一种抗感染的小肠粘膜下层生物材料的制备方法技术

本发明专利技术是关于一种抗感染的小肠粘膜下层生物材料的制备方法，包括以下步骤：初处理；脱脂处理；病毒灭活；脱细胞处理；负载抗菌成分；成型；冻干或浸入保存液、包装及灭菌。通过本发明专利技术方法制备的小肠粘膜下层生物材料，脱细胞效果好，对原材料的组织结构损伤小。将脱细胞处理后的SIS材料，放在光镜下观察，可见胶原纤维结构完好，均匀一致，胶原纤维束完整，残留的细胞数量极少，已看不到完整的细胞存在。在扫描电镜下观察，材料胶原纤维呈三维网状立体结构，已看不到细胞，残存的细胞碎片也很少。该SIS负载抗菌成分后，具有明显的抗菌效果，能够更好地满足临床需要。

【技术实现步骤摘要】
一种抗感染的小肠粘膜下层生物材料的制备方法
本专利技术涉及生物医用材料领域，具体地说，涉及一种抗感染的小肠粘膜下层生物材料的制备方法。
技术介绍
小肠粘膜下层(smallintestinalsubmucosa,SIS)生物材料是一种天然细胞外基质(ECM)组织修复材料，在生物体内能引导、支持宿主细胞的生长，最终逐渐完全降解，再生的组织结构得到重塑成形。SIS可以用于神经、膀胱、血管、肌腱、腹壁等组织缺损的修复，以及作为创伤敷料，促进伤口的愈合修复。SIS具有独特的优势，特别是对于感染性的创面，SIS具有其它人工高分子修复材料无法比拟的效果。但是对于严重感染创面，单独依靠SIS的抗感染活性，还是远不够的，有必要和局部抗菌剂联合使用。本专利技术专利就是要制备出一种具有抗感染作用的生物型修复材料。一些金属及其释放的离子具有抑制和杀灭微生物的作用，目前作为抗菌剂被应用较多的是银、铜和锌。银离子作为抗菌剂，具有广谱、高效、安全无毒、无耐受性等优点，能够杀灭细菌、真菌、霉菌和病毒。含银敷料具有较好的抗菌性能，在临床已逐渐推广应用，在治疗下肢静脉曲张性皮肤溃疡、糖尿病足、压疮等复杂性难愈合的创面中取得了良好的效果。铜和锌也具有良好的抗菌作用，含锌或纳米锌的抗菌材料已逐渐被应用于医疗、保健、卫生等多个领域。多项研究表明，金属离子具有协同抗菌作用。张彬等人(铜、锌离子双组分无机抗菌剂研究，《中国稀土学报，2004年全国冶金物理化学学术会议专辑》；抗菌白炭黑的制备及抗菌效果，《化工新型材料》，2004年03期)研究了铜锌离子双组份和铜银离子双组份无机抗菌材料，结果显示：相对于单独离子的抗菌剂，双组份复合离子抗菌剂大大提高了抗菌材料的抗菌性能，同时降低了产品成本。XuanyongLiu及团队研究了银锌共注的抗菌钛合金，证明了该材料具有协同杀菌效果(SynergisticeffectsofdualZn/Agionimplantationinosteogenicactivityandantibacterialabilityoftitanium.Biomaterials.2014Volume35,Issue27)。其它抗菌剂，如磺胺嘧啶银、万古霉素、呋喃西林、莫匹罗星、多黏菌素B、多黏菌素E、有机硅季铵盐、葡萄糖酸氯己定、醋酸氯己定、抗菌肽等，已在临床上广泛应用多年，取得了较好的治疗效果。目前，还未发现将小肠粘膜下层组织材料与上述抗菌剂复合使用的报道。此外，专利CN200910054168.X公开了一种抗感染生物衍生疝和体壁修复材料及制备和应用，其介绍了SIS用作疝和体壁修复材料的制备方法，但是其抗感染组分仅局限于复合的纳米银颗粒，复合方法仅有浸泡一种方式。专利CN201210060672.2公开了一种制备脱细胞生物膜敷料的方法，所述的原料是胸腹膜和小肠粘膜，去除表面脂肪后进行处理。这种较完整的小肠粘膜做敷料是不适宜的，医学上一般使用的是小肠粘膜下层组织，小肠粘膜下层组织是小肠的四层结构中非常薄的一层。另外，该专利复合的抗感染组分来源仅限于硝酸银溶液。
技术实现思路
