【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】在重组宿主中产生甜菊醇糖苷专利技术背景专利
本公开涉及在重组宿主中重组产生甜菊醇糖苷和甜菊醇糖苷前体。具体地，本公开涉及在重组宿主中产生包括以下的甜菊醇糖苷：甜菊醇-13-O-葡糖苷(13-SMG)、甜菊醇-19-O-葡糖苷(19-SMG)、甜菊醇-1，2-二糖苷、甜菊醇-1，3-二糖苷、1，2-甜菊苷、1，3-甜菊苷、甜茶苷(Rubu)、莱鲍迪苷A(RebA)、莱鲍迪苷B(RebB)、莱鲍迪苷C(RebC)、莱鲍迪苷D(RebD)、莱鲍迪苷E(RebE)、莱鲍迪苷F(RebF)、莱鲍迪苷M(RebM)、莱鲍迪苷Q(RebQ)、莱鲍迪苷I(RebI)、杜克苷A、三葡糖基化甜菊醇糖苷、四葡糖基化甜菊醇糖苷、五葡糖基化甜菊醇糖苷、六葡糖基化甜菊醇糖苷、七葡糖基化甜菊醇糖苷或其异构体。相关技术的描述甜味剂作为食品、饮料或糖果工业中最常用的成分是众所周知的。可将甜味剂在产生过程中掺入最终的食品中，也可以在适当稀释下作为佐餐甜味剂或作为烘焙中糖的家用替代品单独使用。甜味剂包括天然甜味剂诸如蔗糖、高果糖玉米糖浆、糖蜜、枫糖浆和蜂蜜以及人工甜味剂诸如阿斯巴甜、糖精和三氯蔗糖。甜叶菊提取物是可从多年生灌木甜叶菊(Steviarebaudiana)中分离和提取的天然甜味剂。甜叶菊在南美洲和亚洲被普遍种植用于商业产生甜叶菊提取物。经过不同程度的纯化的甜叶菊提取物在商业上用作食品和共混合物中的高强度甜味剂，或单独用作佐餐甜味剂。图2中显示了几种甜菊醇糖苷的化学结构，包括二萜甜菊醇和多种甜菊醇糖苷。甜叶菊植物的提取物通常包含有助于甜味的甜菊醇糖苷，尽管每种甜菊醇糖苷的量，除其...
【技术保护点】
1.一种重组宿主细胞，其包含编码多肽的重组基因，所述多肽能够使甜菊醇或甜菊醇糖苷在其C‑19羧基处糖基化并与SEQ ID NO：2或119所示的氨基酸序列具有至少50％序列同一性，其中所述重组宿主细胞能够产生甜菊醇糖苷或甜菊醇糖苷组合物。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.12.10 US 62/265,8951.一种重组宿主细胞，其包含编码多肽的重组基因，所述多肽能够使甜菊醇或甜菊醇糖苷在其C-19羧基处糖基化并与SEQIDNO：2或119所示的氨基酸序列具有至少50％序列同一性，其中所述重组宿主细胞能够产生甜菊醇糖苷或甜菊醇糖苷组合物。2.根据权利要求1所述的重组宿主细胞，其还包含以下的一种或多种：(a)编码能够从法呢基二磷酸(FPP)和异戊烯基二磷酸(IPP)合成牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸(GGPP)的多肽的基因；(b)编码能够从GGPP合成内根-柯巴基二磷酸的多肽的基因；(c)编码能够从内根-柯巴基焦磷酸合成内根-贝壳杉稀的多肽的基因；(d)编码能够从内根-贝壳杉稀合成内根-贝壳杉烯酸的多肽的基因；(e)编码能够还原细胞色素P450复合物的多肽的基因；(f)编码能够从内根-贝壳杉烯酸合成甜菊醇的多肽的基因；(g)编码能够使甜菊醇或甜菊醇糖苷在其C-13羟基处糖基化的多肽的基因；(h)编码能够使甜菊醇糖苷的所述13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖或13-O-葡萄糖和19-O-葡萄糖两者的C3′进行β1，3糖基化的多肽的基因；(i)编码能够使甜菊醇或甜菊醇糖苷在其C-19羧基处糖基化的多肽的基因；(j)编码能够使甜菊醇糖苷的所述13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖或13-O-葡萄糖和19-O-葡萄糖两者的C2′进行β1，2糖基化的多肽的基因；和/或(k)编码能够从GGPP合成内根-柯巴基二磷酸并且从内根-柯巴基焦磷酸合成内根-贝壳杉烯的双功能多肽的基因。其中所述基因中的至少一种是重组基因。3.根据权利要求2所述的重组宿主细胞，其中：(a)所述能够合成GGPP的多肽包括与SEQIDNO：20、SEQIDNO：22、SEQIDNO：24、SEQIDNO：26、SEQIDNO：28、SEQIDNO：30、SEQIDNO：32或SEQIDNO：116所示的氨基酸序列具有至少70％同一性的多肽；(b)所述能够合成内根-柯巴基二磷酸的多肽包括与SEQIDNO：34、SEQIDNO：36、SEQIDNO：38、SEQIDNO：40或SEQIDNO：42所示的氨基酸序列具有至少70％同一性的多肽；(c)所述能够合成内根-贝壳杉烯的多肽包括与SEQIDNO：44、SEQIDNO：46、SEQIDNO：48、SEQIDNO：50或SEQIDNO：52所示的氨基酸序列具有至少70％同一性的多肽；(d)所述能够合成内根-贝壳杉烯酸的多肽包括与SEQIDNO：60、SEQIDNO：62、SEQIDNO：66、SEQIDNO：68、