本发明专利技术提供一种添加复合微量元素促进多粘类芽孢杆菌增殖的培养基及其应用方法，提供了培养基中添加复合微量元素的适宜浓度及其具体应用方法。本发明专利技术可提高多粘类芽孢杆菌增殖的生物量，缩短多粘类芽孢杆菌增殖的延迟期，提前增殖的对数期。本发明专利技术对多粘类芽孢杆菌的高效培养具有重要理论意义，对相关生物菌剂的应用具有广泛的推广价值。
A kind of culture medium and its application method of compound microelements to promote the proliferation of Bacillus polymyxa
The invention provides a culture medium and an application method for adding compound microelements to promote the proliferation of Bacillus polymyxa, and a suitable concentration of compound microelements in the culture medium and a specific application method thereof. The invention can improve the biomass of the multiplication of Bacillus polymyxa, shorten the delay period of the multiplication of Bacillus polymyxa, and advance the logarithmic period of the multiplication. The invention has important theoretical significance for the high-efficiency cultivation of polymyxobacillus and wide popularization value for the application of related biological agents.
【技术实现步骤摘要】
一种添加复合微量元素促进多粘类芽孢杆菌增殖的培养基及其应用方法
本专利技术涉及一种添加复合微量元素促进多粘类芽孢杆菌增殖培养基及其应用方法，属于生物农药与生物医药的
技术介绍
人参内生多粘类芽孢杆菌具有多种生理、药理活性。可产生一系列具有生物活性的物质，如固氮酶、植物激素、多糖、水解酶类、抗生素等，在包括生物固氮、促进植物生长、开发新型抗生素、抑制植物病害等方面具有重大的应用价值。随着环境压力的增大和人们对健康及食品安全要求的提高，微生物农药受到越来越多的重视。本专利技术采用人参内生多粘类芽孢杆菌菌株是从人参植株中分离获得的，该菌株的发酵液对人参黑斑病菌（AlternariapanaxWhetz）、人参锈腐菌（CylindrocarpondestructansZinns）、人参菌核病菌（SclerotiniaschinsengWang）、人参立枯病菌（RhizoctoniasolaniKuhn）、人参根腐病菌（FusariumsolaniApp）及人参细菌性软腐病（Erwiniacarotovorasubsp）等病原菌具有明显的防病效果，表现了良好的生防前景。同时，该菌株还具有转化人参皂苷效率高、降低农残活力强等优点。本专利技术可应用在制备防治人参、西洋参等植物病害、生物转化人参皂苷、降低农药残留的菌剂或制剂中，表现了良好的应用前景。研究发现，微量元素之间的复配比例不同对微生物增殖的影响效果也不相同。郝生宏等报道0.72g/kgSe4+、0.20g/kgCo3+、0.24g/kgI-、0.007g/kgMn2+对地衣芽孢杆菌增殖起到显著抑制作用，而0.48g/kgSe4+、0.15g/kgCo3+、0.16g/kgI-、0.01g/kgMn2+对其抑制作用较小。张凯等研究发现，1.0×10-6mol/LZn2+和Se4+复配对纳豆芽孢杆菌的增殖效果影响劣于只添加一种元素。可见，微量元素复配对不同菌株促进增殖作用不同，尚未见Fe2+、Cu2+、Zn2+、Mn2+离子复配对促进多粘类芽孢杆菌增殖作用的研究。本专利技术为了进一步较好地开发利用该菌株进行植物病害的生物防治、生物转化人参皂苷、降低农药残留功能，本专利技术系统研究了微量元素Fe2+、Cu2+、Zn2+及Mn2+复合促进多粘类芽孢杆菌增殖培养基及其应用方法，旨在为该菌株制剂的开发提供依据。
技术实现思路
本专利技术一种添加复合微量元素促进多粘类芽孢杆菌增殖的培养基及其应用方法，该菌株抑菌谱广、抑菌能力强、生物转化人参皂苷效率高、降低农残活力强；用于防治人参、西洋参等植物的病害，转化人参皂苷，降低农药残留。该方法可应用在制备防治人参、西洋参等植物病害、生物转化人参皂苷、降低农药残留的菌剂中。本专利技术所述人参内生多粘类芽孢杆菌（Paenibacilluspolymyxa），已于2013年2月5日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC7250。本专利技术一种添加复合微量元素促进多粘类芽孢杆菌增殖的培养基及其应用方法：（1）一种添加复合微量元素促进多粘类芽孢杆菌增殖的培养基配方为：水为溶剂，Cu2+离子浓度为10mg/L、Fe2+离子浓度为100mg/L、Mn2+离子浓度为50mg/L、Zn2+离子浓度为50mg/L马铃薯200g/1L,葡萄糖20g/L；（2）一种添加复合微量元素促进多粘类芽孢杆菌增殖的培养基应用方法：无菌条件下，向上述（1）灭菌的添加复合微量元素的PDB培养基中，接种活化的OD600值为0.6的多粘类芽孢杆菌菌液，接种量为1%，置于28℃、120r/min条件下恒温震荡培养72h；（3）一种添加复合微量元素促进多粘类芽孢杆菌增殖的培养基应用方法，可提高多粘类芽孢杆菌增殖的生物量，缩短粘类芽孢杆菌增殖的延迟期，提前粘类芽孢杆菌增殖的对数期。具体实施方式本专利技术提供了一种添加复合微量元素促进多粘类芽孢杆菌增殖的培养基及其应用方法，本专利
技术人员可借鉴本
技术实现思路
，适当改进工艺参数实现，所有类似的替换和改动对本领域技术人员是显而易见的，都视为本专利技术。本专利技术所述一种添加复合微量元素促进多粘类芽孢杆菌增殖的培养基及其应用方法已通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。下面结合实施例，进一步阐述本专利技术。实施例1一种添加复合微量元素促进多粘类芽孢杆菌增殖的培养基及其应用方法1.材料与方法1.1材料人参内生多粘类芽孢杆菌（Paenibacilluspolymyxa），本实验室分离鉴定，已于2013年2月5日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC7250；马铃薯，葡萄糖、CuSO4·5H2O、FeSO4·7H2O、ZnSO4·7H2O、MnSO4·H2O、纯净水，其余试剂为分析纯。1.2仪器与设备CHA-S型气浴往返恒温震荡培养箱；TecanInfinite®200Pro型多功能酶标仪。1.3方法采用4因素3水平L9（34）正交实验设计，以Cu2+、Fe2+、Mn2+及Zn2+元素为4因素，以Cu2+、Fe2+、Mn2+及Zn2+的3个质量浓度为3水平，见表1。无菌条件下，向每个灭菌试管中分别加入5mL含Cu2+、Fe2+、Mn2+及Zn2+正交实验设计的不同PDB培养基，每个处理设3次重复，再向每个试管中分别接种0.05ml活化的OD600值为0.6的多粘类芽孢杆菌菌液，置于28℃、120r/min条件下恒温震荡培养。分别于0、12、24、36、48、60、72、84、96、108、120h取样测定OD600值。1.4统计分析所得数据应用SPSS23.0软件进行统计分析。结果与分析由表2可知，添加复合微量元素促进多粘类芽孢杆菌增殖的作用顺序是：Zn2+＞Mn2+＞Fe2+＞Cu2+。表明Zn2+和Mn2+这两个因素对其增殖效果影响较为显著。添加复合微量元素促进多粘类芽孢杆菌增殖的最佳工艺为A1B3C1D2，即Cu2+质量浓度为10mg/L，Fe2+质量浓度为100mg/L，Zn2+质量浓度为50mg/L，Mn2+质量浓度为50mg/L。由表3方差分析可以看出，Zn2+对复合微量元素促进多粘类芽孢杆菌增殖影响最为显著，Mn2+、Fe2+、Cu2+次之，此结果与正交实验结果的极差分析结论一致。3结论添加复合微量元素促进多粘类芽孢杆菌增殖的培养基中微量元素最佳浓度为Cu2+10mg/L，Fe2+100mg/L，Zn2+50mg/L，Mn2+50mg/L。本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种添加复合微量元素促进多粘类芽孢杆菌增殖的培养基及其应用方法，由以下步骤完成：/n（1）一种添加复合微量元素促进多粘类芽孢杆菌增殖的培养基配方为：溶剂为水，Cu2+离子浓度为10mg/L、Fe
【技术特征摘要】
1.一种添加复合微量元素促进多粘类芽孢杆菌增殖的培养基及其应用方法，由以下步骤完成：
（1）一种添加复合微量元素促进多粘类芽孢杆菌增殖的培养基配方为：溶剂为水，Cu2+离子浓度为10mg/L、Fe2+离子浓度为100mg/L、Mn2+离子浓度为50mg/L、Zn2+离子浓度为50mg/L马铃薯200g/1L,葡萄糖20g/L；
（2）一种添加复合微量元素促进多粘类芽...
【专利技术属性】
技术研发人员：郜玉钢，臧埔，赵岩，祝洪艳，何忠梅，王立岩，肖茹雪，张连学，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22
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