【技术实现步骤摘要】
本申请属于生物医药，特别涉及一种具有免疫原性的呼吸道合胞病毒（rsv）多肽及其制备方法和在制备预防rsv感染的疫苗中的应用。
技术介绍
1、呼吸道病毒感染是全球最重要的公共卫生负担之一，每年导致全世界数百万人住院治疗。呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，rsv）是2岁以下儿童和65岁以上成人急性下呼吸道感染的主要原因。尽管rsv感染引起的呼吸道疾病危害严重，但目前尚无专门针对rsv的有效治疗方法和预防性疫苗。纵观全球进入临床阶段的rsv疫苗，研发的主要方向集中在减毒活疫苗、重组亚单位疫苗和病毒载体疫苗。rsv疫苗开发主要针对3种目标人群，包括婴幼儿、孕妇和老年人（≥60岁）。年龄小于6个月的婴儿，主要通过mabs实现被动免疫保护，或由孕妇接种rsv疫苗后经胎盘转移抗体来获得被动保护；对于年龄大于6个月的婴幼儿则可以通过主动免疫rsv减毒活疫苗来获得保护；针对孕妇和老年人，rsv疫苗的开发以亚单位疫苗为主。
2、主流疫苗抗原的选择主要集中在f蛋白，尤其是融合前构象的f蛋白（pref）。融合前构象的f蛋白相比融合后构象的f蛋白可以暴露更多具有中和活性的潜在表位，如仅在pref中存在的表位φ和表位v。针对表位φ和表位v产生的抗体具有优秀的中和活性，与融合前构象的f蛋白结合后，可以阻断通过f蛋白构象变化介导的病毒膜融合。尽管已有大量关于rsv f蛋白融合前构象稳定性的研究，但其作为疫苗使用的安全性和有效性仍面临巨大的挑战。
3、因此，提供一种安全性高且具有增强的免疫原性和改善的
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术提供一种具有免疫原性的呼吸道合胞病毒（rsv）多肽。
2、一方面，本专利技术公开一种具有免疫原性的呼吸道合胞病毒（rsv）多肽，包含rsv f蛋白重组胞外域，对应于seq id no:1所示野生型rsv f蛋白序列的26-513位氨基酸残基，相比于野生型rsv f蛋白包含分子间半胱氨酸取代突变，其中分子间半胱氨酸取代突变选自k75c+e218c、s146c+n460c和a149c+y458c中的1对或2对，优选分子间半胱氨酸取代突变k75c+e218c。
3、本专利技术公开一种具有免疫原性的呼吸道合胞病毒（rsv）多肽，包含rsv f蛋白重组胞外域，对应于seq id no:1所示野生型rsv f蛋白序列的26-513位氨基酸残基，其中所述重组胞外域可以优选包含3类半胱氨酸取代突变，所述半胱氨酸取代突变使得在引入的半胱氨酸残基之间形成二硫键，该二硫键用于稳定蛋白的构型或寡聚状态，诸如融合前构型，其中至少一类为分子间半胱氨酸取代突变，选自k75c+e218c、s146c+n460c和a149c+y458c中的1对或2对，优选k75c+e218c。另一类是n类半胱氨酸取代突变，所述n类半胱氨酸取代的位点在野生型rsv f蛋白氨基酸序列的残基1-300之间，包括1对或2对半胱氨酸取代；第三类是c类半胱氨酸取代突变，所述c类半胱氨酸取代的位点在野生型rsv f蛋白氨基酸序列的残基320-500之间，包括1对或2对半胱氨酸取代。
4、本专利技术技术方案中所述n类半胱氨酸取代突变选自i148c+y286c、s55c+l188c、h159c+i291c和g151c+i288c中一对或两对。
5、本专利技术技术方案中所述c类半胱氨酸取代突变选自k399c+s485c、s443c+s466c、t323c+i475c、i332c+p480c或f387c+i492c。
6、本专利技术技术方案中所述的多肽，其中所述重组胞外域包含如下半胱氨酸取代突变的组合方案之一：
7、a、k75c+e218c、i148c+y286c和f387c+i492c；
8、b、k75c+e218c、i148c+y286c、t323c+i475c；
9、c、k75c+e218c、i148c+y286c、s433c+s466c；
