The invention relates to a method for producing HPV11L1 protein by Hansen yeast expression system. In particular, the present invention discloses a method for producing recombinant Hansen yeast cells expressing HPV11L1 protein and recombinant Hansen yeast cells produced by the method. The invention also discloses a method for producing HPV11L1 protein by the recombinant Hansen yeast cell and the use of the resulting HPV11L1 protein in the preparation of preventive vaccines.
【技术实现步骤摘要】
用汉逊酵母表达系统产生HPV11L1蛋白的方法专利
本专利技术属于医药生物工程
,涉及产生HPV11L1蛋白的方法,尤其涉及用汉逊酵母表达系统产生HPV11L1蛋白的方法。
技术介绍
人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)是一种无包膜的闭环双链DNA病毒,属乳多空病毒科多瘤病毒亚科,主要侵犯人体的上皮黏膜组织,进而诱发各种良性及恶性增生病变。目前已鉴定出来的不同亚型HPV超过200种,HPV感染具有明显的组织特异性,不同型别的HPV对于皮肤和黏膜的嗜向性不同,能诱发不同的乳头状病变,大约有30多种HPV型别与生殖道感染有关,其中有20多种与肿瘤相关。根据HPV诱发病变的良恶性不同,HPV可大致分为两类:1)高危型(如HPV16、HPV18、HPV45、HPV3l、HPV33、HPV52、HPV58、HPV35、HPV59、HPV56、HPV39、HPV51等):与人类多种组织恶性肿瘤密切相关,主要引起重度不典型增生和浸润癌,尤其以HPV16及HPV18型感染与宫颈癌的发生最为密切,这两个型别感染占宫颈癌感染的70%以上,其中HPV16占50%以上;2)低危型(如HPV6、HPV11、HPV40、HPV42、HPV43、HPV44、HPV54、HPV72、HPV81等):可引起表皮细胞良性增殖性性病,如尖锐湿疣和扁平湿疣等,其中由HPV6与HPV11诱发的尖锐湿疣占90%以上。HPV主要由病毒外壳和基因组DNA构成。基因组长约7900bp,有8个病毒蛋白编码基因。其中6个ORF编码的蛋白在病毒复制的早期表达,称为早期蛋白;2个O ...
【技术保护点】
1.一种产生表达人乳头瘤病毒11型L1(HPV11 L1)蛋白的重组汉逊酵母细胞的方法,其包含以下步骤:a)通过将包含与MOX启动子和MOX终止子可操纵地连接的编码HPV11 L1蛋白的核苷酸序列的外源多核苷酸插入序列示于SEQ ID NO:15的载体来构建表达构建体;b)用步骤a)中获得的表达构建体转化汉逊酵母细胞;和c)用Zeocin和G418对步骤b)中获得的汉逊酵母细胞进行筛选,获得含有所述外源多核苷酸的重组汉逊酵母细胞。
【技术特征摘要】
1.一种产生表达人乳头瘤病毒11型L1(HPV11L1)蛋白的重组汉逊酵母细胞的方法,其包含以下步骤:a)通过将包含与MOX启动子和MOX终止子可操纵地连接的编码HPV11L1蛋白的核苷酸序列的外源多核苷酸插入序列示于SEQIDNO:15的载体来构建表达构建体;b)用步骤a)中获得的表达构建体转化汉逊酵母细胞;和c)用Zeocin和G418对步骤b)中获得的汉逊酵母细胞进行筛选,获得含有所述外源多核苷酸的重组汉逊酵母细胞。2.权利要求1的方法,其中所述HPV11L1蛋白的氨基酸序列示于SEQIDNO:1。3.权利要求2的方法,其中所述编码HPV11L1蛋白的核苷酸序列示于SEQIDNO:4。4.权利要求1的方法,其中步骤b)中通过电穿孔来转化汉逊酵母细胞。5.权利要求1的方法,其中步骤b)中的所述汉逊酵母细胞是ATCC26012汉逊酵母细胞。6.权利要求1的方法,其中步骤c)中用0.25mg/ml的Zeocin和10mg/ml的G418对步骤b)中获得的汉逊酵母细胞进行筛选。7.权利要求1的方法,其中步骤c)中所述筛选包括c1)将步骤b)中获得的汉逊酵母细胞涂布于含0.25mg/mlZeocin的YPD平板中,于37℃倒置培养3-5天;c2)挑取于含0.25mg/mlZeocin的YPD平板上长出的单菌落,接种于5ml含0.25mg/mlZeocin的YPD液体培养基中,于37℃、200rpm摇床培养24-36小时,至OD值达50后,以1:1000的比例转接于5ml含0.25mg/mlZeocin的YPD液...
【专利技术属性】
技术研发人员:班靖洋,刘娟,王贻杰,程海,霍烛,陈丹,李鼎锋,刘勇,
申请(专利权)人:北京安百胜生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:北京,11
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