的新血管形成的多种疾病(例如癌症、类风湿性关节炎和糖尿病性失明)的治疗剂和预防剂。同时，传统地，已对抑制血管内皮生长因子(VEGF)的信号转导以抑制新血管形成进行了积极研究。然而，在传统技术中，最初，似乎抑制了新血管形成，然后存在癌细胞变得更具侵袭性的副作用，因为针对癌细胞的抗癌剂的通路也受到抑制。因此，虽然关于治疗由新血管形成诱导的疾病的多种研究正在进行，几乎没有治疗此类疾病的根本方法。特别是，没有治疗诸如由新生血管形成引起的癌症转移或癌症、由视网膜或角膜变性引起的失明的严重疾病的方法，因此迫切需要开发这样的根本方法来治疗新血管形成相关疾病。
技术实现思路
技术问题为了解决上述问题，本专利技术涉及人工操纵的新血管形成系统，该系统具有改善的新血管形成作用。更具体而言，本专利技术涉及经人工操纵的新血管形成相关因子和具有经由该因子人工修饰而来的功能的新血管形成系统。本专利技术还涉及用于特定目的的经基因操纵或修饰的新血管形成相关因子。作为示例性实施方式，本专利技术涉及提供经人工操纵的新血管形成调控系统。作为示例性实施方式，本专利技术涉及提供经人工操纵的新血管形成相关因子及其表达产物。作为示例性实施方式，本专利技术涉及提供用于操纵基因以操纵新血管形成相关因子的组合物及使用其的方法。作为示例性实施方式，本专利技术涉及提供用于调控新血管形成的方法。作为示例性实施方式，本专利技术涉及提供用于治疗新血管形成相关疾病的药物组合物及其多种用途。作为示例性实施方式，本专利技术涉及提供经人工操纵的新血管形成相关因子(例如，VEGFA、HIF1A、ANGPT2、EPAS1、ANGPTL4等)，和/或其表达产物。作为示例性实施方式，本专利技术涉及提供用于操纵基因以能够人工操纵新血管形成相关因子(例如，VEGFA、HIF1A、ANGPT2、EPAS1、ANGPTL4等)的组合物。作为示例性实施方式，本专利技术涉及提供经人工操纵的新血管形成相关因子(例如，VEGFA、HIF1A、ANGPT2、EPAS1、ANGPTL4等)，和/或用于操纵基因以能够进行所述人工操纵的组合物的治疗用途。作为示例性实施方式，本专利技术涉及提供经人工操纵的新血管形成相关因子(例如，VEGFA、HIF1A、ANGPT2、EPAS1、ANGPTL4等)，和/或用于操纵基因以能够进行所述人工操纵的组合物的另外的用途。技术方案为了解决这些问题，本专利技术涉及用于人工调控新血管形成的系统，该系统包含用于调控新血管形成的经人工操纵的新血管形成相关因子和/或用于对新血管形成相关因子进行人工操纵的组合物。本专利技术提供了用于特定目的的人工操纵的新血管形成相关因子。术语“新血管形成相关因子(neovascularization-associatedfactor)”包括能够具有新血管形成调控功能的多种非天然的经人工操纵的物质，所述物质直接参与或间接影响新血管形成。所述物质可为DNA、RNA、基因、肽、多肽或蛋白质。例如，所述物质可为经基因操纵或修饰的基因或在免疫细胞中表达的蛋白质。新血管形成相关因子可促进或增加新血管形成，或相反地，阻遏或抑制新血管形成。另外，它可以对新血管形成环境或新血管形成抑制环境进行诱导、激活或使其失活。在本专利技术的示例性实施方式中，所述新血管形成相关因子可为例如经人工操纵的VEGFA基因、HIF1A基因、ANGPT2基因、EPAS1基因或ANGPTL4基因。在本专利技术的示例性实施方式中，所述新血管形成相关因子可包括两种以上的经人工操纵的基因。例如，可对选自于由VEGFA基因、HIF1A基因、ANGPT2基因、EPAS1基因和ANGPTL4基因所组成的组中的两种以上的基因进行人工操纵。因此，在本专利技术的示例性实施方式中，提供了选自于由以下所组成的组中的一种或多种经人工操纵的新血管形成相关因子：核酸序列中经过修饰的VEGFA基因、HIF1A基因、ANGPT2基因、EPAS1基因以及ANGPTL4基因。核酸序列中的修饰可不受限制地为通过引导核酸-编辑蛋白复合体进行的人工操纵。术语“引导核酸-编辑蛋白复合体”是指经由引导核酸和编辑蛋白间的相互作用形成的复合体，该核酸-蛋白复合体包含引导核酸和编辑蛋白。引导核酸-编辑蛋白复合体可用于修饰对象物。所述对象物可为靶核酸、基因、染色体或蛋白。例如，所述基因可为通过引导核酸-编辑蛋白复合体进行人工操纵的新血管形成相关因子，其中，经人工操纵的所述新血管形成相关因子包含核酸的一种或多种修饰，所述修饰为在组成所述新血管形成相关因子的核酸序列中的原型间隔区邻近基序(PAM)序列中或在临近所述PAM序列的5'端和/或3'端的连续的1bp-50bp碱基序列区中的一个或多个核苷酸的删除或插入、不同于野生型基因的一个或多个核苷酸的置换、以及一个或多个外源核苷酸的插入中的至少一种，或在组成所述新血管形成相关因子的核酸序列中的一个或多个核苷酸的化学修饰。核酸的修饰可以发生于基因的启动子区。核酸的修饰可以发生于基因的外显子区。在一个示例性实施方式中，50％的修饰可以发生于基因编码区的上游部分。核酸的修饰可以发生于基因的内含子区。核酸的修饰可以发生于基因的增强子区。PAM序列可为例如如下序列中的一种或多种(以5'至3'方向来描述)：NGG(N为A、T、C或G)；NNNNRYAC(N各自独立地为A、T、C或G；R为A或G；Y为C或T)；NNAGAAW(N各自独立地为A、T、C或G；并且W为A或T)；NNNNGATT(N各自独立地为A、T、C或G)；NNGRR(T)(N各自独立地为A、T、C或G；R为A或G；Y为C或T)；以及TTN(N为A、T、C或G)。