一种新的脱细胞羊膜的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种新的脱细胞羊膜的制备方法，涉及生物材料的技术领域。该方法包括将羊膜超声处理，然后物理刮除羊膜上的细胞，得到脱细胞羊膜。该方法采用超声处理和物理刮除的方式去除羊膜表面的细胞，避免了胰酶等化学试剂的使用，制备得到的脱细胞羊膜产品更安全，降低了羊膜中对机体有害的化学物质的残留，同时最大限度的保留了羊膜基质的完整性。

A new preparation method of acellular amniotic membrane

The invention provides a new preparation method of acellular amniotic membrane, which relates to the technical field of biological materials. The method includes ultrasound treatment of amniotic membrane and physical scraping of cells on amniotic membrane to obtain acellular amniotic membrane. The method uses ultrasound treatment and physical scraping to remove cells on the surface of amniotic membrane, avoiding the use of chemical reagents such as trypsin, making the acellular amniotic membrane products safer, reducing the residual harmful chemicals in the amniotic membrane, and retaining the integrity of the amniotic membrane matrix to the greatest extent.

【技术实现步骤摘要】
一种新的脱细胞羊膜的制备方法
本专利技术涉及生物材料
，尤其是涉及一种新的脱细胞羊膜的制备方法。
技术介绍
应用于组织工程中的支架材料是指具备支撑特定细胞，引导组织再生和控制组织结构，能植入生物体且与组织活体细胞结合的材料。组织工程中的支架材料在组织工程中扮演着极其重要的角色，它可调控细胞在支架中的生长及发挥生物学功能，同时促进搭载在支架中的细胞向目标组织或器官分化，支架为接种的细胞提供初步支撑，将细胞定位在合适的空间中，为细胞的黏附、迁移、增殖和分化提供物理和生物学提示，并繁殖细胞和将其分泌的细胞外基质组装到功能性组织和器官中。在组织再生期间，支架逐渐被细胞自身及周围组织分泌的基质溶解取代。支架材料主要包括生物型支架、可降解复合材料支架及天然材料支架。细胞外基质支架属于天然材料型支架，是一种理想的组织工程支架，由于基质蛋白是体内细胞的主要成分，细胞外基质支架不仅对细胞起到支撑作用，同时也对细胞生长、增殖、体态及分化起到调控作用。细胞外基质(extracellularmatrixc，ECM)是指由细胞合成并分泌到胞外，分布在细胞表面或细胞之间的大分子，主要是一些多糖和蛋白或蛋白聚糖及各种纤维。这些物质构成网架结构，支持并连接组织结构，调节组织和细胞的生理活动。细胞外基质是人体或者动物组织的重要组成成分，虽然不属于任何细胞，但它是细胞生命代谢活动的分泌产物，也构成了组织细胞整体生存和功能活动的直接微环境，还决定了结缔组织的特性，是细胞功能活动的参与者。细胞外基质支架和细胞外基质仿生支架可促进动物和人体许多不同组织的重塑。为了获得天然的细胞外基质仿生支架，常常将组织中的细胞通过脱细胞处理而去除，但其自身结构、功能蛋白质和糖胺聚糖的复杂基质却被可保留下来。脱细胞羊膜作为细胞外基质支架，因其优越的生物相容性、生物可降解性和低免疫原性等众多优点，可作为保持干细胞多能分化特性的培养环境，也直接充当了组织工程支架材料的优先选择。羊膜是胎膜最里层厚约0.02～0.05mm、具有一定韧性、无血管、神经和淋巴管的半透明组织。羊膜具有低抗原性、抗纤维化、抗炎、抗新生血管生成作用，作为一种生物材料已广泛应用于临床。脱细胞羊膜不含羊膜上皮细胞，保留了羊膜基底膜与致密层，它的主要成分是III、Ⅳ、V型胶原蛋白、蛋白多糖和糖蛋白，是一种特殊的细胞外基质。脱细胞羊膜作为一种特殊的细胞外基质，取材较易，数量较多，广泛的应用于各部位损伤修复，如角膜移植、皮肤缺损、软骨损伤后的修复及外周神经再生等领域，获得良好的治疗效果。供体羊膜的可用性，同种异体或异种异体羊膜由于其有效性已被广泛应用，但是却不能不考虑炎症和免疫排斥反应发生的可能性，因此彻底移除细胞成分的方法就变得十分重要。现有的脱细胞羊膜的制备方法主要有酶消法，使用的酶主要由胰酶、DNase酶和透明质酸酶等；戊二醛+TritonX-100交联法；以及酶消法与物理刮除相结合的方法。现有方法在制备脱细胞羊膜的时候都无法避免经过化学处理。化学处理一般通过使用碱、酸、洗涤剂、有机溶剂、螯合剂、低渗溶液或高渗溶液来破坏细胞膜和负责细胞间和细胞外连接的化学键，达到脱细胞的目的。虽然化学处理能够去除细胞组分，但是化学处理对剩余细胞外基质的组成、生物活性和生物力学性质也有一些不利影响。因此，一种改进的脱细胞羊膜的制备方法是目前需要的。