【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子诊断疗，具体为一种外泌体mirna作为诊断扩心病合并心衰的分子标志物及其应用。
技术介绍
1、扩张型心肌病（dcm）是最常见的遗传性心血管疾病之一，可引起心功能不全和心功能障碍。虽然基因突变已被确定为导致dcm的原因之一，但将rna等基因生物标志物用于dcm的早期诊断仍被忽视。此外，rna的变化可以反映疾病的进展，作为患者预后的指标。因此，开发基于基因的dcm诊断工具是有益的。rna在循环系统内通常不稳定，导致临床应用不可行。最近发现的外泌体mirnas具有当时诊断目的所需要的稳定性。因此，充分了解dcm患者中的外泌体mirna对临床翻译至关重要。在本研究中，我们采用基于血浆外泌体mirnas的下一代测序技术，全面表征了慢性心力衰竭（chf）dcm患者血浆外泌体中mirnas的表达。
2、现有技术中公开了众多利用mirna作为心衰检测分子标志物，例如申请公布号为cn104988216a的中国专利技术专利申请公开了一种慢性心力衰竭相关的血清mirna及其应用，本专利技术提供一类外周血mirnas在慢性心力衰竭的作为生物标志物风险评估/诊断和预后中的 用途。其中，hsa-mir-4491、hsa-mir-1285-3p、hsa-mir-665、hsa-mir-660-3p、hsa-mir-206、hsa-mir-1268b、hsa-mir-130a-3p和hsa-mir-330-3p在慢性心力衰竭患者外周血中存在差异性表达;证明外周血hsamir665等能特异性诊断慢性心力衰竭，并且其表达水平与射血分数
3、又如申请公布号为cn108165625a的中国专利技术专利申请公开了一种，mirna在制备检测心脏病试剂、试剂盒中的应用及检测试剂、检测试剂盒，该专利技术通过开发新型的mirna包括mir-155-5p、mir-216a-5p或mir-217f-5p，发现在患有心脏疾病的心肌细胞中表达显著上升，因此该专利技术中提供的mir-155-5p、mir-216a-5p或mir-217f-5p可以作为心脏相关疾病的风险预估与检测，另外，该专利技术还提供了mir-155-5p、mir-216a-5p或mir-217f-5p的检测试剂和检测试剂盒，借助于实时定量pcr的技术来统计微小rna变化，具有分析样本需要量小、自动化程度高、避免污染等优点；并且根据该专利技术专利说明书第【0002】段及说明书第【0111】-【0112】段记载可知，该专利技术专利提供的技术方案用于心衰的诊断。
4、虽然前述专利技术专利公开的技术方案能够用于诊断心衰，但是不适用于诊断扩心病合并心衰。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术提供了用于诊断扩心病合并心衰的外泌体mirna分子标志物的应用及其试剂盒，解决了上述
技术介绍
中提出的问题。
2、本专利技术技术方案如下：
3、一种外泌体mirna作为诊断扩心病合并心衰的分子标志物，所述外泌体mirna为mir-423-5p、mir-148a-3p、mir-185-5p、mir-320a-3p、mir-22-3p、mir-148b-3p、let-7i-5p、mir-103a-3p、mir-21-5p和let-7d-5p中任一种或两种以上的分子标志物组合，所述外泌体mirna的具体核酸序列如seq no.1-10所示。
4、进一步，所述外泌体为血浆外泌体。
5、一种外泌体mirna作为诊断扩心病合并心衰的分子标志物的应用，所述外泌体mirna作为制备用于诊断扩心病合并心衰的试剂盒、微阵列或生物芯片的标志物。
6、进一步，检测所述外泌体mirna表达量的物质为引物或探针。
7、进一步，采用荧光定量检测所述外泌体mirna表达量的引物组合如下：
8、（1）mir-148b-3p的引物：5’-atgtgcgtcagtgcatcacaga-3’
9、（2）mir-185-5p的引物：5’-aagcggatggagagaaaggcag-3’
10、（3）let-7d-5p的引物：5’-ccacggtcagaggtagtaggttg-3’
11、（4）let-7i-5p的引物：5’-cgcgcgtgaggtagtagtttgt-3’
12、（5）mir-103a-3p的引物：5’-caagccgagcagcattgtacag-3’
13、（6）mir-21-5p的引物：5’-gcgcgtagcttatcagactga-3’
14、（7）mir-22-3p的引物：5’-actccggaaagctgccagttg-3’
15、（8）mir-423-5p的引物：5’-aagaattgaggggcagagagcg-3’
16、（9）mir-148a-3p的引物：5’-aacacgtgtcagtgcactacaga-3’
17、（10）mir-320a-3p的引物：5’-acggcacaaaagctgggttga-3’。
18、一种试剂盒，所述试剂盒用于诊断扩心病合并心衰，所述试剂盒用于检测血浆外泌体mirna表达量，所述外泌体mirna为mir-423-5p、mir-148a-3p、mir-185-5p、mir-320a-3p、mir-22-3p、mir-148b-3p、let-7i-5p、mir-103a-3p、mir-21-5p和let-7d-5p中任一种或两种以上的分子标志物组合。
19、有益效果
20、一、相对于现有技术，本专利技术提供的应用有以下有益效果：
21、本专利技术选择mir-423-5p、mir-148a-3p、mir-185-5p、mir-320a-3p、mir-22-3p、mir-148b-3p、let-7i-5p、mir-103a-3p、mir-21-5p和let-7d-5p中任一种或两种以上的分子标志物组合作为外泌体mirna表达量的分子标志物，对扩心病合并心衰的检测准确率有效提高，上述分子|log(fc)|＞0.5，差异具有统计学意义，相对于健康对照组具有明显的差异表达。
22、本专利技术公开了基于血浆外泌体mirna的诊断扩心合并心衰的分子标志物及其应用。rt-qpcr结果表明，mir-423-5p、mir-148a-3p、mir-185-5p、mir-320a-3p、mir-22-3p、mir-148b-3p、let-7i-5p、mir-103a-3p、mir-21-5p和let-7d-5p等十种人血浆外泌体mirna在扩心合并心衰患者与健康对照组间差异性表达。利用roc曲线分析十种血浆外泌体mirna的诊断效能，结果显示上述外泌体mirna的auc值分别为0.926、0.938、0.827、0.815、0本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.用于诊断扩心病合并心衰的外泌体miRNA分子标志物的应用，其特征在于：所述外泌体miRNA为miR-423-5p、miR-148a-3p、miR-185-5p、miR-320a-3p、miR-22-3p、miR-148b-3p、let-7i-5p、miR-103a-3p、miR-21-5p和let-7d-5p中任一种或两种以上的分子标志物组合，所述外泌体miRNA的具体核酸序列如SEQ NO.1-10所示。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述外泌体为血浆外泌体。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述外泌体miRNA作为制备用于诊断扩心病合并心衰的试剂盒、微阵列或生物芯片的标志物。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：检测所述外泌体miRNA表达量的物质为引物或探针。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于：采用荧光定量检测所述外泌体miRNA表达量的引物组合如下：
【技术特征摘要】
1.用于诊断扩心病合并心衰的外泌体mirna分子标志物的应用，其特征在于：所述外泌体mirna为mir-423-5p、mir-148a-3p、mir-185-5p、mir-320a-3p、mir-22-3p、mir-148b-3p、let-7i-5p、mir-103a-3p、mir-21-5p和let-7d-5p中任一种或两种以上的分子标志物组合，所述外泌体mirna的具体核酸序列如seq no.1-10所示。
<...【专利技术属性】
技术研发人员：唐俊楠，张金盈，张格，于凤仪，路永政，秦臻，王泽禹，徐帅，孙钊威，高佳敏，杨宇，王宇甲，
申请(专利权)人：郑州大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：
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