【技术实现步骤摘要】
一种用于筛选特异性抗体可变区的方法
本专利技术属于基因工程抗体研发领域，涉及一种用于筛选特异性抗体可变区的方法。
技术介绍
该技术特点是利用细菌细胞间质膜脂蛋白的信号肽NlpAleader将抗体可变区基因文库运送到细菌间质腔，而NlpAleader在跨膜运输过程中被逐步降解，剩下的6个氨基酸(CDQSSS)与细胞内膜外侧的磷脂层形成脂苷键，从而将与其融合的抗体片段展示于细菌内膜外侧。当细菌外膜被溶菌酶消化后成原生质球，孵育液中的标记抗原可进入细菌间质与锚定在细胞内膜外侧的抗体片段结合，然后将其与荧光标记的抗体进行共孵育，与抗原结合的特异性抗体基因可被流式细胞仪检测分离。抗原也可以和抗体可变区文库通过共表达的方式在细菌间质结合，通过识别抗原的方法筛选特异性抗体可变区。具体方法可用pelBleader引导与其融合的抗原进入细菌间质，游离的抗原在间质腔中和锚定在细菌内膜的抗体可变区片段结合，利用抗原标签识别为点，如Flag，再用标记的抗Flag抗体标记，然后用流式细胞仪筛选。上述方法又很多优点，如：(l)实时筛选阳性抗体可变区克隆，应用流式细胞术(FCM)进行筛选可以真...
【技术保护点】
1.一种获得特异于靶标抗原的目标单链抗体的编码基因的方法，包括如下步骤：A)按照包括如下步骤的方法构建由不同待检测单链抗体编码基因组成的基因编码库：(a1)根据已知的抗体框架区序列，设计并合成用于扩增抗体重链可变区的简并引物对1，以及用于扩增抗体轻链可变区的简并引物对2；所述已知的抗体框架区序列为源自于携带所述靶标抗原的微生物的宿主的抗体框架区序列；(a2)采用所述简并引物1和所述简并引物对2从初始样本中分别扩增得到抗体重链可变区集合和抗体轻链可变区集合；所述初始样本中含有由不同种抗所述靶标抗原的抗体组成的抗体库；所述抗体重链可变区集合为由不同重链可变区组成的集合；所述轻链...
【技术特征摘要】
1.一种获得特异于靶标抗原的目标单链抗体的编码基因的方法，包括如下步骤：A)按照包括如下步骤的方法构建由不同待检测单链抗体编码基因组成的基因编码库：(a1)根据已知的抗体框架区序列，设计并合成用于扩增抗体重链可变区的简并引物对1，以及用于扩增抗体轻链可变区的简并引物对2；所述已知的抗体框架区序列为源自于携带所述靶标抗原的微生物的宿主的抗体框架区序列；(a2)采用所述简并引物1和所述简并引物对2从初始样本中分别扩增得到抗体重链可变区集合和抗体轻链可变区集合；所述初始样本中含有由不同种抗所述靶标抗原的抗体组成的抗体库；所述抗体重链可变区集合为由不同重链可变区组成的集合；所述轻链可变区集合为由不同轻链可变区组成的集合；(a3)将所述抗体重链可变区集合中的不同重链可变区和所述抗体轻链可变区集合中的不同轻链可变区通过重链恒定区CH1进行随机连接，获得由不同待检测单链抗体编码基因组成的基因编码库；所述重链恒定区CH1为源自于携带所述靶标抗原的微生物的宿主的重链恒定区CH1的前15个氨基酸；B)按照包括如下步骤的方法获得特异于所述靶标抗原的所述目标单链抗体的基因编码序列：(b1)将所述基因编码库中的各待检测单链抗体编码基因分别与靶标抗原-标签蛋白融合基因共同构建于同一表达载体，并使所述待检测单链抗体编码基因融合于信号肽1的编码基因的下游，使所述靶标抗原-标签蛋白融合基因融合于信号肽2的编码基因的下游，获得重组表达载体库；所述重组表达载体库中各载体上均含有所述靶标抗原-标签蛋白融合基因和任一种所述待检测单链抗体编码基因；所述靶标抗原-标签蛋白融合基因为由所述靶标抗原的编码基因和所述标签蛋白的编码基因融合而成的融合基因；所述信号肽1为具有如下功能的信号肽：将与其融合的目的蛋白展示于细菌内膜外侧；所述信号肽2为具有如下功能的信号肽：将与其融合的目的蛋白运送到细菌间质腔后自身完全降解，所述目的蛋白游离于所述细菌间质腔内；所述表达载体为pBGD载体；所述pBGD载体的序列如序列表中序列1所示；(b2)将所述重组表达载体库中的各重组表达载体转入宿主细菌，得到重组细菌库；所述重组细菌库中各重组细菌中均含有任一种所述重组表达载体；(b3)培养所述重组细菌库，诱导所述重组表达载体进行表达，由所述待检测单链抗体编码基因编码所得的待检测单链抗体被展示于所述细菌内膜外侧，由所述靶标抗原-标签蛋白融合基因编码所得的...
【专利技术属性】
技术研发人员：李德山，任桂萍，白银，郭笑辰，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23
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