针对现有技术的不足和临床使用的需要，为了更好地发挥SIS和抗菌剂的临床效果，本专利技术的目的是提供一种抗感染的小肠粘膜下层生物材料的制备方法。通过本方法制备的小肠粘膜下层生物材料，脱细胞效果好，对原材料的组织结构损失小，具有很好的生物相容性、较好的组织修复效果。同时，通过负载多种抗菌成分的方法，使SIS生物材料具有了抗感染的性能，在临床上能够预防伤口感染的发生和治疗污染、感染的伤口。为了达到上述的目的，本专利技术提供了一种抗感染的小肠粘膜下层生物材料的制备方法，包括以下步骤：1)初处理：将猪小肠截取成段，反复用清水冲洗，之后去除粘膜层、肌层和浆膜层，获得小肠粘膜下层组织SIS，再用水冲洗；进一步地，在步骤1)中，所述初处理具体为：取屠宰后5小时内的猪小肠，截取成段，每段长3-30厘米，然后沿中轴切开成片状，反复用清水冲洗，采用机械方法去除粘膜层、肌层和浆膜层，获得粘膜下层组织，再用水冲洗5-10次；2)脱脂：将步骤1)得到的粘膜下层组织进行脱脂，之后，用清水冲洗；进一步地，在步骤2)中，所述脱脂具体为：将步骤1)得到的粘膜下层组织采用脱脂剂进行脱脂处理30-90分钟，脱脂后，用清水冲洗5-10次。进一步地，在步骤2)中，所述混合脱脂剂由质量浓度为1-3％的磷酸三钠溶液和质量浓度为0.1-1.0％的表面活性剂组成；所述磷酸三钠和表面活性剂的质量比为(1-10):1，优选为(3-5):1。进一步地，在步骤2)中，所述表面活性剂选自十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基氨基丙酸钠、TritonX-100和平平加(脂肪醇聚氧乙烯醚)中的一种；所述粘膜下层组织与混合脱脂剂的质量比为1:5-15。进一步地，在步骤2)中，所述混合脱脂剂由质量浓度为1-5％的碳酸氢钠溶液、质量浓度为0.5-3.5％的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.1-1.0％的表面活性剂组成，所述碳酸氢钠、氢氧化钠和表面活性剂的质量比为：(1-10):(1-10):1，优选为(2-5):(5-7):1。3)病毒灭活：将步骤2)脱脂后的粘膜下层组织采用病毒灭活液浸泡，之后，将该粘膜下层组织放入生理盐水中，超声清洗；进一步地，在步骤3)中，所述病毒灭活具体为：将步骤2)脱脂后的粘膜下层组织采用病毒灭活液浸泡1-10小时，病毒灭活后，将该粘膜下层组织放入生理盐水中，超声清洗1-5次。进一步地，在步骤3)中，所述病毒灭活液由质量浓度为0.2-1.0％的磷酸三丁酯溶液和表面活性剂组成，浸泡时间为5-10小时。进一步地，在步骤3)中，所述表面活性剂是质量浓度为1.0-2.0％的吐温80或TritonX-100，或质量浓度为0.1-0.5％的胆酸钠；所述磷酸三丁酯与吐温80或TritonX-100的质量比为1:(1-10)，优选为1:(2-5)；所述磷酸三丁酯与胆酸钠的质量比为(1-5):1，优选为(1-2):1。进一步地，在步骤3)中，所述病毒灭活液由质量浓度为2.0-6.0％的过氧化氢溶液和质量浓度为1.0-5.0％的氯化钠溶液组成，浸泡时间为1-1.5小时；所述过氧化氢与氯化钠的质量比为(0.5-5):1，优选为(0.5-1.5):1。进一步地，在步骤3)中，所述病毒灭活液为3.0-6.0％的氢氧化钠溶液，浸泡时间为1-1.5小时。进一步地，在步骤3)中，所述粘膜下层组织与病毒灭活液的质量比为1:5-15。进一步地，在步骤3)中，所述生理盐水为0.9wt％的氯化钠溶液。4)脱细胞：将步骤3)得到的粘膜下层组织放入脱细胞液中处理，期间将该粘膜下层组织和脱细胞液取出并进行超声处理，然后取出继续脱细胞处理；之后，将该粘膜下层组织放到纯水或生理盐水中清洗；进一步地，在步骤4)中，所述脱细胞具体为：将脱细胞液置于30-40℃的水浴摇床内，放入步骤3)得到的粘膜下层组织处理20-90分钟；10-50分钟后将粘膜下层组织和脱细胞液取出，置于超声波清洗器内，进行超声振荡5-10分钟；然后继续置于水浴摇床内处理；脱细胞后，将该粘膜下层组织放到纯水或生理盐水中，清洗5-10次。进一步地，在步骤4)中，所述脱细胞液为由酶、金属螯合剂、十二烷基硫酸钠和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗感染的小肠粘膜下层生物材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)初处理：将猪小肠截取成段，反复用清水冲洗，之后去除粘膜层、肌层和浆膜层，获得小肠粘膜下层组织，再用水冲洗；2)脱脂：将步骤1)得到的小肠粘膜下层组织进行脱脂，之后，用清水冲洗；3)病毒灭活：将步骤2)脱脂后的小肠粘膜下层组织采用病毒灭活液浸泡，之后，将该小肠粘膜下层组织放入生理盐水中，超声清洗；4)脱细胞：将步骤3)得到的小肠粘膜下层组织放入脱细胞液中处理，期间将该小肠粘膜下层组织和脱细胞液取出并进行超声处理，然后取出继续脱细胞处理；之后，将该小肠粘膜下层组织放到纯水或生理盐水中清洗；5)负载抗菌成分：通过浸泡、喷涂或者涂抹的方式，将抗菌剂负载到步骤4)得到的小肠粘膜下层组织上面；6)成型：将上述步骤5)负载有抗菌成分的小肠粘膜下层组织膜片，根据需要的厚度进行铺层，并通过加压制作所需形状的材料；7)冻干或者放入组织保存液中，然后包装；8)灭菌。

