从脐带组织中获取原代间充质干细胞的方法技术

本发明专利技术公开了一种从脐带组织中获取原代间充质干细胞的方法，与现有技术相比，本发明专利技术采用组织块贴壁法对华通氏胶组织进行多次培养，可获得更多的原代间充质干细胞，提高了原代间充质干细胞的产量；而且使用无血清培养基加血清代替物培养，培养过程不使用胎牛血清，避免了因动物源成分的引入造成污染和对所述干细胞后期使用的不良影响；另外，用消化酶TrypLE消化细胞，该酶为非动物来源，且对细胞作用温和，大大降低细胞的消化损伤；获得原代间充质干细胞后，通过滤网过滤掉细胞悬液中的残余组织块，提高了原代间充质干细胞的均一度。

Method of obtaining primary mesenchymal stem cells from umbilical cord tissue

The invention discloses a method for obtaining primary mesenchymal stem cells from umbilical cord tissue. Compared with the existing technology, the method of tissue block adherence can obtain more primary mesenchymal stem cells and improve the production of primary mesenchymal stem cells by multiple cultures of Walton's gum tissue, and the serum-free medium and serum substitutes are used to culture the primary mesenchymal stem cells. Fetal bovine serum is used to avoid contamination caused by the introduction of animal-derived ingredients and adverse effects on the later use of the stem cells. In addition, the digestive enzyme TrypLE is used to digest cells from non-animal sources, which has mild effects on cells and greatly reduces the digestive damage of cells. After obtaining primary mesenchymal stem cells, the residual tissue blocks in cell suspension are filtered through a filter, and the cell suspension is improved. The homogeneity of primary mesenchymal stem cells was studied.

【技术实现步骤摘要】
从脐带组织中获取原代间充质干细胞的方法
本专利技术涉及生物工程
，具体涉及一种从脐带组织中获取原代间充质干细胞的方法。
技术介绍
间充质干细胞(MesenchymalStemCells,MSC)是一类来源于发育早期中胚层及外胚层的多能干细胞，具有自我更新和多向分化的能力。间充质干细胞在临床上可应用于解决多种血液系统疾病、心血管疾病、肝硬化、神经系统疾病、膝关节半月板部分切除损伤修复、自身免疫性疾病等，此外还在神经系统修复等方面具有发展前景。间充质干细胞最早在骨髓中发现，随后发现存在于人体发生、发育过程的许多种组织中。目前用得最多的是骨髓来源的间充质干细胞，但存在以下问题：随着年龄的老化，骨髓间充质干细胞数目显著降低、增殖分化能力大幅度衰退；其制备过程不容易质控；移植给异体时可能引起免疫反应；取材时对患者有损伤，患者有骨髓疾病时不能采集，即使是健康供者，亦不能抽取太多的骨髓。研究表明，脐带来源的间充质干细胞表达多种胚胎干细胞的特有分子标志物，并具有分化潜力大、增殖能力强、免疫原性低的特性；另外其取材方便，无道德伦理问题的限制，更易于工业化制备。因此，脐带间充质干细胞不仅能够成为骨本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从脐带组织中获取原代间充质干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将脐带华通氏胶组织段剪碎至4‑10mm

【技术特征摘要】
1.一种从脐带组织中获取原代间充质干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将脐带华通氏胶组织段剪碎至4-10mm3大小的组织块，然后将所述组织块转移至细胞培养皿中平铺贴壁，适当风干组织块以使其减少水分、贴壁牢固；2)加入由基础培养基和血清替代物组成的完全培养基，其中所述完全培养基中含有3-5％体积比的血清替代物，然后放入细胞培养箱孵育培养；3)待华通氏胶组织块中爬出大量间充质干细胞后，倒掉培养基上清，用生理盐水润洗培养皿1-3次，然后使用蛋白酶对爬出的间充质干细胞进行充分消化，待细胞收缩变圆，用所述完全培养基终止消化，收集消化后的间充质干细胞；4)使用生理盐水对所述细胞培养皿中的华通氏胶组织块进行多次洗涤，对贴壁牢固的华通氏胶组织块重复步骤2)-3)，直到没有间充质干细胞从所述华通氏胶组织块中爬出，以获得更多消化后的间充质干细胞；5)将获得的间充质干细胞通过筛网过滤，以除去细胞悬液中残余的华通氏胶组织块，所得过滤后的细胞即为制备的原代间充质干细胞。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脐带组...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵进军，谷广其，杨桂花，赵宇飞，李张鹏，
申请(专利权)人：和携科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11