增强免疫应答的方法技术

增强人和动物对合成抗原的免疫应答的方法，其特征在于，首先将合成抗原嵌入可生物降解的球状微粒中，然后使这种载有合成抗原的微粒悬浮在一种分散介质中，将这种配制剂不经胃肠给药，此时产生增强的免疫应答。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种增强合成的弱免疫原抗原的免疫原性的方法。所谓合成的弱免疫原抗原是指下列具有肽或蛋白质结构的化合物，这些化合物或者化学地或者借助重组DNA技术来制造，这些化合物以水溶液或作为铝吸附物在不经胃肠给药之后，仅产生不足道的免疫应答，该免疫应答具有极低的抗体效价和不足的或者低的T细胞增生。下面，为了简便起见，将这组抗原称为合成抗原。当这里所描述的合成抗原以水溶液形式给药时，按照定义，对该合成抗原的免疫应答因此可以忽略。作为实验的参考配制品，使用弗洛伊德氏不全佐药(IFA)。IFA是一种油包水(W/O)配制剂，它以已知的方式不仅刺激体液的而且刺激细胞的免疫应答。可是，由于不希望的强副作用，IFA只允许用于试验目的。疫苗这一概念被理解为下述制剂，这种制剂含有附加用作抗原的物质，该物质本身执行纯助剂功能或免疫增强功能或者这两种功能的充分结合。纯助剂例如是为了不经胃肠给药用于溶解抗原的水，抗菌的、等渗的和pH稳定的助剂。免疫增强物质也经常称为佐药，其中涉及例如非溶性铝盐(磷酸铝、氢氧化铝)、某种脂多糖、胞壁酰肽、海藻糖化合物、各种细胞分裂素如白细胞间素1、亲油的嵌段共聚物(聚羟亚烃)。但是，佐药性能也具有实验的参考配制品，即不完全弗洛伊德氏佐剂，并且按其形成本身还具有各种的疫苗给药形式，如脂质体、乳剂、微胶囊。这些给药形式不仅在体内引起形成抗原贮存，而且也具有免疫刺激性能。研制新疫苗和改进现有疫苗制剂，在近年来已变得越来越重要和急迫(E.Eppstein et al.，New adjuvants for Vaccinescontaining purified protein antigens，Advances in DrugDelivery Review 4，233-253(1990))。制造合成抗原也像开发合适的佐药制剂和给药形式一样，能够提高弱免疫原化合物的免疫原性，正引起普遍重视。一方面，开发新抗原是以某些疾病作为目标，对这些疾病例如像AIDS、疟疾、结核病、霍乱、甲型肝炎、癌症，还没有有效的疫苗或者只有一些效果不能令人满意的疫苗；另一方面，人们致力于用容易生产和纯化并改进特性的低分子肽和蛋白质代替传统的疫苗中所包含的抗原，如灭活的病毒、细菌或类毒素，这些肽和蛋白质在其结构中具有原来的传染病病原体的抗原区。这样的抗原肽和蛋白质可以采用生物化学方法或通过重组DNA技术，以高纯度来获得。这些新一代的合成抗原在其化学结构中具有刺激抗原特异的TH(辅助物)、TC(细胞毒素的)和B淋巴细胞的肽序列(抗原决定簇)。此时这种所谓的TH-、TC-和B-细胞抗原决定簇可以各自单独存在，或者共价地连接到一种化学的(chimeren)B-T抗原决定簇上。因为这些用基因技术或化学方法制造的抗原一般具有大约500-2000的低分子量，所以其免疫原性与具有50000-150000分子量的类毒素相反，或者与特殊抗体如灭活病毒和其他微生物相反，是很弱的。迄今用于增强合成抗原的免疫原性的已知对策是基于，第一步通过共价结合增加这种抗原的分子量，第二步将这种较高分子量的构建体引入免疫增强的制剂中。已经知道，将合成抗原共价地结合到高分子载体蛋白质例如白喉类毒素、破伤风类毒素、牛血清白蛋白、帽贝属血清蛋白上，能够实现提高分子量。使用昂贵和不太纯的来自外来生物体的载体蛋白质，为了抗原和载体蛋白质的共价结合不可缺少反应的和较有毒的病原体，以及这些化合物的纯化、同一性鉴定和纯度鉴定的困难性，是这些抗原载体蛋白质构建体的缺点。