一种脐带间质干细胞外泌体分离方法技术

本发明专利技术涉及一种脐带间质干细胞外泌体分离方法，包括以下步骤：将人脐带间质干细胞在培养基中培养2～3天，在细胞培养基中添加干扰素、EPO和PDGF‑BB；收集培养基的上清液，对上清液进行离心，收集上层液，得到人脐带间质干细胞外泌体粗液；将人脐带间质干细胞外泌体粗液经超滤浓缩离心，得到浓缩液；将浓缩液移至质量浓度为30％的蔗糖重水密度垫上，在4℃条件下，80000～160000g密度梯度离心120min，收集底部缓冲垫；将底部缓冲垫经PBS溶液洗涤后置于超滤离心管中洗涤，收集浓缩液，得到人脐带间质干细胞外泌体。相对现有技术，本发明专利技术能提升人脐带间质干细胞的存活率，以及降低破损率，分离纯化方法操作简便，适合工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种脐带间质干细胞外泌体分离方法
本专利技术涉及细胞分离
，特别涉及一种脐带间质干细胞外泌体分离方法。
技术介绍
目前进行外泌体提取的方式和途径也多种多样，如：骨髓中提取、外周血中提取等，这些外泌体获取的途径均需要有创伤性的细胞或组织来源。外泌体提取方法主要采用超速离心法或昂贵的试剂盒过柱子法，然而超速离心法所获取的外泌体质量不均一、不能保证外泌体所获取量、逐级离心时间冗长，有时甚至离心时间或者离心速度原因而最终无法分离得到，浪费时间及成本。而试剂盒过柱子法通常只能适用于较小量的外泌体获取，并且成本昂贵。现有技术中从胎盘、脐带血、骨髓、脂肪培养间充质干细胞时，均采用这些MSC的培养基上清来提取外泌体，这些方面均存在产量偏低且所得外泌体纯度偏低的不足。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种脐带间质干细胞外泌体分离方法，所要解决的技术问题是：MSC的培养基上清来提取外泌体，这些方面均存在产量偏低且所得外泌体纯度偏低的不足。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：一种脐带间质干细胞外泌体分离方法，包括以下步骤：将人脐带间质干细胞在培养基中培养2～3天，在细胞培养基中添加干扰素、EP本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脐带间质干细胞外泌体分离方法，其特征在于，包括以下步骤：将人脐带间质干细胞在培养基中培养2～3天，在细胞培养基中添加干扰素、EPO和PDGF‑BB；收集培养基的上清液，对上清液进行离心，收集上层液，得到人脐带间质干细胞外泌体粗液；将人脐带间质干细胞外泌体粗液经超滤浓缩离心，得到浓缩液；将浓缩液移至质量浓度为30％的蔗糖重水密度垫上，在4℃条件下，80000～160000g密度梯度离心120min，收集底部缓冲垫；将底部缓冲垫经PBS溶液洗涤后置于超滤离心管中洗涤，收集浓缩液，得到人脐带间质干细胞外泌体。

【技术特征摘要】
1.一种脐带间质干细胞外泌体分离方法，其特征在于，包括以下步骤：将人脐带间质干细胞在培养基中培养2～3天，在细胞培养基中添加干扰素、EPO和PDGF-BB；收集培养基的上清液，对上清液进行离心，收集上层液，得到人脐带间质干细胞外泌体粗液；将人脐带间质干细胞外泌体粗液经超滤浓缩离心，得到浓缩液；将浓缩液移至质量浓度为30％的蔗糖重水密度垫上，在4℃条件下，80000～160000g密度梯度离心120min，收集底部缓冲垫；将底部缓冲垫经PBS溶液洗涤后置于超滤离心管中洗涤，收集浓缩液，得到人脐带间质干细胞外泌体。2.根据权利要求1所述一种脐带间质干细胞外泌体分离方法，其特征在于，在细胞培养基中添加干扰素、EPO和PDGF-BB具体包括以下步骤：培养基的培养温度为36～38℃；首先加入重组人干扰素、PDGF-BB，在37℃，5％的CO2条件下培养24小时；然后，再加入EPO，在37℃，5％的CO2条件下培养72小时。3.根据权利要求2所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张维，李杰，
申请(专利权)人：深圳光彩生命工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44