一种MRFFT1细胞的构建方法技术

本发明专利技术涉及一种MRFFT1细胞的构建方法，通过抗原表位预测筛选出突变多肽，连接并合成突变多肽表达基因序列；同时构建MVA病毒载体，包装MVA病毒，转染APC细胞，完成特异性MV细胞的改造，体外与从外周血中分离的PBMC共培养，筛选出有效多肽，通过精准有效多肽刺激的第二次冲击，将普通T细胞改造成为具有更精准杀伤能力的RFF细胞，再利用TCR－T技术原理进行了改造，改造后的T细胞再用基因编缉技术对其进行免疫抑制靶点的敲除，精准的保护了特异性杀伤T细胞免受体内抑制，提高了T细胞对肿瘤细胞的杀伤力。

Construction of MRFFT1 cells

The present invention relates to a construction method of MRFFT1 cells, which can screen mutant polypeptide through epitope prediction, connect and synthesize gene sequence of mutant polypeptide expression; at the same time, construct MVA virus vector, package MVA virus, transfect APC cells, complete the transformation of specific MV cells, co-culture in vitro with PBMC isolated from peripheral blood, screen effective polypeptide, and spine through precise effective polypeptide. In the second shock, the normal T cells were transformed into RFF cells with more precise killing ability, and then the modified T cells were modified by TCR-T technology. The modified T cells were knocked out by gene coding technology, which precisely protected the specific killing T cells from inhibition in vivo and enhanced the killing ability of T cells to cancer cells.

【技术实现步骤摘要】
一种MRFFT1细胞的构建方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种MRFFT1细胞的构建方法。
技术介绍
目前，在肿瘤的特异性免疫治疗方面，现有的LAK、DC、CIK、DC-CIK细胞和方法基本被证明是无效的，而NK、CAR-NK、TIL等细胞技术还有待成熟，CAR－T细胞在安全性和实体瘤治疗中还有缺陷。现有技术一般通过改造DC细胞，由DC递呈T细胞产生特异杀伤。有些实验室在尝试用病毒做为载体的方法进行转染递呈T细胞，诱导T细胞的特异性杀伤。我们也曾用突变混合多肽直接刺激PBMC，诱导T细胞。还有实验室利用TCR-T技术，靶向递呈MAGEA3抗原。以上治疗方法并不成熟，尤其是体外诱导DC细胞及DC细胞负载肿瘤抗原技术理论上研究较多，但在具体实施过程中还有许多问题，缺乏明确的、肿瘤细胞发生发展关键的信号传导通路相关分子作为诱导抗原，因为肿瘤抗原不明及肿瘤微环境免疫抑制的障碍，使实现特异性细胞靶向免疫治疗难以顺利实施。另外，有的虽然进行了抗原体外冲击，但没有进行体外共培育和体外扩增，让较为单薄的特异性细胞直接面对复杂的肿瘤免疫微环境，因此，很难起到预期的效果。也有的虽然也可以体外递本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种MRFFT1细胞的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：1)使用人源外周血进行ctDNA测序或肿瘤组织进行全外显子测序，筛选出突变位点；2)根据突变位点进行抗原表位预测，合成突变多肽的基因序列；3)构建表达突变多肽的MVA病毒载体，包装MVA病毒；4)转染抗原递呈细胞并与PBMC共培养，获得MFF细胞；4)所述突变多肽作为抗原刺激所述MFF细胞，筛选出有效的精准多肽；5)以所述精准多肽作为抗原刺激所述MFF细胞，筛选出能够识别所述精准多肽的特异性细胞，测序并得到特异性细胞的高频TCR基因；6)敲除外周血T细胞中原有的TCR基因，转入上步获得的能够与精准多肽特异性结合的TCR基...

【技术特征摘要】
1.一种MRFFT1细胞的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：1)使用人源外周血进行ctDNA测序或肿瘤组织进行全外显子测序，筛选出突变位点；2)根据突变位点进行抗原表位预测，合成突变多肽的基因序列；3)构建表达突变多肽的MVA病毒载体，包装MVA病毒；4)转染抗原递呈细胞并与PBMC共培养，获得MFF细胞；4)所述突变多肽作为抗原刺激所述MFF细胞，筛选出有效的精准多肽；5)以所述精准多肽作为抗原刺激所述MFF细胞，筛选出能够识别所述精准多肽的特异性细胞，测序并得到特异性细胞的高频TCR基因；6)敲除外周血T细胞中原有的TCR基因，转入上步获得的能够与精准多肽特异性结合的TCR基因，获得TCR-T细胞；7)敲除细胞表面免疫抑制性信号分子，即得MRFFT1细胞。2.如权利要求1所述的MRFFT1细胞的构建方法，其特征在于，所述人源外周血也可以是市售工程细...

【专利技术属性】
技术研发人员：焦顺昌，张嵘，周子珊，宋玉洁，解佳森，张天赋，王海燕，袁翰，
申请(专利权)人：北京鼎成肽源生物技术有限公司，焦顺昌，
类型：发明
国别省市：北京,11