一种筛选促骨细胞生成的间充质干细胞的方法技术

本发明专利技术提供一种将GREM1作为标志物应用于检测间充质干细胞的生成骨细胞的能力，本发明专利技术的方法不依赖病毒转染这种基因工程技术，借助细胞倍增时间这种量化指标，结合低氧培养这种经济、适用的手段即可精准筛选出可促进骨细胞生成的高表达GREM1的间充质干细胞，通过检测间充质干细胞上清液中GREM1的含量，当GREM1的含量在5.37μg/ml以上，得到的间充质干细胞具有良好的分化成为骨细胞的能力，具有治疗骨损伤和促进骨修复能力，本发明专利技术提供的方法不仅操作简单，省时省力，还降低检测费用的经济成本，实践性强。

【技术实现步骤摘要】
一种筛选促骨细胞生成的间充质干细胞的方法
本专利技术属于生物制药领域，具体涉及一种筛选促骨细胞生成的间充质干细胞的方法。
技术介绍
间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)作为细胞治疗的理想种子细胞，经过长期体外和动物疾病模型治疗的研究，已经被广泛地应用于临床上损伤、衰老等病变引起的各种组织器官损伤修复，主要包括骨重建和再生、神经退行性病变和损伤、心肌损伤、肝硬化、糖尿病、肺部疾病等。其中，间充质干细胞在骨科相关疾病运用最早，如骨关节炎、股骨头坏死、脊髓损伤、成骨发育不全和低磷酸酯酶症等，它相应的临床安全性和有效性已经得到了初步的验证，但治疗效果还是有一定的差异性。客观分析原因发现间充质干细胞在骨科治疗中依旧存在许多问题，如：(一)细胞制剂方面：①不同来源、不同状态的间充质干细胞数量和质量具有异质性；②大多数机构都采用单纯的贴壁法分离培养MSCs，细胞的纯度和干性不能保证；③如何保证注射后的MSCs具有一定的生物安全性。(二)临床疾病方面：①不同骨科疾病种类复杂多样，如何制定合理的个体化治疗方案，包括制定MSCs注射方式、剂量、次数、时间窗等；②如何调控MS本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.GREM1在筛选具有促骨生成的间充质干细胞中的应用。

【技术特征摘要】
1.GREM1在筛选具有促骨生成的间充质干细胞中的应用。2.一种筛选具有促骨生成的间充质干细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：检测间充质干细胞中GREM1的浓度，筛选GREM1浓度在5.37μg/ml以上的间充质干细胞，得到具有促骨生成能力的间充质干细胞。3.根据权利要求2所述的筛选具有促骨生成的间充质干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)培养间充质干细胞，然后处理间充质干细胞，得到间充质干细胞的待检测样品；(2)利用吸光度法测定步骤(1)中处理过的间充质干细胞的待检测样品的中GREM1的浓度，筛选GREM1浓度在5.37μg/ml以上的间充质干细胞。4.根据权利要求3所述的筛选具有促骨生成的间充质干细胞的方法，其特征在于，步骤(1)的具体步骤为：①培养间充质干细胞，当间充质干细胞长满细胞培养瓶50％～60％时，分别弃掉培养基，按照实验体系更换成无血清的基础培养基继续培养细胞48h，然后收上清液，离心，收上清液，弃沉淀；最后将上清液样品冻存于-80度备用；②分别采用包被好的GREM1ELISA试剂盒，加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔；在酶包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl，轻轻晃动混匀；③温育：用封板膜封板后37℃温育30分钟；④配液：将n倍浓缩洗液用蒸馏水n倍稀释后备用，n为任意正数；⑤洗涤：揭掉封板摸，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30s后弃去，如此重复数次，拍干；⑥加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外；⑦显色：每孔加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟；⑧终止：每孔加终止...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏志璋，黃馨萍，
申请(专利权)人：深圳市浊安认证生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44