另一方面，有人提议通过下述方式增加B-T抗原决定簇的分子量，即这种抗原决定簇本身以某一种方式把支链结构共价地向多体结合(J.P.Tam，Y.-A.Lu，Proceedingsof the National Academy of Sciences of the USA 86，9084-9088(1989))。这种构建体被称为多抗原肽，简称MAP。此外人们还知道，为了实现一种抗体形成，B和TH抗原决定簇的组合是必不可少的，并且TC抗原决定簇与TH抗原决定簇的组合，在以IFA给药后能够改善细胞毒素的淋巴细胞应答，也称为CTL应答(C.Widmann et al.，J.Immunol.Methods 155，95-99(1992))。PS-EP-A1-513861描述了用于这种弱免疫原抗体的各种免疫增强制剂及其高分子构建体。首先含有免疫刺激剂的O/W乳剂属于此。这些粗分散或者胶质分散体系的缺点是其固有的热力学的不稳定性，这种不稳定性本身在贮藏过程中能以聚集现象反映。此外，这样的液体分散制剂的组分经受化学变化，如氧化和水解。此外，所述的制剂大多数需要免疫刺激剂，如胞壁酰肽，这种免疫刺激剂在毒物学上是完全不令人担心的。最后这些制剂丝毫没有显示长期作用。因此，为了达到能延续多年的接种预防，需要按照规定的接种计划注射3到4次(所谓的“增强”注射)的疫苗制剂。此外，国际专利WO92/19263-A1中公布了一种用于抗原免疫增强的体系，该体系使用所谓的可生物降解的微球体、也称为微胶囊或微粒。这种方法的缺点是，免疫增强主要在胃肠粘膜上觉察到，因而可能仅对少数病原体(所谓的肠病原微生物)起作用。再者，这种微粒须在十二脂肠内用药，及不可以经口给药或服药的事实，排除了实际应用-至少在人体上的应用-的可能性。此外，按照PS-EP-A2-333523，一种称量过的细的(1-10μm)和粗的(20-50μm)微粒尺寸对于免疫增强作用似乎是一个重要的先决条件。这种对微粒的粒度范围的要求意味着，在微粒的制造和加工时要增加额外的成本，这是其缺点。本专利技术的任务是，借助特殊的生物聚合物将合成抗原嵌入可生物降解的微粒中，这种微粒悬浮在一种分散介质中并不经胃肠给药，引起系统的免疫应答增强。按照本专利技术，这个任务是采用按照权利要求1-12所描述的方法来解决的。为此在例子1-6中描述了实施例。下面参照附附图说明图1-7详细地说明本专利技术的方法。图1示意地描述按照本专利技术的免疫增强。图2表示在含MAP的快释微胶囊和IFA制剂一次给药后的抗体效价。图3表示在含MAP的缓释微胶囊和IFA制剂一次给药后的抗体效价。图4表示在含MAP的快释和缓释微胶囊的混合物和IFA制剂一次给药后的抗体效价。图5表示在含MAP的快释微胶囊和IFA制剂三次给药后的抗体效价。图6表示在含不同的MAP的微胶囊和IFA制剂一次给药后，增生的T淋巴细胞应答。图7表示在总是含一种合成Tc抗原和相应的MAP的快释微胶囊混合物一次给药后的Tc应答。1.将合成抗原嵌入可生物降解的微粒中方法的出发点是，合成抗原按照本专利说明书开头部分中的定义，在其已知的化学结构中至少含有一种所定义的并且可被免疫系统识别的病原体微生物的抗原决定簇。此时在抗原决定簇中不仅可以涉及B细胞抗原决定簇、TH细胞抗原决定簇、TC抗原决定簇，而且可以涉及这些抗原决定簇的任何混合物。所谓的多抗原肽(MAP)，单独或者与TC抗原决定簇组合，优先构成本专利技术方法的出发点。抗原决定簇的来源包括细菌、病毒、原虫和肿瘤细胞。按照本专利技术将合成抗原嵌入可生物降解的微粒中。本专利技术的实质是，选择具有特殊物理和化学性能的生物聚合物，用于制造可生物降解的微粒。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：B·甘达，G·科拉丁，Y·孟，C·托马辛，H·P·默克尔，
申请(专利权)人：GFF工业方向促进研究公司，
类型：发明
国别省市：