【技术特征摘要】
1.一种抗感染的小肠粘膜下层生物材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)初处理：将猪小肠截取成段，反复用清水冲洗，之后去除粘膜层、肌层和浆膜层，获得小肠粘膜下层组织，再用水冲洗；2)脱脂：将步骤1)得到的小肠粘膜下层组织进行脱脂，之后，用清水冲洗；3)病毒灭活：将步骤2)脱脂后的小肠粘膜下层组织采用病毒灭活液浸泡，之后，将该小肠粘膜下层组织放入生理盐水中，超声清洗；4)脱细胞：将步骤3)得到的小肠粘膜下层组织放入脱细胞液中处理，期间将该小肠粘膜下层组织和脱细胞液取出并进行超声处理，然后取出继续脱细胞处理；之后，将该小肠粘膜下层组织放到纯水或生理盐水中清洗；5)负载抗菌成分：通过浸泡、喷涂或者涂抹的方式，将抗菌剂负载到步骤4)得到的小肠粘膜下层组织上面；6)成型：将上述步骤5)负载有抗菌成分的小肠粘膜下层组织膜片，根据需要的厚度进行铺层，并通过加压制作所需形状的材料；7)冻干或者放入组织保存液中，然后包装；8)灭菌。2.如权利要求1所述的抗感染的小肠粘膜下层生物材料的制备方法，其特征在于，在步骤1)中，所述初处理具体为：取屠宰后5小时内的猪小肠，截取成段，每段长3-30厘米，然后沿中轴切开成片状，反复用清水冲洗，采用机械方法去除粘膜层、肌层和浆膜层，获得小肠粘膜下层组织，再用水冲洗5-10次；在步骤2)中，所述脱脂具体为：将步骤1)得到的小肠粘膜下层组织采用脱脂剂进行脱脂处理30-90分钟，脱脂后，用清水冲洗5-10次；所述小肠粘膜下层组织与混合脱脂剂的质量比为1:5-15。3.如权利要求2所述的抗感染的小肠粘膜下层生物材料的制备方法，其特征在于，在步骤2)中，所述混合脱脂剂由质量浓度为1-3％的磷酸三钠溶液和质量浓度为0.1-1.0％的表面活性剂组成；所述磷酸三钠和表面活性剂的质量比为(1-10):1；所述表面活性剂选自十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基氨基丙酸钠、TritonX-100和脂肪醇聚氧乙烯醚中的一种；或者，所述混合脱脂剂由质量浓度为1-5％的碳酸氢钠溶液、质量浓度为0.5-3.5％的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.1-1.0％的表面活性剂组成，所述碳酸氢钠、氢氧化钠和表面活性剂的质量比为：(1-10):(1-10):1。4.如权利要求1所述的抗感染的小肠粘膜下层生物材料的制备方法，其特征在于，在步骤3)中，所述病毒灭活具体为：将步骤2)脱脂后的小肠粘膜下层组织采用病毒灭活液浸泡1-10小时，病毒灭活后，将该小肠粘膜下层组织放入生理盐水中，超声清洗1-5次；所述小肠粘膜下层组织与病毒灭活液的质量比为1:5-15；所述生理盐水为0.9wt％的氯化钠溶液。5.如权利要求4所述的抗感染的小肠粘膜下层生物材料的制备方法，其特征在于，在步骤3)中，所述病毒灭活液由质量浓度为0.2-1.0％的磷酸三丁酯溶液和表面活性剂组成，浸泡时间为5-10小时；所述表面活性剂是质量浓度为1.0-2.0％的吐温80或TritonX-100，或质量浓度为0.1-0.5％的胆酸钠；所述磷酸三丁酯与吐温80或TritonX-100的质量比为1:(1-10)；所述磷酸三丁酯与胆酸钠的质量比为(1-5):1；或者，所述病毒灭活液由质量浓度为2.0-6.0％的过氧化氢溶液和质量浓度为1.0-5.0％的氯化钠溶液组成，浸泡时间为1-1.5小时；所述过氧化氢与氯化钠的质量比为(0.5-5):1；或者，所述病毒灭活液为3.0-6.0％的氢氧化钠溶液，浸泡时间为1-1.5小时。6.如权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈德夫，
申请(专利权)人：陈德夫，
类型：发明
国别省市：北京,11