SEQIDNO：70、SEQIDNO：72、SEQIDNO：74、SEQIDNO：76或SEQIDNO：117所示的氨基酸序列具有至少70％同一性的多肽；(e)所述能够还原细胞色素P450复合物的多肽包括与SEQIDNO：78、SEQIDNO：80、SEQIDNO：82、SEQIDNO：84、SEQIDNO：86、SEQIDNO：88、SEQIDNO：90或SEQIDNO：92所示的氨基酸序列具有至少70％同一性的多肽；(f)所述能够合成甜菊醇的多肽包括与SEQIDNO：94、SEQIDNO：97、SEQIDNO：100、SEQIDNO：101、SEQIDNO：102、SEQIDNO：103、SEQIDNO：104、SEQIDNO：106、SEQIDNO：108、SEQIDNO：110、SEQIDNO：112或SEQIDNO：114所示的氨基酸序列具有至少70％同一性的多肽；(g)所述能够使甜菊醇或甜菊醇糖苷在其C-13羟基处糖基化的多肽包括与SEQIDNO：7所示的氨基酸序列具有至少55％同一性的多肽；(h)所述能够使甜菊醇糖苷的所述13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖或13-O-葡萄糖和19-O-葡萄糖两者的C3′进行β1，3糖基化的多肽包括与SEQIDNO：9所示的氨基酸序列具有至少50％同一性的多肽；(i)所述能够使甜菊醇或甜菊醇糖苷在其C-19羧基处糖基化的多肽包括与SEQIDNO：4所示的氨基酸序列具有至少55％同一性的多肽；(j)所述能够使甜菊醇糖苷的所述13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖或13-O-葡萄糖和19-O-葡萄糖两者的C2′进行β1，2糖基化的多肽包括与SEQIDNO：11所示的氨基酸序列具有80％或更高同一性的多肽；与SEQIDNO：13所示的氨基酸序列具有80％或更高同一性的多肽；或与SEQIDNO：16所示的氨基酸序列具有至少65％同一性的多肽；和(k)所述能够从GGPP合成内根-柯巴基二磷酸并且从内根-柯巴基焦磷酸合成内根-贝壳杉烯的双功能多肽包括与SEQIDNO：54、SEQIDNO：56或SEQIDNO：58所示的氨基酸序列具有至少50％同一性的多肽。4.根据权利要求1-3中任一项所述的重组宿主细胞，其中所述重组宿主包括植物细胞、哺乳动物细胞、昆虫细胞、真菌细胞、藻类细胞、古细菌细胞或细菌细胞。5.根据权利要求4所述的重组宿主细胞，其中所述细菌细胞包括埃希氏菌属细胞、乳杆菌属细胞，乳球菌属细胞，棒杆菌属细菌，醋杆菌属细菌，不动杆菌属细菌或假单胞菌属细胞。6.根据权利要求4所述的重组宿主细胞，其中所述真菌细胞包括酵母细胞。7.根据权利要求6所述的重组宿主细胞，其中所述酵母细胞是来自酿酒酵母、粟酒裂殖酵母、解脂耶氏酵母、光滑念珠菌、棉阿舒囊霉、产朊假丝酵母、巴斯德毕赤酵母、乳酸克鲁维酵母、多形汉逊酵母、博伊丁假丝酵母、解腺嘌呤阿氏酵母、红发夫酵母或白色念珠菌种的细胞。8.根据权利要求6或7所述的重组宿主细胞，其中所述酵母细胞是酵母菌。9.根据权利要求6-8中任一项所述的重组宿主细胞，其中所述酵母细胞是来自酿酒酵母种的细胞。10.一种产生甜菊醇糖苷或甜菊醇糖苷组合物的方法，其包括在其中表达所述基因的条件下使权利要求1-9中任一项所述的重组宿主细胞在细胞培养基中生长，其中所述甜菊醇糖苷或所述甜菊醇糖苷组合物由所述重组宿主细胞产生。11.一种用于产生甜菊醇糖苷或甜菊醇糖苷组合物的方法，其包括使用重组多肽，在细胞培养基中进行源自植物的或合成的甜菊醇和/或甜菊醇糖苷的全细胞生物转化，并由此合成所述甜菊醇糖苷，所述重组多肽由权利要求1-9中任一项所述的重组宿主细胞产生，能够使甜菊醇或甜菊醇糖苷在其C-19羧基处糖基化并与SEQIDNO：2或119所示的氨基酸序列具有至少50％序列同一性。12.根据权利要求10或11所述的方法，其还包括分离所述甜菊醇糖苷或所述甜菊醇糖苷组合物。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述分离步骤包括：(a)提供包含所述甜菊醇糖苷或所述甜菊醇糖苷组合物的细胞培养基；(b)将所述细胞培养基的液相与所述细胞培养物的固相分离以获得包含所述甜菊醇糖苷或所述甜菊醇糖苷组合物的上清液；(c)提供一种或多种吸附树脂，包括在填充柱中提供所述吸附树脂；以及(d)使步骤(b)的所述上清液与所述一种或多种吸附树脂接触以获得至少一部分所述甜菊醇糖苷或甜菊醇糖苷组合物，由此分离所述甜菊醇糖苷或所述甜菊醇糖苷组合物。14....
【专利技术属性】
技术研发人员：简·丹诺·迪埃凯，延斯·霍顿拉森，韦罗尼克·杜尚，
申请(专利权)人：埃沃尔瓦公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH
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