大规模生产符合GMP规范的临床级外泌体制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了大规模生产符合GMP规范的临床级外泌体，该方法包括以下步骤：S1：获取细胞沉淀，首先抽取病人膝关节积液，离心获得细胞沉淀，留取备用；S2：培养间充质干细胞，在符合GMP的要求下利用无血清培养基对人关节来源的间充质干细胞进行培养，留取备用；S3：生物反应器的预处理；S4：接种培养间充质干细胞；S5：培养获得外泌体。该发明专利技术所制备的外泌体具有较好的稳定性、生物相容性、生物稳定性，且制作步骤简单，降低了相应的生产成本，可大规模进行生产，直接提取细胞沉淀中的间充质干细胞，然后进行培养，培养完成后将上清液高速离心后即可获得所需的外泌体，适合推广。

【技术实现步骤摘要】
大规模生产符合GMP规范的临床级外泌体
本专利技术涉及生物领域，具体为大规模生产符合GMP规范的临床级外泌体。
技术介绍
GMP是一套适用于制药、食品等行业的强制性标准，要求企业从原料、人员、设施设备、生产过程、包装运输、质量控制等方面按国家有关法规达到卫生质量要求，形成一套可操作的作业规范帮助企业改善企业卫生环境，及时发现生产过程中存在的问题，加以改善，简要的说，GMP要求制药、食品等生产企业应具备良好的生产设备，合理的生产过程，完善的质量管理和严格的检测系统，确保最终产品质量(包括食品安全卫生等)符合法规要求。GMP级关节液间充质干细胞源性外泌体是用于医疗治疗中较好的外泌体，但它在实际制作的过程中仍存在以下弊端：现有技术中，GMP级关节液间充质干细胞源性外泌体在生产的过程中存在稳定性较差，生物相容性较差，生物稳定性较差等现象；且现有技术中，GMP级关节液间充质干细胞源性外泌体在生产时较为不便，生产步骤复杂，生产成本较高，不适合推广。为此，提出了大规模生产符合GMP规范的临床级外泌体以解决上述弊端。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供大规模生产符合GMP规范的临床级外泌体，以解决上本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.大规模生产符合GMP规范的临床级外泌体，其特征在于：该方法包括以下步骤：S1：获取细胞沉淀，首先抽取病人膝关节积液，离心获得细胞沉淀，留取备用；S2：培养间充质干细胞，在符合GMP的要求下利用无血清培养基对人关节来源的间充质干细胞进行培养，留取备用；S3：生物反应器的预处理，将生物反应器清洗干净，然后风干，留取备用；S4：接种培养间充质干细胞，将人关节液来源的间充质干细胞接种到微载体上，进行三维(3D)细胞培养，生物反应器的外部培养瓶不间断地提供细胞养分，细胞通过分子量截留膜和微载体保留于细胞生物反应室中；S5：培养获得外泌体，对S4中得到的上清液进行差异超速离心分离获取外泌体，并进行洗涤...

【技术特征摘要】
1.大规模生产符合GMP规范的临床级外泌体，其特征在于：该方法包括以下步骤：S1：获取细胞沉淀，首先抽取病人膝关节积液，离心获得细胞沉淀，留取备用；S2：培养间充质干细胞，在符合GMP的要求下利用无血清培养基对人关节来源的间充质干细胞进行培养，留取备用；S3：生物反应器的预处理，将生物反应器清洗干净，然后风干，留取备用；S4：接种培养间充质干细胞，将人关节液来源的间充质干细胞接种到微载体上，进行三维(3D)细胞培养，生物反应器的外部培养瓶不间断地提供细胞养分，细胞通过分子量截留膜和微载体保留于细胞生物反应室中；S5：培养获得外泌体，对S4中得到的上清液进行差异超速离心分离获取外泌体，并进行洗涤步骤从培养上清液中富集纯净的外泌体。2.根据权利要求1所述的大规模生产符合GMP规范的临床级外泌体，其特征在于：所述步骤S2中，无血清培养基和试剂被广泛的应用...

【专利技术属性】
技术研发人员：段莉，王大平，梁宇杰，徐晓，李兴福，欧阳侃，
申请(专利权)人：深圳市第二人民医院，
类型：发明
国别省市：广东,44