本发明专利技术提供一种预测肺癌预后的生物标记物长链非编码RNA LINC01504及试剂盒，用于预测肺癌患者预后生存期。预测肺癌预后的制剂为实时荧光定量PCR检测试剂盒，试剂盒包含用于检测目的基因LINC01504表达的特异性引物和内参基因TUBA1A表达的特异性引物，还包含实时荧光定量SYBR染料、无RNA酶的水。本发明专利技术通过荧光定量PCR与生存曲线分析发现肺癌组织来源的LINC01504与患者的生存率相关，含量越高，生存率越高。此法为预测肺癌患者的预后生存期分析提供了强有力的技术支持，有助于提高肺癌患者的术后生活质量，制订术后治疗方案，提高生存率，具有深远的临床意义。
【技术实现步骤摘要】
预测肺癌预后的生物标记物长链非编码RNALINC01504及试剂盒
本专利技术属于生物医药
，具体涉及预测肺癌预后的生物标记物长链非编码RNALINC01504及试剂盒。
技术介绍
肺癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一。目前随着我国人民生活方式的转变、空气污染的加重，肺癌发病率和死亡率也迅速增加，目前肺癌已经成为我国发病率最高的恶性肿瘤，也是我国导致癌症相关死亡的首要原因。2015年我国国家癌症中心的统计数据显示，2012年全国城市恶性肿瘤发病第一位是肺癌，每年新发约38万人，死亡约31万人，其中男性肺癌发病率及死亡率均居所有恶性肿瘤之首；女性肺癌发病率居第二位，但死亡率居第一位。在农村地区男女肺癌发病及死亡率均居所有恶性肿瘤首位，每年新发病例约33万，死亡约26万人。目前，临床上还没有理想的分子指标来评估预后及发生转移的风险。因此，寻找新的预后生物标志物是目前急需解决的问题。近些年来，二代测序技术的发展极大地促进了生物学的进步。在人类基因组计划后，大量物种的基因组被测序。对这些基因组的注释，是研究人员非常关心的问题。中心法则的提出大大推动了现代分子生物学的发展，RNA作为DNA与蛋白质之间遗传信息传递的桥梁，一直受到科学家的高度关注。随着科学的发展，目前发现了种类各异，功能多样化的RNA。RNA的功能已经远远不止传统认识中作为遗传信息传递中介的作用，很多类型的RNA分子(如微小RNA，长链非编码RNA等)能够直接发挥功能。目前发现，80％以上的人类基因组可以被转录为RNA，而只有2％左右的区域可以翻译为蛋白，绝大多数的转录本是非编码RNA，这引起了广大研究者的兴趣。如何有效地鉴定这些非编码RNA以及确定它们的功能，是现在研究工作的一大挑战。越来越多的研究表明非编码RNA并非是转录产生的“垃圾”，它们在转录、翻译调控等方面发挥了重要的作用。LINC01504是一种新发现的非编码RNA，其转录本长度大于200个核苷酸。目前，LINC01504在正常细胞发育或肿瘤发生发展的过程中发挥的重要作用还在进一步研究中。LINC01504是否可以作为一种新的肿瘤标志物用于预测肺癌患者预后尚未有报道。因此，我们首次阐明了以LINC01504为新的肺癌标志物来预测患者预后的可行性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种预测肺癌预后的生物标记物长链非编码RNALINC01504及试剂盒，用于预测肺癌患者预后生存期。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：预测肺癌预后用的生物标记物为长链非编码RNALINC01504，该长链非编码RNALINC01504的核酸序列如SEQNO:1所示。长链非编码RNALINC01504生物标记物在制备预测肺癌预后的制剂中的应用。所述预测肺癌预后的制剂为实时荧光定量PCR检测试剂盒。用于预测肺癌预后的实时荧光定量PCR检测试剂盒包含用于检测目的基因LINC01504表达的特异性引物，引物序列为SEQNO:2和SEQNO:3。用于预测肺癌预后的实时荧光定量PCR检测试剂盒包含内参基因TUBA1A表达的特异性引物，引物序列为SEQNO:4和SEQNO:5。所述的用于预测肺癌预后的实时荧光定量PCR检测试剂盒还包含实时荧光定量SYBR染料、无RNA酶的水。所述的用于预测肺癌预后的实时荧光定量PCR检测试剂盒中实时荧光定量SYBR染料、目的基因LINC01504特异性引物、内参基因TUBA1A特异性引物、无RNA酶的水的体积比为10:1:1:6。本专利技术的有益效果在于：本专利技术通过荧光定量PCR与生存曲线分析发现肺癌组织来源的LINC01504与患者的生存率相关，含量越高，生存率越高。此法为预测肺癌患者的预后生存期分析提供了强有力的技术支持，有助于提高肺癌患者的术后生活质量，制订术后治疗方案，提高生存率，具有深远的临床意义。附图说明图1为实时荧光定量PCR分析LINC01504在正常组织与肺癌中的表达差异。