特异性诱导肿瘤细胞凋亡的重组人Fc抗体及其制备方法、用途技术

本发明专利技术提供了一种特异性诱导肿瘤细胞凋亡的重组人Fc抗体及其制备方法、用途，其要点是：通过人工合成方法直接合成人IgG抗体的Fc片段的HC2和HC3区基因片段，同时合成能特异性诱导肿瘤细胞凋亡的VP3基因，构建含Fc‑linker‑VP3单链抗体基因；将上述基因片段亚克隆到pPIC9K载体并转染毕赤酵母系统GS115菌株，或亚克隆到哺乳细胞表达载体及在哺乳细胞中表达重组的人Fc抗体蛋白；此重组人Fc抗体具有激活补体活性，引起ADCC作用，同时有很强的特异性诱导肿瘤细胞凋亡作用，可用于恶性肿瘤的治疗。

【技术实现步骤摘要】
特异性诱导肿瘤细胞凋亡的重组人Fc抗体及其制备方法、用途
本专利技术属抗体制药及其在恶性肿瘤中的应用，尤其是一种特异性诱导肿瘤细胞凋亡的重组人Fc抗体及其制备方法、及用该制备方法获得的制品在恶性肿瘤治疗中的应用。
技术介绍
人体免疫系统是防御体内各种疾病发生发展的重要器官，它担负着免疫防御、免疫监视、免疫耐受和免疫调节4大免疫功能。抗体是执行这4大功能的最重要分子之一。抗体分子是机体受到抗原性物质刺激后产生的免疫球蛋白，它可与相应抗原特异性结合并借助其它免疫功能将抗原清除掉，起到防病的重要作用。抗体分子由4条肽链组成，有2个功能区构成，即特异性结合抗原的氨基端，称为F(ab＇)段，因抗原不同F(ab＇)段的分子结构不同，又称为可变区（V区）；和担负免疫调节功能的羧基端，称为Fc片段，同种生物的Fc片段是相对保守的，又称为恒定区（C区）。根据恒定区的抗原性不同将抗体分为5个同种型，即IgM、IgG、IgA、IgD和IgE；即使是同一类Ig的分子结构也有不同，据此又可将同类Ig分为不同亚类，如人IgG可分为IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。尽管抗体Fc片段不与抗原发生特异性结合，但本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异性诱导肿瘤细胞凋亡的重组人Fc抗体，其特征是：(1)通过人工合成的方法直接获得重组人Fc抗体基因片段，其完整核酸序列为SEQ1，SEQ1序列由下列三个基因片段构成：人IgG H链Fc片段的基因片段、序列为SEQ2；链接片段基因、序列为SEQ2；VP3基因片段、序列为SQE4；(2) 此重组人Fc抗体的完整氨基酸序列为序列SEQ5，该序列由下列3个氨基酸片段构成：IgG H链Fc片段的氨基酸片段、序列为SEQ6；链接片段氨基酸、序列为SEQ7；VP3氨基酸片段、序列为SQE8。

【技术特征摘要】
1.一种特异性诱导肿瘤细胞凋亡的重组人Fc抗体，其特征是：(1)通过人工合成的方法直接获得重组人Fc抗体基因片段，其完整核酸序列为SEQ1，SEQ1序列由下列三个基因片段构成：人IgGH链Fc片段的基因片段、序列为SEQ2；链接片段基因、序列为SEQ2；VP3基因片段、序列为SQE4；(2)此重组人Fc抗体的完整氨基酸序列为序列SEQ5，该序列由下列3个氨基酸片段构成：IgGH链Fc片段的氨基酸片段、序列为SEQ6；链接片段氨基酸、序列为SEQ7；VP3氨基酸片段、序列为SQE8。2.按照权利要求1所述的特异性诱导肿瘤细胞凋亡的重组人Fc抗体，其特征是：所述重组人Fc抗体基因片段亚克隆到酵母表达载体及在酵母细胞中表达；或亚克隆到哺乳细胞表达载体及在哺乳细胞中表达。3.制备权利要求2所述的特异性诱导肿瘤细胞凋亡的重组人Fc抗体的方法，其特征是：(1)重组人Fc抗体酵母工程菌的构建、发酵及回收，将人工合成的基因片段“Fc-linker-VP3”亚克隆到酵母表达载体pPIC9K载体，转化毕赤酵母系统GS115菌株，筛选高效表达细胞株，表达重组人Fc抗体蛋白；(2)重组人Fc抗体蛋白的纯化取发酵培养上清缓慢加入等体积的饱和硫酸铵，混匀后4℃放置4小时以上，4℃下5000g离心20min收集沉淀，沉淀用100ml平衡液溶解，并对平衡液2000平衡液透析12小时以上，中间换夜一次；样品再上用平衡液平衡好的阴离子层析柱或-20℃保存备用，分别用含0.1mol/L、0.2mol/L、0.5mol/L和1mol/LNaCl的平衡液洗脱，收集洗脱峰，SDS电泳鉴定，取含分子量39kD蛋白质部分；用平衡液平衡Separose12层析柱；将上述浓缩的39kD蛋白质部分按床体积的3%比例上样，流...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵洪礼，
申请(专利权)人：沈阳金石生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁,21