The invention relates to a method for improving the production of rabodioside D and rabodioside M. The invention provides a method for recombination of steviol glycosides and a composition comprising steviol glycosides.
【技术实现步骤摘要】
用于提高莱鲍迪苷D和莱鲍迪苷M之产生的方法本申请是申请号为201480007742.5的中国专利申请的分案申请,原申请是2014年2月6日提交的PCT国际申请PCT/EP2014/052363于2015年8月6日进入中国国家阶段的申请。
本文中公开的本专利技术一般地涉及重组产生甜菊醇糖苷(steviolglycoside)的领域。特别地,本专利技术提供了用于重组产生甜菊醇糖苷的方法和包含甜菊醇糖苷的组合物。
技术介绍
甜味剂作为最常用于食品、饮料或糖果业的成分是公知的。甜味剂既可以在生产过程中加入最终食品,也可以在适当稀释的情况下或作为佐餐甜味剂(tabletopsweeter)单独使用。甜味剂包括天然甜味剂(例如蔗糖、高果糖玉米糖浆、糖蜜、枫糖浆和蜂蜜)和人工甜味剂(例如阿斯帕坦、糖精和三氯半乳蔗糖(sucralose))。甜菊提取物(steviaextract)是可从多年生灌木甜菊(Steviarebaudiana)中分离和提取的天然甜味剂。甜菊在南美洲和亚洲被普遍种植用于商业生产甜菊提取物。纯化程度各不相同的甜菊提取物在商业中用作食品中的高甜度甜味剂,以及在共混物中或单独地作为佐餐甜味剂。甜菊属植物的提取物含有莱鲍迪苷(Rebaudioside)和其他带来甜味的甜菊醇糖苷,但不同生产批次之间每种糖苷的量往往不同。现有的商业化产品中主要是莱鲍迪苷A,和量少一些的其他糖苷,例如莱鲍迪苷C、D和F。甜菊提取物还可含有污染物,例如造成异味或具有其他不期望影响的来自植物的化合物。这些污染物根据食物系统或应 ...
【技术保护点】
1.能够从甜菊醇糖苷产生莱鲍迪苷M的重组宿主细胞,所述细胞包含:/n(a)编码能够使所述甜菊醇糖苷的13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖、或13-O-葡萄糖和19-O-葡萄糖二者的C2’位β-1,2糖基化之第一多肽的第一重组基因,其中所述第一多肽包含与SEQ ID NO:16所示氨基酸序列具有65%或更高序列同一性的多肽;以及/n(b)编码能够使所述甜菊醇糖苷的13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖、或13-O-葡萄糖和19-O-葡萄糖二者的C3’位β-1,3糖基化之多肽的基因;/n其中所述甜菊醇糖苷是覆盆子苷、甜菊苷、莱鲍迪苷A或莱鲍迪苷E。/n
【技术特征摘要】
20130206 US 61/761,490;20131003 US 61/886,4421.能够从甜菊醇糖苷产生莱鲍迪苷M的重组宿主细胞,所述细胞包含:
(a)编码能够使所述甜菊醇糖苷的13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖、或13-O-葡萄糖和19-O-葡萄糖二者的C2’位β-1,2糖基化之第一多肽的第一重组基因,其中所述第一多肽包含与SEQIDNO:16所示氨基酸序列具有65%或更高序列同一性的多肽;以及
(b)编码能够使所述甜菊醇糖苷的13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖、或13-O-葡萄糖和19-O-葡萄糖二者的C3’位β-1,3糖基化之多肽的基因;
其中所述甜菊醇糖苷是覆盆子苷、甜菊苷、莱鲍迪苷A或莱鲍迪苷E。
2.能够产生莱鲍迪苷M的重组宿主细胞,所述细胞包含:
(a)编码能够从法尼基二磷酸(FPP)和异戊烯基二磷酸(IPP)合成牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸(GGPP)之多肽的基因;
(b)编码能够从GGPP合成内部柯巴基二磷酸之多肽的基因;
(c)编码能够从内部柯巴基焦磷酸合成内部-贝壳杉烯之多肽的基因;
(d)编码能够从内部-贝壳杉烯合成内部-异贝壳杉烯酸之多肽的基因;
(e)编码能够从内部-异贝壳杉烯酸合成甜菊醇之多肽的基因;
(f)编码能够还原细胞色素P450复合物之多肽的基因;
(g)编码能够使甜菊醇糖苷的13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖、或13-O-葡萄糖和19-O-葡萄糖二者的C2’位β-1,2糖基化之第一多肽的第一基因,其中所述第一多肽包含与SEQIDNO:16所示氨基酸序列具有65%或更高序列同一性的多肽;
(h)编码能够使甜菊醇糖苷的13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖、或13-O-葡萄糖和19-O-葡萄糖二者的C2’位β-1,2糖基化之第二多肽的第二基因,其中所述第二多肽包含与SEQIDNO:15或86所示氨基酸序列具有90%或更高序列同一性的多肽、在SEQIDNO:15的第211和286位残基处具有替换的多肽、或其组合;
(i)编码能够使所述甜菊醇糖苷的13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖、或13-O-葡萄糖和19-O-葡萄糖二者的C3’位β-1,3糖基化之多肽的基因;
(j)编码能够在甜菊醇或甜菊醇糖苷的C-13羟基处将其糖基化之多肽的基因;以及
(k)编码能够在甜菊醇或甜菊醇糖苷的C-19羧基处将其糖基化之多肽的基因;
其中至少一种所述基因是重组基因。
...
【专利技术属性】
技术研发人员:迈克尔·达尔埃格德·米克尔森,约恩·汉森,埃内斯托·西蒙,费代里科·布里安扎,安格利卡·塞姆莱尔,基姆·奥尔森,西蒙·卡尔森,路易斯·迪林,阿列克谢·乌斯片斯基,保拉·希克斯,
申请(专利权)人:埃沃尔瓦公司,
类型:发明
国别省市:瑞士;CH
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