10、d、k75c+e218c、i148c+y286c、k399c+s485c；
11、e、k75c+e218c、g151c+i288c、k399c+s485c；
12、f、k75c+e218c、h159c+i291c、k399c+s485c。
13、本专利技术技术方案中所述的多肽，其中所述重组胞外域还包含空腔填充突变，所述空腔填充突变位点选自野生型rsv f蛋白氨基酸序列的67、495、296和190位中的一个、两个、三个或四个。
14、在一些实施方式中，优选的空腔填充突变是n67f，在另一些实施方式中，优选的空腔填充突变是n67f+s190v+v296f+v495l。
15、本专利技术技术方案中所述的多肽，其中所述重组胞外域还包含增加表达量的突变p102a+i379v+m447v、s46g或g184n。
16、本专利技术中所述的重组胞外域包含只存在于融合前构象中的表位，所述表位包含以seq id no: 1所示的野生型rsv f蛋白序列的残基62-69和196-209。
17、本专利技术技术方案中所述的多肽，其中所述重组胞外域包括至少包含rsv f蛋白的26-105位氨基酸残基的重组f2域和至少包含rsv f蛋白的145-513位氨基酸残基的重组f1域。
18、本专利技术技术方案中所述的多肽，其中所述重组f2域与重组f1域直接或通过linker连接。
19、在一些实施方式中，其中所述重组f2域与重组f1域通过linker连接是指f2域c端与f1域n端被linker连接，例如将f蛋白重组胞外域的106-144位残基被选自ggpggs、gapepge或ggsggsg的linker序列取代。
20、在一些实施方式中，其中所述多肽的c端包括多聚化结构域。
21、在一些实施方式中，其中所述多聚化结构域位于所述重组胞外域的c端，与重组胞外域的c端直接相连或通过接头序列相连。
22、在一些实施方式中，可选地，所述接头序列为gggssgs、gsgsg或g与s组成的4-10个氨基酸序列。
23、在一些实施方式中，其中所述多聚化结构域是三聚化结构域，三聚化结构域促进形成3个f1/f2异二聚体的三聚体。
24、在一些实施方案中，其中所述多聚化结构域是可实现更多聚的结构域，例如可自组装形成二十四聚体的铁蛋白。
25、在一些实施方式中，多聚化结构域优选foldon结构域或ferritin结构域。
26、在本申请中，“ferritin”是指粉纹夜蛾铁蛋白或幽门螺旋杆菌铁蛋白。在本申请中，幽门螺旋杆菌铁蛋白具有单链结构。在本申请中，铁蛋白可以是粉纹夜蛾或幽门螺旋杆菌铁蛋白的突变体。在本申请中，“突变体”通常是指因含有一个或多个差异(突变)而与参比序列不同的序列。该差本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种具有免疫原性的呼吸道合胞病毒（RSV）多肽，包含RSV F蛋白重组胞外域，对应于SEQ ID NO:1所示野生型RSV F蛋白序列的26-513位氨基酸残基，相比于野生型RSV F蛋白包含分子间半胱氨酸取代突变，其中，所述分子间半胱氨酸取代选自K75C+E218C、S146C+N460C和A149C+Y458C中的1对或2对。
2.如权利要求1所述的多肽，相比于野生型RSV F蛋白重组胞外域还包括N类半胱氨酸取代突变，所述N类半胱氨酸取代的位点在野生型RSV F蛋白氨基酸序列的残基1-300之间。
3.如权利要求1所述的多肽，相比于野生型RSV F蛋白重组胞外域还包括C类半胱氨酸取代突变，所述C类半胱氨酸取代的位点在野生型RSV F蛋白氨基酸序列的残基320-500之间。
4.一种具有免疫原性的呼吸道合胞病毒（RSV）多肽，包含RSV F蛋白重组胞外域，对应于SEQ ID NO:1所示野生型RSV F蛋白序列的26-513位氨基酸残基，其中所述重组胞外域包含分子间半胱氨酸取代突变K75C+E218C。
5.如权利要求4所述的
