甲基化DNA的扩增方法、DNA的甲基化判定方法以及癌症的判定方法技术

本发明专利技术的课题在于提供能够简便地进行甲基化DNA的扩增和使用了该扩增的DNA的甲基化判定以及癌症判定的方法。本发明专利技术涉及“甲基化的分析对象区域的扩增方法、分析对象区域的甲基化判定方法、甲基化判定用试剂、癌症的判定方法、获得用于进行癌症的判定的数据的方法、癌症的判定用试剂和用于进行癌症的判定的标志物”。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】甲基化DNA的扩增方法、DNA的甲基化判定方法以及癌症的判定方法
本专利技术涉及甲基化DNA的扩增方法、DNA的甲基化判定方法以及癌症的判定方法。
技术介绍
DNA的甲基化是指利用DNA甲基化酶进行的碱基修饰，是在CpG序列的胞嘧啶碱基的5位等附加有甲基的状态。DNA的甲基化在高等生物中对正常的发育和细胞的分化起到极其重要的作用。目前，作为对甲基化DNA进行扩增的方法，例如进行了下述方法：(1)使DNA进行亚硫酸氢盐反应，接着进行PCR等核酸扩增反应的方法(专利文献1)；(2)利用甲基化敏感性限制酶和甲基化非敏感性限制酶对DNA进行处理，接着进行PCR等核酸扩增反应的方法(专利文献2)。另外，在专利文献1和专利文献2中，还通过DNA微阵列等对利用扩增甲基化DNA的方法得到的扩增产物进行分析，基于其结果，对DNA是否被甲基化进行判定及分析。另一方面，还已知DNA的甲基化与癌症化有关。例如，DNA的甲基化模式的差异与癌症或各种疾病有关(非专利文献1、2)；进行了基于DNA的甲基化率来检测癌症的方法等(专利文献3)。现有技术文献专利文献专利文献1：WO2013/089063专利文献2：WO本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种双链DNA中的甲基化的分析对象区域的扩增方法，其包括下述步骤1和2：(1)步骤1，利用S1核酸酶和甲基化敏感性限制酶对包含分析对象区域的双链DNA进行处理；(2)步骤2，对步骤1中处理后的双链DNA的分析对象区域进行扩增。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.02 JP 2016-1715501.一种双链DNA中的甲基化的分析对象区域的扩增方法，其包括下述步骤1和2：(1)步骤1，利用S1核酸酶和甲基化敏感性限制酶对包含分析对象区域的双链DNA进行处理；(2)步骤2，对步骤1中处理后的双链DNA的分析对象区域进行扩增。2.如权利要求1所述的扩增方法，其中，所述步骤1在利用S1核酸酶进行处理后，利用甲基化敏感性限制酶进行处理。3.如权利要求1所述的扩增方法，其中，所述步骤1在利用甲基化敏感性限制酶进行处理后，利用S1核酸酶进行处理。4.如权利要求1所述的扩增方法，其中，在所述步骤1之前，包括利用在分析对象区域内不存在识别序列的限制酶进行处理的片段化步骤。5.一种双链DNA中的分析对象区域的甲基化判定方法，其包括下述步骤1～4：(1)步骤1，利用S1核酸酶和甲基化敏感性限制酶对包含分析对象区域的双链DNA进行处理；(2)步骤2，对步骤1中处理后的双链DNA的分析对象区域进行扩增；(3)步骤3，确认步骤2中得到的扩增产物的有无；(4)步骤4，基于步骤3的结果，判定分析对象区域是否被甲基化。6.如权利要求5所述的甲基化判定方法，其中，所述步骤1在利用S1核酸酶进行处理后，利用甲基化敏感性限制酶进行处理。7.如权利要求5所述的甲基化判定方法，其中，所述步骤1在利用甲基化敏感性限制酶进行处理后，利用S1核酸酶进行处理。8.如权利要求5所述的甲基化判定方法，其中，在所述步骤1之前，包括利用在分析对象区域内不存在识别序列的限制酶进行处理的片段化步骤。9.一种DNA的甲基化判定用...

【专利技术属性】
技术研发人员：林田幸信，
申请(专利权)人：富士胶片和光纯药株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP