增强免疫应答的试剂制造技术

本发明专利技术涉及免疫原性组合物以及制造和使用所述组合物的方法。所述免疫原性组合物包含。所述兴奋剂和引导分子在化学上是不同的。所述兴奋剂和免疫原以相关的量存在而导致免疫应答的增强，这是和免疫原和引导分子或兴奋剂之一导致的结果是相关的。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
增强免疫应答的试剂的制作方法
技术介绍
专利
这项专利技术涉及免疫学领域，尤其涉及不同类型佐剂的组合以辅助宿主产生对于病原体、哺乳动物抗原和其它临床有意义的目标增强了的体内抗体反应。相关技术的描述75年前，Ramon证明通过施用含有引起发热细菌的疫苗提高对于白喉和破伤风的抗毒素反应是可能的。从那时开始，就存在临床医师和免疫学家在努力通过佐剂增强免疫应答，同时尝试使经常存在的阻碍它们在人类中应用的毒性副反应最小化。通常，抗原通过抗原呈递细胞“呈递”给免疫系统，它包括APC表面的主要组织相容性复合分子(MHC)存在下的B-细胞、树突状细胞和的巨噬细胞。通常，认为作为免疫原的合成和自然抗原是被APC摄取和部分消化的，使得较小片的原始完整的抗原可在细胞表面表达。现在已经明白，T-淋巴细胞对B-淋巴细胞，相对来说是不能与可溶性抗原作用的。典型的，T-淋巴细胞需要将抗原处理，然后表达在有上面提及的MHC分子存在时的APC细胞表面。T-细胞和特异性的T-细胞受体辨认双分子配体形式的抗原，这种配体包括所处理的抗原以及一个或多个MHC分子。已经认为在T-细胞有效起动之前，所述APC分子必须被激活表达共-刺激分子。树突状细胞(DC)被认为是最有效的抗原呈递细胞，显然是唯一能在初次免疫应答中活化天然(以前未被激活)T细胞的细胞(Banchereau和Steinman 1998 Nature392245-252)。如果一种疫苗为了产生全T细胞免疫和最佳的抗体反应，激活天然T细胞是必须的。不幸的是，树突状细胞很少。它们在次级淋巴器官中每400个细胞中仅有1个，每500个白细胞中有1个，在大多数非淋巴组织中每1000个细胞中有1个。伴随所述缺乏的是天然T细胞对于任何单个表位或MHC肽复合物的低频率反应，估计低至1/10,000(Mason 1998 Immunol.Today 19395-404)，简而言之，产生最好的免疫应答接下来就是所述抗原到达一种稀少细胞，它必须接下来和另外一种稀少免疫细胞相作用。天然T细胞通过血流连续的再循环通过淋巴结(Gretz等1996 J Immunol 157495-499)，然而不成熟的树突状细胞是非淋巴器官相对稳定的居住者(Cowing和Gilmore 1992 J Immumol.1481072-1079)。不成熟的树突状细胞表达低水平的表面MHC和共-刺激分子，如仅是T细胞的弱激活剂。然而，这些细胞是胞饮作用形成的并且吞噬细胞的，使得它们能够经常探测环境而发现潜在病原体的存在。当暴露于合适的“刺激”(刺激性佐剂)时，不成熟的树突状细胞被动员，脱离局部组织并通过不同的淋巴系统迁移到淋巴结(Banchereau和Steinman 1998 Nature392245-252)。在它们迁移至淋巴结过程中，DC成熟并成为有效的T细胞激活剂。朗格罕氏细胞可能是研究最多的DC细胞。它们寄居在皮肤表皮层和黏膜，它们在其中出现的频率要比在其它非淋巴器官中发现的不成熟树突状细胞高。能够使佐剂适合每一种类型的免疫细胞，特别是朗格罕氏类型的DC会有很大的收效。由于以上给出的原因，许多免疫原以及部分表位，包括外源和内源的，经常不被辨认，或仅被免疫系统微弱的辨认。很难，在一些例子中不可能诱导针对这样目标的抗体产生。当处理小的半抗原或发展包含小的非免疫原肽亚单位疫苗时，这个问题经常遇到。配制这样疫苗的传统方法是通过和蛋白质载体结合以大分子呈递这些抗原，所述蛋白质载体更具有免疫原性并且是疫苗的目标(联合疫苗)。但是经常是所述轭合物仍不能诱导对于较少量免疫原性材料的细胞毒性T-淋巴细胞(CTL)反应的产生。在这些例子中，一种佐剂是需要的。不幸的是，现在许多佐剂(被证明的和在试验中的)可增强免疫应答的一些方面，但所有的都通常不能诱导产生CTL反应、血清反应的必须水平，和/或表现出一些类型的毒性。现在对于病毒感染的看法，主张保护最好是同时通过体液和细胞介导的免疫力而实现的，包括长时间记忆和细胞毒性T-细胞。US 2001/0024649 A1描述了局部施用免疫原和一些在这项专利技术中归类为兴奋剂的试剂。专利技术者提供了对于DC成熟以及需要兴奋剂的良好概述，然而没有提及引导分子和兴奋剂的联合。WO 99/43350描述了局部预处理试剂和佐剂，其中所述的一些归类为兴奋剂，但没讨论抗原目标。输递途径限于IM、口服、鼻腔和直肠。在WO 02/11669中，本专利技术者描述了皂苷和α2-M和HSP的联合。所述文献列出了其它的反应修饰成分，这项专利技术归之为兴奋剂。虽然没有为促进关系提供数据或事实，但描述了一种兴奋剂(皂苷)和两种不同引导分子的联合。由于所有引导分子是相同受体(CD91)，本专利技术者不能认识和证明两类佐剂之间更广泛的联系。进而，由于HSP和受激细胞相关联，并期待拥有“兴奋剂”类型-表位，来自皂苷的作用不清楚。本专利技术者没有对抗体的应用作任何评论。WO 99/13915讨论了抗原目标，然而缺乏对于协作的描述，它可以通过两类佐剂的联合而实现。所述工作关注DNA抗原，包含抗原和引导分子必须和如PEI的试剂结合。通过第一输递途径仅观察到2x的增强，这看上去和通过第二输递途径输递不带引导分子的抗原是相匹配的。如早些时候在这项申请中所讨论的，DNA抗原如传统免疫原仍需要兴奋剂。所述WO文献列出了其它引导分子，它们中的一些归在了这项专利技术中。US出版的申请20020022034讲述了一种输递带有目标分子的基因输递复合体的方法，同时进行抗逆转录病毒药物治疗。从另外一个角度来看，也需要减少动物所暴露的毒性，当研究者和试剂研发者尝试制造体内和活体外应用的抗体时。1985年，美国公共健康服务建立了授权动物机构建立实验动物保护和应用委员会(IACUC)。IACUC任务之一是确保减少动物实验中使用的毒性试剂如的完全弗氏佐剂。直到现在，还没有一种物质可替代CFA的效力但不表现出一些水平的毒性，无论是局部还是系统的。在历史上，引导分子和兴奋剂是分开应用的，因为免疫学家认为一类佐剂会包含其它类。实际上，许多抗原的引导方法特别是为了回避兴奋剂的需要，兴奋剂如单磷酰脂A(MPL)曾经被竭力推荐作为完全弗氏佐剂的独立选择。在这项专利技术中，有意的将免疫原和兴奋剂和引导(呈递)抗体和/或α2-巨球蛋白一起运用。需要有佐剂和选择这样佐剂的方法，它可以促进稀少的未成熟的抗原呈递细胞(APC)捕捉抗原，APC的成熟和装载，并最终增加APC和抗原-特异T细胞的作用。这些佐剂的作用对于传统的免疫原是需要的，就和更新的DNA/RNA免疫原一样(Iwasaki等1997.J.Imminol.15911)，它们也受相同的限制。和仅仅充当一种作用的佐剂结合的抗原不会辨认最可能的免疫应答。有需要有和完全弗氏佐剂(CFA)的佐剂性相竞争以及理想的超过它，但没有和CFA相关联的毒性的试剂。需要有新的能和大范围输递途径和微装置基础的设备相容的佐剂形式。需要新的佐剂和较少的免疫原和目标一起发挥作用，其免疫原性是弱的，除了“加入和混合”不需要任何处理，能够耐受冷冻，可能被冻干而不丧失活性。因此，接下来的工作将有意避免储存例如脂质体和油，它们也会限制佐剂混合物的效果，这是受体介导的。专利技术概述本专利技术涉及一种免疫本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包括免疫原的免疫原性组合物，一种起引导分子作用的第一佐剂和一种起兴奋剂作用的第二佐剂，其特征在于，所述第一和第二佐剂是化学上不同的分子，所述免疫原和第一、第二佐剂存在的量足以产生增强的免疫应答，这是与免疫原仅和第一或第二佐剂之一产生的反应相比较而言。

【技术特征摘要】
US 2001-8-13 60/311,387;US 2002-5-13 10/142,9661.一种包括免疫原的免疫原性组合物，一种起引导分子作用的第一佐剂和一种起兴奋剂作用的第二佐剂，其特征在于，所述第一和第二佐剂是化学上不同的分子，所述免疫原和第一、第二佐剂存在的量足以产生增强的免疫应答，这是与免疫原仅和第一或第二佐剂之一产生的反应相比较而言。2如权利要求1所述的免疫原性组合物，其中，所述兴奋剂是弱兴奋剂。3.如权利要求1所述的免疫原性组合物，不包括会导致可见外部毒性或过敏症状的试剂。4.如权利要求1所述的免疫原性组合物，适合鼻腔内、腹膜内，或皮下、真皮内、肌肉内、静脉内、血管内、阴道、直肠、口腔、局部或粘膜输递。5.如权利要求1所述的免疫原性组合物，其中，所述兴奋剂是皂苷或其包含皂苷成分的衍生物。6.如权利要求5所述的免疫原性组合物，其中，所述皂苷是合成的。7.如权利要求1所述的免疫原性组合物，其中，所述兴奋剂是CpG DNA、核酸、细胞因子或趋化因子。8.如权利要求1所述的免疫原性组合物，其中，所述免疫原是抗原。9.如权利要求8所述的免疫原性组合物，其中，所述抗原是核酸的表达产物。10.如权利要求8所述的免疫原性组合物，其中，所述抗原是全细胞、蛋白质、蛋白质混合物、膜提取物、哺乳动物细胞、病毒或细菌。11.如权利要求10所述的免疫原性组合物，其中，所述细菌是衣原体。12.如权利要求11所述的免疫原性组合物，其中，所述衣原体是沙眼、肺炎或鹦鹉衣原体。13.如权利要求11所述的免疫原性组合物，其中，所述衣原体是原生小体。14.如权利要求13所述的免疫原性组合物，其中，所述沙眼原生小体是无活性的。15.如权利要求1所述的免疫原性组合物，其中，所述引导分子是α2-巨球蛋白(α2-M)或A2M的CD19结合片段。16.如权利要求1所述的免疫原性组合物，其中，所述引导分子是抗体或其免疫原特异片段。17.如权利要求16所述的免疫原性组合物，其中，所述抗体或其片段对于抗原呈递细胞(APC)受体特异。18.如权利要求16所述的免疫原性组合物，其中，所述抗体或其片段具有能够结合APC受体的表位。19.如权利要求16所述的免疫原性组合物，其中，所述抗体或其免疫原特异片段对于免疫原是非特异的。20.如权利要求16所述的免疫原性组合物，其中，所述抗体互补决定区(CDR)对于APC、免疫原或兴奋剂特异。21.如权利要求16所述的免疫原性组合物，其中，所述抗体CDR对于APC、免疫原或兴奋剂不是特异的。22.如权利要求16所述的免疫原性组合物，其中，所述抗体对于兴奋剂特异。23.如权利要求16所述的免疫原性组合物，其中，所述抗体对于兴奋剂不是特异的。24.如权利要求1所述的免疫原性组合物，其中，所述引导分子结合运铁蛋白、甘露糖(manose)、脱唾液酸糖蛋白受体或CD91。25.如权利要求1所述的免疫原性组合物，其中，所述引导分子是补体或热休克蛋白或其能够结合APC的片段。26.如权利要求1所述的免疫原性组合物，其中，所述引导分子是调理分子。27.如权利要求1所述的免疫原性...

【专利技术属性】
技术研发人员：RL坎普贝尔，JA米克斯塔，
申请(专利权)人：贝克顿迪肯森公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]