一种新型酿酒酵母表达体系及其构建方法技术

本发明专利技术利用RNA聚合酶I在rDNA基因转录方面的高效作用，用rDNA基因启动子启动外源或内源基因表达，构建了一种新型酿酒酵母表达体系。一种酿酒酵母新型表达体系及其构建方法，包括一种新型表达载体，所述载体从5’到3’依次包括YEplac195质粒骨架、外源基因表达盒、筛选标记基因表达盒；所述外源基因表达盒自上游至下游依次包括rDNA启动子、内部核糖体进入位点（Internal ribosome entry site，IRES）序列、外源基因表达框、poly(T)序列、rDNA终止子；所述筛选标记基因表达盒包括启动子、筛选标记基因、转录终止子。本发明专利技术的表达系统可实现外源基因在酿酒酵母中的高效表达，对酿酒酵母产品开发及基础理论研究具有重要的意义，同时对于酿酒酵母中RNA聚合酶I介导的调控机制和rRNA合成机制的研究也具有重要的意义。

A new expression system of Saccharomyces cerevisiae and its construction method

A novel expression system of Saccharomyces cerevisiae was constructed by utilizing the high efficiency of RNA polymerase I in transcription of rDNA gene and using rDNA gene promoter to promote the expression of exogenous or endogenous genes. A novel expression system of Saccharomyces cerevisiae and its construction method comprise a novel expression vector, which in turn comprises a YEplac195 plasmid skeleton, an exogenous gene expression box and a screening marker gene expression box, and the exogenous gene expression box comprises an rDNA promoter and an internal ribosome entry from upstream to downstream in turn. Internal ribosome entry site (IRES) sequence, foreign gene expression frame, poly (T) sequence, rDNA terminator; the screening marker gene expression box includes promoter, screening marker gene, transcription terminator. The expression system of the invention can realize high-level expression of foreign genes in Saccharomyces cerevisiae, which is of great significance for the development of Saccharomyces cerevisiae products and basic theoretical research, and also has important significance for the regulation mechanism mediated by RNA polymerase I in Saccharomyces cerevisiae and the research of rRNA synthesis mechanism.

【技术实现步骤摘要】
一种新型酿酒酵母表达体系及其构建方法
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种新型酿酒酵母表达体系及其构建方法。
技术介绍
随着基因组学研究的迅速发展，如细菌、酵母、昆虫、哺乳动物细胞等多种表达体系应运而生，以满足挖掘新基因及其新功能，构建新型工程菌等的迫切需求。酵母表达体系有很多，如酿酒酵母、裂殖酵母、毕赤酵母、乳酸克鲁维酵母和产朊假丝酵母等，其中酿酒酵母和毕赤酵母是最常用的两种表达系统。酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae），又称面包酵母，长期应用于酿酒、面包和馒头制作等，安全可靠，不产生毒素，是国际公认的食品安全级（GenerallyRegardedAsSafe，GRAS）真核微生物；由于其菌体细胞富含营养，具很高的经济价值，酵母抽提物或酵母浸出物（YeastExtract）不仅广泛用于微生物、动植物细胞培养，在制药、酿造及发酵食品中有着举足轻重的作用，而且也直接用于饲料及食品添加剂；由于酵母在工业生产中具有良好的发酵性能，在发酵过程中能够快速分裂，容易培养，对杂菌污染具有较强的抗性，遗传背景清晰，基因操作简单等优势，使其在基因工程技术中常被用于代谢工程改造本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新型酿酒酵母表达体系，由表达载体转染宿主构成，其特征在于，所述表达载体为环状，是构建于酿酒酵母和大肠杆菌间的穿梭质粒载体，该载体从5’到3’ 依次包括以下可操作性元件：YEplac195质粒骨架、外源或内源基因表达盒、筛选标记基因表达盒；所述YEplac195质粒是酵母附加体质粒，含有酵母2μ质粒的ori；所述外源或内源基因表达盒自上游至下游依次包括rDNA启动子、内部核糖体进入位点序列、外源或内源基因表达框、poly(T)序列、rDNA终止子；所述筛选标记基因表达盒包括启动子、筛选标记基因、转录终止子。

【技术特征摘要】
1.一种新型酿酒酵母表达体系，由表达载体转染宿主构成，其特征在于，所述表达载体为环状，是构建于酿酒酵母和大肠杆菌间的穿梭质粒载体，该载体从5’到3’依次包括以下可操作性元件：YEplac195质粒骨架、外源或内源基因表达盒、筛选标记基因表达盒；所述YEplac195质粒是酵母附加体质粒，含有酵母2μ质粒的ori；所述外源或内源基因表达盒自上游至下游依次包括rDNA启动子、内部核糖体进入位点序列、外源或内源基因表达框、poly(T)序列、rDNA终止子；所述筛选标记基因表达盒包括启动子、筛选标记基因、转录终止子。2.根据权利要求1所述的表达体系，其特征在于，所述外源或内源基因表达框中外源或内源基因为尿嘧啶基因或GFP基因。3.根据权利要求2所述的外源或内源基因，其特征在于，所述的尿嘧啶基因来源于酿酒酵母，序列如SEQIDNo:4所示。4.根据权利要求1所述的表达体系，其特征在于，所述外源或内源基因表达盒中的rDNA启动子和rDNA终止子，序列分别如SEQIDNo:1和SEQIDNo:2所示；所述外源或内源基因表达盒中的内部核糖体进入位点序列，序列如SEQIDNo:3所示；所述外...

【专利技术属性】
技术研发人员：鲍晓明，徐丽丽，邱晨曦，李洪兴，易勇，张继祥，付传超，王栋，
申请(专利权)人：齐鲁工业大学，山东圣琪生物有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37