一种筛选促血管生成的间充质干细胞的方法技术

本发明专利技术提供一种以GREM1为标志物应用于筛选具有促进血管生成能力的间充质干细胞，本发明专利技术通过筛选GREM1浓度在5.37μg/ml以上的间充质干细胞，筛选出具有促进血管生成能力较强的间充质干细胞。本发明专利技术通过在氧浓度为1‑5％条件下和/或细胞倍增时间在25h以下的培养筛选手段，提高间充质干细胞对GREM1的表达，从而得到性能优良的促进血管生成的间充质干细胞，本发明专利技术提供的方法操作简单，成本低，不需要耗费细胞，减少浪费细胞成本，精准度高，省时省力，实践性强。

【技术实现步骤摘要】
一种筛选促血管生成的间充质干细胞的方法
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种筛选促血管生成的间充质干细胞的方法。
技术介绍
心脑血管的相关缺血性疾病如今已成为临床上一类严重危害健康，降低患者生活质量，致死、致残率高的疾病，主要包括心肌梗塞、脑卒中、肢体性周围血管疾病等。它们共同的发生机理是病理或外力损伤导致动脉或静脉的血流急剧降低或中断阻塞，远端动脉血运和氧供差，使相应的组织或器官出现严重的持久性缺血缺氧损伤，导致组织或器官的功能丧失、发生坏死甚至危及生命。如《中国心血管病报告2016》报道，我国每年患心血管疾病的人已经上升约至2.9亿人，而且城市地区心血管病死亡率为264.84/10万人，其中心脏病死亡率为136.61/10万人、脑血管病死亡率为128.23/10万人，其中脑梗死、颅内出血、急性心肌梗死等心血管疾病的发病率不断上升。除此之外，自从2013年国际糖尿病联盟(IDF)公布的我国成为世界糖尿病第一大国以来，我国糖尿病患者因下肢血管闭塞、溃疡坏死常导致大非创伤性截肢的已占50％-60％，而且截肢后总死亡率依旧高达25％-50％。由此可见，血管性相关疾病已成为我国重大的公本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.GREM1在筛选具有促进血管生成的间充质干细胞中的应用。

【技术特征摘要】
1.GREM1在筛选具有促进血管生成的间充质干细胞中的应用。2.一种筛选具有促进血管生成的间充质干细胞的方法，其特征在于，所述方法包括：检测间充质干细胞中GREM1的浓度，筛选GREM1浓度在5.37μg/ml以上的间充质干细胞，得到具有促进血管生成能力的间充质干细胞。3.根据权利要求2所述的筛选具有促进血管生成的间充质干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)培养间充质干细胞，然后处理间充质干细胞，得到间充质干细胞的待检测样品；(2)利用吸光度法测定步骤(1)中处理过的间充质干细胞的待检测样品的中GREM1的浓度，筛选GREM1浓度在5.37μg/ml以上的间充质干细胞。4.根据权利要求3所述的筛选具有促进血管生成的间充质干细胞的方法，其特征在于，步骤(1)的具体步骤为：①培养间充质干细胞，当间充质干细胞长满细胞培养瓶50％～60％时，分别弃掉培养基，更换成无血清的基础培养基继续培养细胞48h，然后收上清液，离心，收上清液，弃沉淀；最后将上清液样品冻存于-80度备用；②分别采用包被好的GREM1ELISA试剂盒，加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔；在酶包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl，轻轻晃动混匀；③温育：用封板膜封板后37℃温育30分钟；④配液：将n倍浓缩洗液用蒸馏水n倍稀释后备用，n为任意正数；⑤洗涤：揭掉封板摸，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30s后弃去，如此重复数次，拍干；⑥加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外；⑦显色：每孔加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟；⑧终止：每孔加终止液50μl...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏志璋，黃馨萍，
申请(专利权)人：深圳市浊安认证生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44