一种脐带标本的保存方法技术

本发明专利技术公开了一种脐带标本的保存方法。本发明专利技术首次提出了硝酸甘油在脐带标本保存中的应用。本发明专利技术的脐带标本保存方法可以实现在常温下保存，大大降低了对库存、运输、交接条件的要求，可节约成本；同时能有效抑制细菌污染，维持脐带中间充质干细胞的生物活性，可为临床和基础研究提供高质量的生物资源。

【技术实现步骤摘要】
一种脐带标本的保存方法
本专利技术属于生物标本采集和保存
，具体涉及一种脐带标本的保存方法。
技术介绍
脐带为分娩废弃组织，其间充质干细胞含量丰富，无需创伤性穿刺，较骨髓来源间充质干细胞扩增能力更强，成为近来间充质干细胞研究的重要来源之一。但是，在日常脐带干细胞库的工作中由于分娩方式、医护人员采集方法不当容易导致脐带标本细菌污染，造成珍贵资源的浪费。为了避免污染,采集液中需要加入青霉素和链霉素双抗。但是，双抗对温度较为敏感，需-20℃冷冻保存，短期保存也要放进冷藏层，操作起来不方便，很容易成分降解，影响抑菌效果。因此，亟需研究出一种简便、有效的脐带标本采集和保存方法。硝酸甘油(C3H5N3O9，三硝酸甘油酯)是一种无色或黄色的油状透明液体，其化学式结构式为主要是用来治疗和预防心绞痛，是作为血管扩张药物，也可以用来治疗充血性的心力衰竭。
技术实现思路
为了克服现有技术的缺点与不足，本专利技术的首要目的在于提供硝酸甘油在脐带标本保存中的应用。本专利技术的另一目的在于提供一种脐带标本的保存方法。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：硝酸甘油在脐带标本保存中的应用。一种脐带标本的保存方法，胎儿娩出后，采集脐带，酒精消毒，洗净，放入装有硝酸甘油和生理盐水混合液的容器中，密封，置于2～15℃下保存至运达指定目的地为止。所述的采集脐带的时间优选为胎儿娩出后30秒内。所述的硝酸甘油与生理盐水的配比优选为体积比0.2～2：100；更优选为1：100。所述的生理盐水是指医用氯化钠注射液，即0.9％的氯化钠水溶液。所述的酒精消毒的时间优选为0.5～2分钟；更优先为1分钟。所述的洗净所用的试剂优选为生理盐水。所述的保存的时间优选小于24小时；更优选为小于19小时。本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：本专利技术首次提出了硝酸甘油在脐带标本保存中的应用。本专利技术的脐带标本保存方法可以实现在常温下保存，大大降低了对库存、运输、交接条件的要求，可节约成本；同时能有效抑制细菌污染，维持脐带中间充质干细胞的生物活性，可为临床和基础研究提供高质量的生物资源。附图说明图1为传代后培养第2天细胞状态示意图。图2为流式细胞仪检测结果图。具体实施方式下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。本专利技术中所使用的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所使用的原料、助剂等，如无特殊说明，均为可从常规市场购买等商业途径得到的原料、助剂。实施例1脐带标本采集液的制备(1)取1ml硝酸甘油，加入100ml生理盐水(医用氯化钠注射液，0.9％的氯化钠水溶液)，混匀，即得到硝酸甘油浓度为1％(V/V)的脐带采集液。(2)取0.5ml硝酸甘油，加入100ml生理盐水，混匀，即得到硝酸甘油浓度为0.5％(V/V)的脐带采集液。(3)取2ml硝酸甘油，加入100ml生理盐水，混匀，即得到硝酸甘油浓度为2％(V/V)的脐带采集液。实施例2抑菌实验一、白色念珠菌：(1)取白色念珠菌(ATCC10231，购于Microbiologics公司KWIK-STIK系类)，根据其说明书将菌种接种到沙门氏葡萄糖琼脂培养板上，25℃环境下培养5天，将白色念珠菌挑选出来，接种到斜面培养物上，进行增菌培养。将试验菌24h斜面培养物用PBS洗下，制成菌悬液(要求的浓度为：用100μl滴于5ml样液内，回收菌数为6.5×104cfu/ml)；取被试样液(实施例1得到的硝酸甘油浓度为1％的脐带采集液)5ml和对照样液(PBS)5ml各四管。