6.如权利要求5所述的多肽，其中所述重组胞外域包含如下半胱氨酸取代突变的组合：
7.如权利要求5所述的多肽，其中所述重组胞外域包含如下半胱氨酸取代突变的组合方案之一：
8.如权利要求7所述的多肽，其中所述重组胞外域还包含空腔填充突变，所述空腔填充突变的位点选自野生型RSV F蛋白氨基酸序列的67、495、296或190位。
9.如权利要求8所述的多肽，其中所述重组胞外域还包含增加表达量的突变P102A+I379V+M447V、S46G或G184N。
10.如权利要求1-9中任一项所述的多肽，其中所述重组胞外域包括至少包含RSV F蛋白的26-105位氨基酸残基的重组F2域和至少包含RSV F蛋白的145-513位氨基酸残基的重组F1域。
11.如权利要求10所述的多肽，其中所述重组F2域与重组F1域直接或通过linker连接。
12.如权利要求11所述的多肽，其中所述重组F2域与重组F1域通过linker连接是指F蛋白重组胞外域的106-144位残基被选自GGPGGS、GAPEPGE或GGSGGSG的linker取代。
13.如权利要求1-9中任一项所述的多肽，其中所述多肽的C端包括三聚化结构域或多聚化结构域。
14.如权利要求13所述的多肽，其中所述三聚化结构域是foldon、GCN4或MTQ结构域，所述多聚化结构域是ferritin结构域。
15.权利要求1-9、11、12或14中任一项所述的多肽在制备预防RSV感染的疫苗中的应用。
16.一种预防RSV感染的疫苗，包含权利要求1-14中任一项的多肽；所述疫苗针对RSV A亚型和/或B亚型中的至少一种感染提供保护。
17.如权利要求16所述的预防RSV感染的疫苗，包含脂质体形式的佐剂。
18.如权利要求17所述的预防RSV感染的疫苗，其中所述脂质体形式的佐剂包括MPL、QS-21和胆固醇成分。
...【技术特征摘要】
1.一种具有免疫原性的呼吸道合胞病毒（rsv）多肽，包含rsv f蛋白重组胞外域，对应于seq id no:1所示野生型rsv f蛋白序列的26-513位氨基酸残基，相比于野生型rsv f蛋白包含分子间半胱氨酸取代突变，其中，所述分子间半胱氨酸取代选自k75c+e218c、s146c+n460c和a149c+y458c中的1对或2对。
2.如权利要求1所述的多肽，相比于野生型rsv f蛋白重组胞外域还包括n类半胱氨酸取代突变，所述n类半胱氨酸取代的位点在野生型rsv f蛋白氨基酸序列的残基1-300之间。
3.如权利要求1所述的多肽，相比于野生型rsv f蛋白重组胞外域还包括c类半胱氨酸取代突变，所述c类半胱氨酸取代的位点在野生型rsv f蛋白氨基酸序列的残基320-500之间。
4.一种具有免疫原性的呼吸道合胞病毒（rsv）多肽，包含rsv f蛋白重组胞外域，对应于seq id no:1所示野生型rsv f蛋白序列的26-513位氨基酸残基，其中所述重组胞外域包含分子间半胱氨酸取代突变k75c+e218c。
5.如权利要求4所述的多肽，相比于野生型rsv f蛋白重组胞外域还包括n类半胱氨酸取代突变选自i148c+y286c、s55c+l188c、h159c+i291c和g151c+i288c中的一对或两对；还包括c类半胱氨酸取代突变是指k399c+s485c、s443c+s466c、t323c+i475c、i332c+p480c或f387c+i492c。
6.如权利要求5所述的多肽，其中所述重组胞外域包含如下半胱氨酸取代突变的组合：
7.如权利要求5所述的多肽，其中所述重组胞外域包含如下半胱氨酸取代突变的组合方案之一：
【专利技术属性】
技术研发人员：胡颖嵩，邓家荔，张元杰，任朵朵，李菡，杨克俭，洪坤学，刘勇，
申请(专利权)人：北京安百胜生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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