所述编辑蛋白可由以下衍生而来：酿脓链球菌(Streptococcuspyogenes)、嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)、链球菌属(Streptococcussp.)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaur本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.经人工操纵的新血管形成相关因子，所述人工操纵的新血管形成相关因子选自于由在核酸序列中具有修饰的如下基因所组成的组：VEGFA基因、HIF1A基因、ANGPT2基因、EPAS1基因以及ANGPTL4基因。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.08.19 US 62/376,9981.经人工操纵的新血管形成相关因子，所述人工操纵的新血管形成相关因子选自于由在核酸序列中具有修饰的如下基因所组成的组：VEGFA基因、HIF1A基因、ANGPT2基因、EPAS1基因以及ANGPTL4基因。2.如权利要求1所述的经人工操纵的新血管形成相关因子，其中，通过引导核酸-编辑蛋白复合体人工产生所述核酸序列中的修饰。3.如权利要求1所述的经人工操纵的新血管形成相关因子，其中，所述新血管形成相关因子为选自于由以下基因所组成的组中的一种或多种：VEGFA基因、HIF1A基因、ANGPT2基因、EPAS1基因以及ANGPTL4基因。4.如权利要求1所述的经人工操纵的新血管形成相关因子，其中，所述基因是通过引导核酸-编辑蛋白复合体进行人工操纵的新血管形成相关因子，其中，所述经人工操纵的新血管形成相关因子包括核酸的一种或多种修饰，所述修饰为在组成所述新血管形成相关因子的核酸序列中的原型间隔区邻近基序(PAM)序列中或在临近所述PAM序列的5'端和/或3'端的连续的1bp-50bp碱基序列区中的一个或多个核苷酸的删除或插入、利用不同于野生型基因的一个或多个核苷酸进行的置换、以及一个或多个外源核苷酸的插入中的至少一种，或者在组成所述新血管形成相关因子的核酸序列中的一个或多个核苷酸的化学修饰。5.如权利要求1所述的经人工操纵的新血管形成相关因子，其中，所述核酸的修饰发生于所述基因的启动子区。6.如权利要求1所述的经人工操纵的新血管形成相关因子，其中，所述核酸的修饰发生于所述基因的外显子区。7.如权利要求1所述的经人工操纵的新血管形成相关因子，其中，所述核酸的修饰发生于所述基因的内含子区。8.如权利要求1所述的经人工操纵的新血管形成相关因子，其中，所述核酸的修饰发生于所述基因的增强子区。9.如权利要求4所述的经人工操纵的新血管形成相关因子，其中，所述PAM序列为例如以下序列中的一种或多种，所述序列以5'至3'方向来描述：NGG，N为A、T、C或G；NNNNRYAC，N各自独立地为A、T、C或G；R为A或G；Y为C或T；NNAGAAW，N各自独立地为A、T、C或G；W为A或T；NNNNGATT，N各自独立地为A、T、C或G；NNGRR(T)，N各自独立地为A、T、C或G；R为A或G；Y为C或T；以及TTN，N为A、T、C或G。10.如权利要求2所述的经人工操纵的新血管形成相关因子，其中，所述编辑蛋白包括选自于由如下编辑蛋白所组成的组的一种或多种：由酿脓链球菌(Streptococcuspyogenes)衍生而来的Cas9蛋白、由空肠弯曲菌(Campylobacterjejuni)衍生而来的Cas9蛋白、由嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)衍生而来的Cas9蛋白、由金黄色葡萄球菌(Streptocuccusaureus)衍生而来的Cas9蛋白、由脑膜炎奈瑟菌(Neisseriameningitidis)衍生而来的Cas9蛋白以及Cpf1蛋白。11.引导核酸，所述引导核酸能够与选自于由如下基因所组成的组中的一种或多种基因的核酸序列中的靶序列SEQIDNO:1-SEQIDNO:79分别形成互补结合：VEGFA基因、HIF1A基因、ANGPT2基因、EPAS1基因以及ANGPTL4基因。12.如权利要求11所述的引导核酸，所述引导核酸包括选自于由如下引导核酸所组成的组中的一种或多种引导核酸：能够与所述VEGFA基因的核酸序列中的靶序列SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10和SEQIDNO:11分别形成互补结合的引导核酸；能够与所述HIF1A基因的核酸序列中的靶序列SEQIDNO:14、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:26、SEQIDNO:29和SEQIDNO:31分别形成互补结合的引导核酸；能够与所述ANGPT2基因的核酸序列中的靶序列SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO:37、SEQIDNO:38、SEQIDNO:39和SEQIDNO:43分别形成互补结合的引导核酸；能够与所述EPAS1基因的核酸序列中的靶序列SEQIDNO:47、SEQIDNO:48、SEQIDNO:49、SEQIDNO:50、SEQIDNO:53、SEQIDNO:54和...

【专利技术属性】
技术研发人员：金正勋，朴性昱，金奭中，宋东佑，
申请(专利权)人：株式会社图尔金，首尔大学校产学协力团，首尔大学病院，
类型：发明
国别省市：韩国,KR