The invention discloses two kinds of shRNA that interfere with the expression of human IFN Gama gene, such as SEQ ID NO:1 and 2. The present invention also discloses a lentivirus expression vector which contains shRNA interfering with the expression of human IFN Gama gene and nucleotide fragments encoding chimeric antigen receptors as shown in SEQ ID NO:4. The invention also discloses a CD19 CAR T cell interfering with the expression of human IFN_gama gene, which is a T lymphocyte containing a lentivirus expression vector, or a T lymphocyte integrating shRNA interfering with the expression of human IFN_gama gene in chromosome, and a nucleotide fragment encoding chimeric antigen receptor. The CAR_T cells of the invention introduce IFN_gama shRNA, co-express IFN_gama shRNA while expressing CAR, and inhibit the release of IFN_gama from the source by gene silencing technology, thereby reducing the impact of CRS and improving the safety of CAR_T treatment. It can be predicted that there will be important applications in the preparation of drugs for the prevention, treatment and adjuvant treatment of malignant tumors.
【技术实现步骤摘要】
干扰IFN-gama表达的CD19-CAR-T细胞及其应用
本专利技术涉及干扰IFN-gama表达的靶向CD19的嵌合抗原受体T细胞(ChimericAntigenReceptorTcell,CAR-T)的制备及应用,属于基因工程和细胞生物学领域。
技术介绍
1989年,嵌合抗原受体改造T细胞(CAR-T)这一概念被首次提出,目的是建立肿瘤特异性识别能力的过继细胞疗法。第一代CAR的设计是简单的用特异性单克隆抗体来源的scFv(single-chainantibodyvariableregionfragment)段替换TCR(Tcellreceptor)的胞外区部分,保留了跨膜结构和胞内传递信号的CD3ζ区域,有的研究组胞内信号传递部分也会采用FcR。但第一代CAR的临床试验结果却非常令人失望,效果最好的一次临床试验也仅仅有2/11个病人有长期的缓解。随着对免疫学认识的不断深入,人们发现CD3ζ信号虽然能够诱导T细胞的活化和短暂增殖,但之后会诱导T细胞的无能(anergy)。1998年,有两个实验室报道了CD28信号结构域可以为CD3ζ信号提供辅助的共刺激功能。因此,第二代CAR的设计在第一代的基础上引入了共刺激分子的部分,如CD28或CD137(4-1BB)的胞内信号结构域。而第三代CAR则是加入了2个共刺激分子的功能信号结构域,包括CD27、CD28、4-1BB、ICOS或OX40(15-18)。现在在临床上进行实验的主要是第二代CAR的设计。CAR-T的疗效已经被业内所公认,2017年8月30日,美国FDA批准了首个CAR-T药物——Kymriah( ...
【技术保护点】
1.干扰人IFN‑gama基因表达的shRNA,其特征在于:为IFN‑gama shRNA‑1,或IFN‑gama shRNA‑3,IFN‑gama shRNA‑1的核苷酸序列如下所示,IFN‑gama shRNA‑3的核苷酸序列如下所示:IFN‑gama shRNA‑1,如SEQ ID NO:1所示:GCGGCCGCCGCAGAGCCAAATTGTCTCCTTTTCAAGAGAAAGGAGACAATTTGGCTCTGCTTTTT。IFN‑gama shRNA‑3,如SEQ ID NO:2所示:GCGGCCGCCCATTCAGATGTAGCGGATAATTTCAAGAGAATTATCCGCTACATCTGAATGTTTTT。
【技术特征摘要】
1.干扰人IFN-gama基因表达的shRNA,其特征在于:为IFN-gamashRNA-1,或IFN-gamashRNA-3,IFN-gamashRNA-1的核苷酸序列如下所示,IFN-gamashRNA-3的核苷酸序列如下所示:IFN-gamashRNA-1,如SEQIDNO:1所示:GCGGCCGCCGCAGAGCCAAATTGTCTCCTTTTCAAGAGAAAGGAGACAATTTGGCTCTGCTTTTT。IFN-gamashRNA-3,如SEQIDNO:2所示:GCGGCCGCCCATTCAGATGTAGCGGATAATTTCAAGAGAATTATCCGCTACATCTGAATGTTTTT。2.用于制备权利要求1所述的干扰人IFN-gama基因表达的shRNA的引物,其特征在于:用于制备IFN-gamashRNA-1的引物,其核苷酸序列如下所示:hIFN-gama-shRNA1-1st:GGCCGCCGCAGAGCCAAATTGTCTCCTTTTCAAGAGA;hIFN-gama-shRNA1-2nd:AAGGAGACAATTTGGCTCTGCTTTTTGC;hIFN-gama-shRNA1-3rd:AAGGAGACAATTTGGCTCTGCGGC;hIFN-gama-shRNA1-4th:GGCCGCAAAAAGCAGAGCCAAATTGTCTCCTTTCTCTTGAA。用于制备IFN-gamashRNA-3的引物,其核苷酸序列如下所示:hIFN-gama-shRNA3-1st:GGCCGCCCATTCAGATGTAGCGGATAATTTCAAGAGA;hIFN-gama-shRNA3-2nd:ATTATCCGCTACATCTGAATGTTTTTGC;hIFN-gama-shRNA3-3rd:ATTATCCGCTACATCTGAATGGGC;hIFN-gama-shRNA3-4t...
【专利技术属性】
技术研发人员:谭毅,郭红,张慧慧,
申请(专利权)人:山东省齐鲁细胞治疗工程技术有限公司,
类型:发明
国别省市:山东,37
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