基于芯片技术的快速高通量磷酸化抗体特异性验证方法技术

本发明专利技术涉及基于芯片检测技术的快速高通量抗体特异性检测领域，公开了一种基于芯片技术的快速高通量磷酸化抗体特异性验证方法，包括以下具体步骤：收集待检测样本后提取待检测样本中的蛋白形成样本蛋白提取液，定量并确定样本蛋白提取液中的蛋白浓度；提取样本蛋白提取液中的至少一部分并使用碱性磷酸酶进行处理；将处理后的样本蛋白提取液和未经处理的样本蛋白提取液分别进行稀释后制备到检测芯片上：封闭检测芯片并在处理后的样本蛋白提取液和未经处理的样本蛋白提取液中分别加入待测抗体后进行检测并得到结果。本发明专利技术的优点在于，解决了对于高通量，大量样本的抗体特异性的快速检测，在提高了检测速度的基础上，相比传统的检测方法具有更好的检测精度，具有较高的应用价值。

Fast and high-throughput phosphorylated antibody specificity verification method based on chip technology

The invention relates to the field of rapid high-throughput antibody specificity detection based on chip detection technology, and discloses a fast high-throughput phosphorylated antibody specificity verification method based on chip technology, including the following specific steps: collecting samples to be tested, extracting proteins from samples to be tested, forming sample protein extract, quantifying and determining protein concentration in sample protein extract; At least part of the sample protein extract was extracted and treated with alkaline phosphatase; the treated sample protein extract and the untreated sample protein extract were diluted and prepared on the detection chip respectively; the chip was sealed and detected after adding the antibodies to the treated sample protein extract and untreated sample protein extract respectively. And the results are obtained. The advantages of the present invention are that it solves the problem of rapid detection of antibody specificity for high throughput and large samples, improves the detection speed, has better detection accuracy than traditional detection methods, and has higher application value.

【技术实现步骤摘要】
基于芯片技术的快速高通量磷酸化抗体特异性验证方法
本专利技术涉及基于芯片检测技术的快速高通量抗体特异性检测领域，特别涉及一种基于芯片技术的快速高通量磷酸化抗体特异性验证方法。
技术介绍
磷酸化抗体验证及其应用。蛋白质磷酸化过程是由细胞内的激酶家族所执行的。蛋白磷酸化/去磷酸化反应在细胞行使功能方面发挥着及其重要的作用。也是细胞信号传导方面的最为关键步骤，控制着蛋白质分子水平上各个层级功能执行，细胞周期的调控，转绿因子的活化，组蛋白修饰调控，核受体穿模运用，生长因子受体的活化，各种正负反馈机制大都依赖磷酸化水平的调控。磷酸化反应为可逆反应，而细胞信号分子及转录因子的丰度本身在细胞内极低，其磷酸化水平更加难以准确捕捉分析。在抗体验证及分析方法上一般采用传统的蛋白免疫印迹法，此方法样本消耗量大(一般在10-20微克/样本)，操作过程繁琐，通量低，定量效果较差，有时需要各种细胞学水平实验设计来确定某一磷酸化抗体的特异性。基于质谱法的磷酸化抗体验证需大量的前期实验设计，并需要进行磷酸化肽段富集，操作繁琐，样本通量低，成本高，不易于快速大规模实验来筛选抗体。且两种方法都很难适用于临床组织样本来源本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于芯片技术的快速高通量磷酸化抗体特异性验证方法，其特征在于，包括以下具体步骤：收集待检测样本后提取待检测样本中的蛋白形成样本蛋白提取液，定量并确定样本蛋白提取液中的蛋白浓度；提取样本蛋白提取液中的至少一部分并使用碱性磷酸酶进行处理；将处理后的样本蛋白提取液和未经处理的样本蛋白提取液分别进行稀释后制备到检测芯片上：封闭检测芯片并在处理后的样本蛋白提取液和未经处理的样本蛋白提取液中分别加入待测抗体后进行检测并得到结果。

【技术特征摘要】
1.一种基于芯片技术的快速高通量磷酸化抗体特异性验证方法，其特征在于，包括以下具体步骤：收集待检测样本后提取待检测样本中的蛋白形成样本蛋白提取液，定量并确定样本蛋白提取液中的蛋白浓度；提取样本蛋白提取液中的至少一部分并使用碱性磷酸酶进行处理；将处理后的样本蛋白提取液和未经处理的样本蛋白提取液分别进行稀释后制备到检测芯片上：封闭检测芯片并在处理后的样本蛋白提取液和未经处理的样本蛋白提取液中分别加入待测抗体后进行检测并得到结果。2.根据权利要求1所述的基于芯片技术的快速高通量磷酸化抗体特异性验证方法，其特征在于，所述的检测至少应当包括以下的一项或者多项量化指标：点阵形态质量、信噪比、线性度、碱性磷酸酶处理效果、芯片内参质量以及点阵的粒性。3.根据权利要求1所述的基于芯片技术的快速高通量磷酸化抗体特异性验证方法，其特征在于，所述提取检测样本中蛋白的过程还包括对提取蛋白进行富集后进行定量。4.根据权利要求2所述的基于芯片技术的快速高通量磷酸化抗体特异性验证方法，其特征在于，还包括以下步骤：使用确定数量的量化非连续变量对所述一项或者多项量化指标进行赋值后对检测结果进行分类，并将结果和待检测样本检测结果进行比对，所述量化非连续变量来自于现有的细胞样本和组织样本的蛋白质。5.根据权利要求4...

【专利技术属性】
技术研发人员：王楠，
申请(专利权)人：杭州埃锐晶生物医学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33