图2为生存曲线分析肺癌组织来源的LINC01504表达高低对肺癌患者的预后影响。具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步说明。实施例1预测肺癌预后用的生物标记物为长链非编码RNALINC01504，该长链非编码RNALINC01504的核酸序列如SEQNO:1所示。预测肺癌预后的制剂为实时荧光定量PCR检测试剂盒，实时荧光定量PCR检测试剂盒包含用于检测目的基因LINC01504表达的特异性引物，引物序列为SEQNO:2和SEQNO:3所示，实时荧光定量PCR检测试剂盒还包含内参基因TUBA1A表达的特异性引物，引物序列为SEQNO:4和SEQNO:5所示。制备检测LINC01504表达量的试剂用于制备肺癌患者预后的试剂盒(用于50次反应)，所需的试剂包括：SYBRGreenqPCRMix500μL、3μM目的基因LINC01504特异性引物50μL、3μM内参基因TUBA1A特异性引物50μL、无RNA酶的水300μL。从肺癌的肿瘤或正常对照组织中抽提总RNA所用试剂，包括：Trizoll20mL、抑制RNA降解溶剂40mL、氯仿80mL、异丙醇80mL、DEPC水10mL。以总RNA为模板将LINC01504逆转录为cDNA所用试剂，包括：10×随机引物和OligodT引物的混合物100μL、5×逆转录反应缓冲液150μL、10mM含Mg2+的三磷酸碱基脱氧核苷酸dNTP100μL、200U/μLM-MLV逆转录酶50μL。实施例2组织样本LINC01504的检测1、收集待测肺癌肿瘤组织或正常对照组织，生理盐水清洗干净后，放入盛有抑制RNA降解溶剂的冻存管中，放至-80℃冰箱备用。2、组织中RNA的抽提（1）先在研钵中加入液氮，再将组织剪成小块在液氮中磨成粉末，用液氮预冷的药匙取100mg组织粉末加入已盛有1ml的Trizol液的EP管中。组织粉末总体积不能超过所用Trizol体积的10%，充分混合均匀。（2）室温放置5分钟，然后加入200μL的氯仿，盖紧EP管并剧烈摇荡0.5分钟。12000转/分钟离心10分钟。（3）取上层水相于一新的EP管中，加入500μL异丙醇，温和颠倒混匀。室温放置10分钟，12000转/分钟离心10分钟。（4）小心地弃去上清液，加入1ml的75%乙醇，涡旋混匀，4℃下12000转/分钟离心5分钟。重复操作一次。（5）弃去上清液，尽量将残余液体除去，室温或真空干燥5～10分钟，不要干燥过分，否则会降低RNA的溶解度。用50μLDEPC处理过的水将RNA溶解。（6）RNA浓度测定：用核酸浓度测定仪进行测定，吸1μLRNA样品加至样品孔，根据读数直接确定RNA的浓度。核酸浓度测定仪测定的OD260/OD280比值，比值在1.8-2.0之间认为RNA纯度很好。最后，RNA贮存于-80℃冰箱备用。3、LINC01504RNA的逆转录使用上海碧云天生物技术有限公司的逆转录试剂盒（D7170S）。具体步骤如下：（1）去除基因组DNA：将模板TotalRNA，5×gDNAEraserBuffer在冰上解冻，5×RTBuffer、10×RTPrimerMix、DEPC-treatedWater在室温(15-25℃)解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液混匀本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.预测肺癌预后用的生物标记物为长链非编码RNA LINC01504，该长链非编码RNA LINC01504的核酸序列如SEQ NO:1所示。
【技术特征摘要】
1.预测肺癌预后用的生物标记物为长链非编码RNALINC01504，该长链非编码RNALINC01504的核酸序列如SEQNO:1所示。2.如权利要求1所述的生物标记物在制备预测肺癌预后的制剂中的应用。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述预测肺癌预后的制剂为实时荧光定量PCR检测试剂盒。4.用于预测肺癌预后的实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：包含用于检测目的基因LINC01504表达的特异性引物，引物序列为SEQNO:2和SEQNO:3。5.如权利要求4所述的用于预测肺癌预后的实时荧光定量PC...
【专利技术属性】
技术研发人员：田田，
申请(专利权)人：郑州大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：河南,41
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