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种脱细胞羊膜的制备方法，该制备方法操作简单，制备得到的脱细胞羊膜安全性和完整性高。本专利技术的第二目的在于提供一种使用上述脱细胞羊膜的制备方法制备得到的脱细胞羊膜。本专利技术的第三目的在于提供一种上述脱细胞羊膜的制备方法或上述脱细胞羊膜在制备生物材料中的应用。本专利技术的第四目的在于提供一种包含上述脱细胞羊膜的生物材料。为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：本专利技术提供了一种脱细胞羊膜的制备方法所述制备方法包括将羊膜超声处理，然后物理刮除所述羊膜上的细胞，得到脱细胞羊膜。优选地，所述制备方法还包括在超声处理前去除羊膜中的血液。优选地，所述制备方法还包括在超声处理前用水浸泡羊膜；优选地，浸泡时间为6～24h，优选为12～24h；更优选为12h。优选地，所述超声处理包括将羊膜铺展于密封的容器内，然后将所述密封的容器置于超声装置中超声；优选地，所述超声处理的功率为500～800W；优选为550～700W；更优选为600W；优选地，所述超声处理的频率为35～50kHz；优选为35～45kHz；更优选为40kHz；优选地，所述超声处理的时间为1～4h；优选为1.5～3.5h；更优选为2h。优选地，所述物理刮除所述羊膜上的细胞包括使用细胞刮子刮去羊膜表面的细胞。优选地，重复至少一次羊膜超声处理至物理刮除所述羊膜上的细胞的步骤。优选地，该制备方法包括如下步骤：(a)使用生理盐水去除羊膜中的残留血液，然后用水浸泡羊膜；(b)将羊膜铺展在培养皿底部，密封培养皿后置于超声波清洗仪中超声；(c)用细胞刮子刮去残存在羊膜表面的细胞；(d)重复一遍步骤(b)至步骤(c)，然后将制备得到的脱细胞羊膜铺展晾干。本专利技术还提供了上述脱细胞羊膜的制备方法制备得到的脱细胞羊膜。本专利技术还提供了上述脱细胞羊膜的制备方法或上述脱细胞羊膜在制备生物材料中的应用。本专利技术还提供了一种包含上述脱细胞羊膜的生物材料；优选地，所述生物材料包括组织工程中的支架材料。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供的脱细胞羊膜的制备方法包括将羊膜超声处理，然后物理刮除所述羊膜上的细胞，得到脱细胞羊膜。本专利技术提供的脱细胞羊膜的制备方法采用超声处理和物理刮除的方式去除羊膜表面的细胞，避免了胰酶化学试剂的使用，制备得到的脱细胞羊膜产品更安全，降低了羊膜中对机体有害的化学物质的残留，同时最大限度的保留了羊膜基质的完整性。基于上述专利技术构思，本专利技术还提供了一种使用上述脱细胞羊膜的制备方法制备得到的脱细胞羊膜。该脱细胞羊膜安全性高，脱细胞羊膜中对机体有害的化学物质的残留低，羊膜基质的完整性高。本专利技术还提供了上述脱细胞羊膜的制备方法或上述脱细胞羊膜在制备生物材料中的应用。以脱细胞羊膜作为生物材料可以为细胞的增殖、分化提供合适的细胞外基质与丰富的营养成分，有利于细胞的生长、繁殖与分化；以脱细胞羊膜作为生物材料还能够促进细胞上皮化，通过加速上皮化维持正常上皮表型，减轻炎症反应，减轻血管化及瘢痕形成等方式，促进组织伤口愈合，在组织损伤修复与重建中具有广阔的应用前景。基于上述专利技术构思，本专利技术还提供了包含脱细胞羊膜的生物材料。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为未经处理的羊膜；图2为使用实施例1提供的制备方法制备得到的脱细胞羊膜；图3为使用对比例1提供的制备方法制备得到的脱细胞羊膜；图4为HE染色未经处理的羊膜；图5为HE染色使用实施例1提供的制备方法制备得到的脱细胞羊膜；图6为HE染色使用对比例1提供的制备方法制备得到的脱细胞羊膜。具体实施方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脱细胞羊膜的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括将羊膜超声处理，然后物理刮除所述羊膜上的细胞，得到脱细胞羊膜。

【技术特征摘要】
1.一种脱细胞羊膜的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括将羊膜超声处理，然后物理刮除所述羊膜上的细胞，得到脱细胞羊膜。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括在超声处理前去除羊膜中的血液。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括在超声处理前用水浸泡羊膜；优选地，浸泡时间为6～24h，优选为12～24h；更优选为12h。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述超声处理包括将羊膜铺展于密封的容器内，然后将所述密封的容器置于超声装置中超声；优选地，所述超声处理的功率为500～800W；优选为550～700W；更优选为600W；优选地，所述超声处理的频率为35～50kHz；优选为35～45kHz；更优选为40kHz；优选地，所述超声处理的时间为1～4h；优选为1.5～3.5h；更优选为2h。5.根据权利要求1所述的制...

【专利技术属性】
技术研发人员：嵐山芮，魏伟，许超，
申请(专利权)人：广州瑞铂茵健康管理咨询有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44