一种融合表达抗菌肽与红色荧光蛋白的工程菌构建方法技术

本发明专利技术公开了一种融合表达抗菌肽与红色荧光蛋白的工程菌构建方法，在基因工程生产阳离子抗菌肽LfcinB的过程中,将mApple融合头基因与抗菌肽基因连接，构建重组质粒，电转化酿酒酵母W303感受态细胞；使用的技术是PCR、限制性内切酶酶切、连接酶连接和转化等基因工程技术；阳离子抗菌肽是指带有净正电荷的具有抗菌活性的多肽；所使用的载体质粒是携带有酿酒酵母α信号肽基因的质粒pYES2‑α。该酿酒酵母工程菌融合了表达抗菌肽和红色荧光蛋白，让酿酒酵母工程菌具有选择性免疫激活和调节功能，对败血症有良好的预防和保护作用，还可以通过红色荧光蛋白调节酒的不同颜色。

A method for constructing engineering bacteria expressing antibacterial peptide and red fluorescent protein

The invention discloses an engineering bacteria construction method for fusing and expressing antimicrobial peptides and red fluorescent protein. In the process of producing cationic antimicrobial peptides LfcinB by genetic engineering, the mApple fusion head gene is linked with the antimicrobial peptides gene, and the recombinant plasmid is constructed, and the electrotransformation of the competent cells of Saccharomyces cerevisiae W303 is carried out by PCR and restriction. Gene engineering techniques such as endonuclease digestion, ligase ligation and transformation; cationic antimicrobial peptides are polypeptides with net positive charge and antimicrobial activity; the carrier plasmids used are plasmids pYES2 8209 The engineering strain of Saccharomyces cerevisiae fused the expression of antimicrobial peptides and red fluorescent protein, enabling the engineering strain of Saccharomyces cerevisiae to selectively activate and regulate the immune system, has a good preventive and protective effect on sepsis, and can also regulate the different colors of wine through red fluorescent protein.

【技术实现步骤摘要】
一种融合表达抗菌肽与红色荧光蛋白的工程菌构建方法
本专利技术涉及一种酿酒酵母工程菌，具体涉及一种融合表达抗菌肽与红色荧光蛋白的工程菌构建方法。
技术介绍
酿酒酵母是一类单细胞微生物，结构简单，属于真菌类。酿酒酵母具有个体大，蛋白质含量高，杂食性强，易分离，易培养，代谢产物多，综合利用广等特点，在酿酒工业中得到了广泛研究和应用。又称面包酵母或者出芽酵母。酿酒酵母是与人类关系最广泛的一种酵母，不仅因为传统上它用于制作面包和馒头等食品及酿酒，在现代分子和细胞生物学中用作真核模式生物，其作用相当于原核的模式生物大肠杆菌。酿酒酵母是发酵中最常用的生物种类。酿酒酵母的细胞为球形或者卵形，直径5–10μm。其繁殖的方法为出芽生殖。但是现有的酿酒酵母不能融合表达抗菌肽和红色荧光蛋白，不能对败血症有良好的预防和保护作用，也不能通过红色荧光蛋白调节酒的不同颜色。
技术实现思路
本专利技术的目的就在于为了解决上述问题而提供一种融合表达抗菌肽与红色荧光蛋白的工程菌构建方法，从而解决上述问题。为了解决上述技术问题，本专利技术提供了如下的技术方案：本专利技术提供了一种融合表达抗菌肽与红色荧光蛋白的工程菌构建方法，在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种融合表达抗菌肽与红色荧光蛋白的工程菌构建方法，其特征在于，在基因工程生产阳离子抗菌肽LfcinB的过程中, 将mApple融合头基因与抗菌肽基因连接，构建重组质粒，电转化酿酒酵母W303感受态细胞；使用的技术是PCR、限制性内切酶酶切、连接酶连接和转化等基因工程技术。

【技术特征摘要】
1.一种融合表达抗菌肽与红色荧光蛋白的工程菌构建方法，其特征在于，在基因工程生产阳离子抗菌肽LfcinB的过程中,将mApple融合头基因与抗菌肽基因连接，构建重组质粒，电转化酿酒酵母W303感受态细胞；使用的技术是PCR、限制性内切酶酶切、连接酶连接和转化等基因工程技术。2.根据权利要求1所述的一种融合表达抗菌肽与红色荧光蛋白的工程菌构建方法，其特征在于，阳离子抗菌肽是指带有净正电荷的具有抗菌活性的多肽。3.根据权利要求1所述的一种融合表达抗菌肽与红色荧光蛋白的工程菌构建方法，其特征在于，所使用的载体质粒是携带有酿酒酵母α信号肽基因的质粒pYES2-α。4.根据权利要求1、2或3所述的一种融合表达抗菌肽与红色荧光蛋白的工程菌构建方法，其特征在于，构建表达重组阳离子抗菌肽LfcinB酿酒酵母基因工程菌的特征是：（1）含有核苷酸序列：SEQID：NO1：TTTAAATGTAGAAGATGGCAATGGAGAATGAAAAAATTGGGTGCTCCATCTATTACTTGTGTTAGAAGAGCTTTTSEQID：NO2：ATGGTTTCCAAAGGAGAAGAAAATAATATGGCAATCATTAAAGAATTTATGCGATTCAAAGTTCATATGGAAGGCAGTGTTAACGGCCACGAGTTTGAAATCGAAGGCGAAGGGGAAGGAAGACCCTACGAAGCATTCCAGACAGCCAAGCTGAAAGTTACAAAAGGCGGCCCGCTGCCTTTCGCCTGGGATATATTATCACCTCAATTTATGTACGGTTCAAAGGTTTATATCAAACATCCTGCGGACATACCGGACTATTTCAAATTA...

【专利技术属性】
技术研发人员：查向东，恽辉，余忠丽，荣慧杰，葛嫚嫚，张旭冉，
申请(专利权)人：安徽希普生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34