(2)取上述菌悬液，分别在每个被试样液和对照样液内滴加100μl，均匀混合，开始计时，作用2min、5min、10min、20min，分别吸取样液0.5ml投入含5mlPBS的试管内，充分混匀，作适当稀释，然后取其中2个～3个稀释度，分别吸取0.5ml，置于2个平皿，用凉至40℃～45℃的沙门氏葡萄糖琼脂培养基15ml作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板。(3)所有试验样本和对照样本均在35℃±2℃培养48h，观察最终结果。试验重复三次，按照如下公式计算抑菌率，结果如下表1所示：抑菌率X＝(A0-A1)/A0×100％；A0表示对照组的平均菌落数，单位为cfu/ml；A1表示实验组平均菌落数，单位为cfu/ml；表1白色念珠菌抑菌试验二、大肠杆菌：(1)取大肠杆菌(ATCC8099，购于Microbiologics公司KWIK-STIK系类)，根据其说明书将菌种接种到胰蛋白胨大豆琼脂培养板上，35℃环境下培养48h，将大肠杆菌挑选出来，接种到斜面培养物上，进行增菌培养。将试验菌24h斜面培养物用PBS洗下，制成菌悬液(要求的浓度为：用100μl滴于5ml样液内，回收菌数为6.5×104cfu/ml)；取被试样液(实施例1得到的硝酸甘油浓度为1％的脐带采集液)5ml和对照样液(PBS)5ml各四管。(2)取上述菌悬液，分别在每个被试样液和对照样液内滴加100μl，均匀混合，开始计时，作用2min、5min、10min、20min，分别吸取样液0.5ml投入含5mlPBS的试管内，充分混匀，作适当稀释，然后取其中2个～3个稀释度，分别吸取0.5ml，置于2个平皿，用凉至40℃～45℃的营养琼脂培养基15ml作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板。(3)所有试验样本和对照样本均在35℃±2℃培养48h，观察最终结果。试验重复三次，按照如下公式计算抑菌率，结果如下表1所示：抑菌率X＝(A0-A1)/A0×100％；A0表示对照组的平均菌落数，单位为cfu/ml；A1表示实验组平均菌落数，单位为cfu/ml；表2大肠杆菌抑菌试验三、金黄色葡萄球菌：(1)取金黄色葡萄球菌(ATCC6538，购于Microbiologics公司KWIK-STIK系类)，根据其说明书将菌种接种到胰蛋白胨大豆琼脂培养板上，25℃环境下培养5天，将白色念珠菌挑选出来，接种到斜面培养物上，进行增菌培养。将试验菌24h斜面培养物用PBS洗下，制成菌悬液(要求的浓度为：用100μl滴于5ml样液内，回收菌数为6.5×104cfu/ml)；取被试样液(5ml)和对照样液(5ml)各四管。(2)取上述菌悬液，分别在每个被试样液和对照样液内滴加100μl，均匀混合，开始计时，作用2min、5min、10min、20min，分别吸取样液0.5ml投入含5mlPBS的试管内，充分混匀，作适当稀释，然后取其中2个～3个稀释度，分别吸取0.5ml，置于2个平皿，用凉至40℃～45℃的营养琼脂培养基15ml作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板。(3)所有试验样本和对照本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.硝酸甘油在脐带标本保存中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.硝酸甘油在脐带标本保存中的应用。


2.一种脐带标本的保存方法，其特征在于：胎儿娩出后，采集脐带，酒精消毒，洗净，放入装有硝酸甘油和生理盐水混合液的容器中，密封，置于2～15℃下保存至运达指定目的地为止。


3.根据权利要求2所述的脐带标本的保存方法，其特征在于：
所述的硝酸甘油与生理盐水的配比为体积比0.2～2：100。


4.根据权利要求2所述的脐带标本的保存方法，其特征在于：
所述的硝酸甘油与生理盐水的配比为体积比为1：100。


5.根据权利要求2所述的脐带标本的保存方法，其特征在于：
所述的生理盐水是指0.9％...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏伟，嵐山芮，许超，
申请(专利权)人：广州瑞铂茵健康管理咨询有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44