在水生物种中增强的免疫应答制造技术

本发明专利技术总体涉及在水生物种对象中引发免疫应答的方法。特别地，应用免疫调节剂组合物诱导免疫应答以增强所述对象与病原体对抗的能力。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】在水生物种中增强的免疫应答专利
本专利技术总体涉及通过激活先天免疫在对象中引发免疫应答的方法。特别地，应用免疫调节剂组合物刺激水生物种的成员中的先天免疫。专利技术概述本专利技术涉及应用免疫刺激性质粒来调节水生物种对象中的先天免疫的方法。所述免疫刺激性质粒可以包含与SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4或其组合的序列具有至少80％序列同一性的核酸序列。在一些方面，所述免疫刺激性质粒可以包含与SEQIDNO:4的序列具有至少84%序列同一性的核酸分子。在一些方面，所述免疫刺激性质粒可以包含SEQIDNO:1的序列。在一些方面，所述免疫刺激性质粒可以包含SEQIDNO:4的序列。在一些方面，所述免疫刺激性质粒可以包含SEQIDNO:2的序列。在一些方面，所述免疫刺激性质粒可以包含SEQIDNO:3的序列。在其它方面，所述免疫刺激性质粒可以由与SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4或其组合的序列具有至少80％序列同一性的核酸序列组成。在一些方面，所述免疫刺激性质粒可以由与SEQIDNO:4的序列具有至少84%序列同一性的核酸分子组成。在一些方面，所述免疫刺激性质粒可以由SEQIDNO:1的序列组成。在一些方面，所述免疫刺激性质粒可以由SEQIDNO:4的序列组成。在一些方面，所述免疫刺激性质粒可以由SEQIDNO:2的序列组成。在一些方面，所述免疫刺激性质粒可以由SEQIDNO:3的序列组成。在一些方面，所述免疫刺激性质粒优选不包含编码全长或功能性可选择或可筛选的标记物的核酸序列。在其它方面，所述免疫刺激性质粒包含编码不是抗生素抗性基因的可选择或可筛选的标记物的核酸序列。本专利技术还涉及包含本文所述的免疫刺激性质粒或DNA序列中的任一种以及药学上可接受的载体的药物制剂。本专利技术还涉及包含阳离子脂质体递送媒介物以及本文所述的免疫刺激性质粒或DNA序列中的任一种的免疫调节剂组合物。在一些方面，本专利技术涉及使用本文所述的免疫刺激性质粒或DNA序列的方法。合适的使用方法包括对水生物种的对象的治疗性施用。此类治疗性施用包括一个或多个对象的预防性治疗、整体预防性治疗和感染后治疗。本专利技术涉及刺激或引发对象中的免疫应答的方法。在一些方面，所述方法包括通过向对象施用本文所述的免疫调节剂组合物而刺激该对象中的免疫应答。在一些方面，所述方法包括通过向对象施用本文所述的免疫刺激性质粒或DNA序列而刺激该对象中的免疫应答。其它目标和特征将是一部分显而易见的，且一部分在下文中指出。附图简述以下附图形成本说明书的部分，并且被包括以进一步说明本专利技术的某些方面。本专利技术可以通过参考这些附图中的一个或多个并结合本文提供的具体实施方案的详细描述而更好地理解。图1显示pMB75.6质粒的图谱(SEQIDNO:2)；图2显示pGCMB75.6质粒的图谱(SEQIDNO:1)；图3显示pLacZ75.6质粒的图谱(SEQIDNO:4)；图4图示说明对于鱼槽M5的攻击后每日死亡率百分数。图5图示说明对于鱼槽M6的攻击后每日死亡率百分数。图6显示对于来自疫苗研究的每一组的组合死亡率的Kaplan-Meier存活曲线。纵轴是在具体时间DPC(横轴)处的存活概率。曲线末端处的交叉代表删失数据(censoreddata)(超过27DPC存活的鱼)。DPC：攻击后天数。图7描绘来自疫苗研究的12组鱼之间的配对比较，连接的组(由通过绿色圆圈显示的节点表示)显示在它们之间没有显著差异(α=0.05)。图8图示说明与葡萄糖（dextrose）5%处理的对照组相比，对于疫苗研究组的存活相对百分数。比较在实验末端的累积死亡率之间进行(RPSend)。葡萄糖5%组和其它处理之间的显著累积死亡率差异(α=0.05)用*表示。专利技术详述根据本专利技术，已经发现了能够引发受体对象中的免疫应答的组合物，以及使用方法。具体而言，本专利技术涉及核酸组合物或免疫调节剂组合物及其用途。已经发现，此类免疫调节剂组合物可以用于调节水生物种成员的免疫系统。本专利技术尤其可用于治疗和预防由微生物引起的感染性疾病，所述微生物诸如，但不限于，病毒、细菌、霉菌、真菌、酵母、寄生虫和本领域中已知的其它微生物。下面更详细讨论了所述免疫调节剂组合物的组成及使用方法。I.组合物可用于本专利技术中的组合物，诸如本文所述的那些，通常能够用作针对感染性疾病的预防性疗法、整体预防性疗法或治疗疗法。此类组合物在本文中被称为免疫调节剂组合物。所述免疫调节剂组合物至少包含能够诱导受体对象中的免疫应答的免疫刺激性质粒或免疫刺激性DNA序列。在一些方面，所述免疫应答是先天免疫应答。在一些方面，所述免疫应答是先天免疫应答和获得性免疫应答的组合。在一些方面，所述免疫调节剂组合物也可以包含脂质体递送媒介物。A.核酸在一些方面，本专利技术涉及可用于治疗或预防感染性疾病致病剂的核酸分子。本文所述的核酸分子可以以线性双链或单链DNA、氨基酸序列、核糖核酸(RNA)或其组合包含在免疫刺激性质粒中。在一些方面，本专利技术涉及含有免疫刺激性质粒或免疫刺激性DNA序列的核酸分子、载体和宿主细胞(体外、体内或离体)。本文描述的核酸分子富含CpG基序。该CpG基序可以通过免疫监视受体诱导免疫刺激，所述受体包括特异性Toll样受体如TLR9和TLR21。此外，本文描述的核酸分子也包含非CpG免疫刺激性基序。在一些方面，所述核酸分子包含超过在随机核酸序列中期望的CpG基序的频率约2-20%的CpG基序。在一些方面，所述核酸分子包含超过在随机核酸序列中期望的CpG基序的频率约3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40%或更多的CpG基序。在一些方面，所述核酸分子包含超过在随机核酸序列中期望的CpG基序的频率约10%的CpG基序。在一些方面，与脊椎动物DNA相比，观察到多于10倍的CpG基序的富集。在一些方面，与脊椎动物DNA相比，所述核酸分子包含约2至50倍或更多的CpG基序。在一些方面，与脊椎动物DNA相比，所述核酸分子包含约3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55倍或更多的CpG基序。在一些方面，本专利技术涉及不包含抗生素抗性基因的免疫刺激性质粒或DNA序列。所述质粒可以缺乏任何可选择或可筛选的标记基因。例如，本文所述的pGCMB75.6质粒不包含任何全长或功能性可选择或可筛选的标记基因。pGCMB75.6的序列提供于SEQIDNO:1中。在一些方面，本文所述的免疫刺激性质粒优选不包含编码全长或功能性可选择或可筛选的标记物的核酸序列。在一些方面，所述免疫刺激性质粒不包含抗生素抗性基因。例如，所述质粒不包含卡那霉素抗性基因。在一些方面，本文所述的质粒优选不编码免疫原。在一些方面，所述免疫刺激性质粒可以包含编码不是抗生素抗性基因的可选择或可筛选的标记基因的核酸序列。例如，本文所述的pLacZMB75.6质粒包含LacZ基因作为可筛选的标记物。pLacZMB75.6的图谱提供于图3中，并且pLacZMB75.6的核苷酸序列提供为SEQIDNO:4。如图本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.在受体水生物种对象中引发免疫应答的方法，包括：a. 向水生物种对象施用有效量的免疫调节剂组合物，其中所述免疫调节剂组合物包含：含有至少一个免疫刺激性CpG基序、至少一个非免疫刺激性CpG基序的核酸序列，和阳离子脂质体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.07.31 US 62/1998401.在受体水生物种对象中引发免疫应答的方法，包括：a.向水生物种对象施用有效量的免疫调节剂组合物，其中所述免疫调节剂组合物包含：含有至少一个免疫刺激性CpG基序、至少一个非免疫刺激性CpG基序的核酸序列，和阳离子脂质体。2.权利要求1的方法，其中所述脂质体递送媒介物包括选自多层囊泡脂质和挤出脂质的脂质。3.权利要求1的方法，其中所述脂质体递送媒介物包括选自以下的脂质对：N-[1-(2,3-二油基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTMA)和胆固醇；N-[1-(2,3-二油酰基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTAP)和胆固醇；1-[2-(油酰基氧基)乙基]-2-油基-3-(2-羟乙基)咪唑啉鎓氯化物(DOTIM)和胆固醇；以及二甲基双十八烷基溴化铵(DDAB)和胆固醇。4.权利要求1的方法，其中所述免疫调节剂组合物进一步包含生物制剂。5.权利要求1的方法，其中所述施用是在暴露于感染病原体之前。6.权利要求1的方法，其中所述施用是在暴露于感染病原体之后。7.权利要求1的方法，其中所述免疫调节剂组合物包含与选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：C魏斯，NC西马德，J克斯林，
申请(专利权)人：拜耳动物保健有限责任公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE