一种研磨与混合酶结合的提取脐带间充质干细胞的方法技术

本发明专利技术公开了一种研磨与混合酶结合的提取脐带间充质干细胞的方法，其包含：步骤1、将脐带两端去除，并清洗脐带动静脉中的血渍；步骤2、将脐动脉和脐静脉剔除，将脐带剪成小块，剥离出来胶层，剪成更小的块状；步骤3、将组织块分装入离心管，用组织研磨机将组织研磨成肉糜；步骤4、用胶原蛋白酶和胰蛋白酶与肉糜悬液混合，置于摇床中震荡；步骤5、再用培养基中和后，离心去上清，再与培养液混合，加入细胞培养瓶中；步骤6、静置培养，然后用酶消化，再进行传代培养；步骤7、继续培养一段时间后，P1代再进行传代培养，P2代冻存。本发明专利技术基于组织研磨法与消化结合的方法，能够大大提高原代细胞得率，减少细胞损伤。

【技术实现步骤摘要】
一种研磨与混合酶结合的提取脐带间充质干细胞的方法
本专利技术涉及一种用于哺乳动物细胞基因工程领域的提取方法，具体地，涉及一种能够有效地研磨与混合酶结合的提取脐带间充质干细胞的方法。
技术介绍
脐带间充质干细胞是存在于新生儿脐带华通氏胶和血管周围组织中的一种间充质干细胞。来源于脐带的间充质干细胞因其取材方便，无道德伦理争议，可获取的细胞数量多、增殖能力强、免疫调节作用大，分泌细胞生长因子的总量也非常高，有利于皮肤组织损伤修复及皮肤过敏问题解决，基于此的药妆产品开发研究不断深入及干细胞产业逐渐大规模化和商业化。具体而言，脐带间充质干细胞培养大多使用贴壁法，将脐带剪成小块贴于培养皿表面，贴壁一周左右，代细胞爬出长满后消化传代，这一方法耗时较长通常需要一个月左右时间才能进行第一次传代操作，其中最常见的问题是组织贴壁不牢，容易脱落，细胞爬出较少，原代培养时间过长使细胞老化，状态变差，使用效果变差等；贴壁法工程量巨大，例如一根脐带在P1代是细胞数量达10亿，由于贴壁不完全，大大增加操作难度，由于爬出细胞分化程度和分裂不一，容易在后期造成细胞质地不均一，影响细胞的质控和使用；贴壁法造成生产成本问题本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种研磨与混合酶结合的提取脐带间充质干细胞的方法，其特征在于，所述的方法包含：步骤1、将脐带两端去除，并清洗脐带动静脉中的血渍；步骤2、将脐动脉和脐静脉剔除，将脐带剪成小块，剥离出来胶层，剪成更小的块状；步骤3、将组织块分装入离心管，用组织研磨机将组织研磨成肉糜；步骤4、用胶原蛋白酶和胰蛋白酶与肉糜悬液混合，置于摇床中震荡；步骤5、再用培养基中和后，离心去上清，再与培养液混合，加入细胞培养瓶中；步骤6、静置培养，然后用酶消化，再进行传代培养；步骤7、继续培养一段时间后，P1代再进行传代培养，P2代冻存。

【技术特征摘要】
1.一种研磨与混合酶结合的提取脐带间充质干细胞的方法，其特征在于，所述的方法包含：步骤1、将脐带两端去除，并清洗脐带动静脉中的血渍；步骤2、将脐动脉和脐静脉剔除，将脐带剪成小块，剥离出来胶层，剪成更小的块状；步骤3、将组织块分装入离心管，用组织研磨机将组织研磨成肉糜；步骤4、用胶原蛋白酶和胰蛋白酶与肉糜悬液混合，置于摇床中震荡；步骤5、再用培养基中和后，离心去上清，再与培养液混合，加入细胞培养瓶中；步骤6、静置培养，然后用酶消化，再进行传代培养；步骤7、继续培养一段时间后，P1代再进行传代培养，P2代冻存。2.如权利要求1所述的研磨与混合酶结合的提取脐带间充质干细胞的方法，其特征在于，所述的步骤1中，用含有庆大霉素和双抗的生理盐水清洗脐带动静脉中的血渍。3.如权利要求1所述的研磨与混合酶结合的提取脐带间充质干细胞的方法，其特征在于，所述的步骤2中，将两根脐动脉和一根脐静脉剔除，将脐带剪成长度为1cm的小块，剥离出来胶层，剪成直径为3mm的小块。4.如权利要求1所述的研磨与混合酶结合的提取脐带间充质干细胞的方法，其特征在于，所述的步骤3中，将组织块分装入15ml离心管，每管内的装入体积为2ml，调节组织研磨机的转速为800rpm，研磨1min，通过组织研磨机将组织研磨成肉糜。5.如权利要求1所述的研磨与混合酶结合的...

【专利技术属性】
技术研发人员：高戎戎，马林，
申请(专利权)人：劳敏翔，
类型：发明
国别省市：浙江,33